与p53-MHC I类复合物结合的T细胞受体样抗体制造技术

本文描述了与肽‑MHC复合物结合的抗体及其片段。具体地，要求保护与肽‑MHC复合物结合的抗体，所述肽‑MHC复合物包含p53肽以及包含由HLA‑A*24等位基因编码α链的MHC I类分子。还公开了包含此类抗体和片段的组合物，以及使用其治疗、预防和诊断癌症的用途和方法。

【技术实现步骤摘要】
与p53-MHCI类复合物结合的T细胞受体样抗体本申请是申请日为2018年3月1日、申请号为201880023533.8、专利技术名称为“与p53-MHCI类复合物结合的T细胞受体样抗体”的专利技术专利申请的分案申请。本申请要求于2017年3月8日提交的SG申请No.10201701883R的优先权，出于各种目的引用其内容和组成并入本文。
本专利技术涉及与肽-MHC复合物结合的抗体，具体地所述肽-MHC复合物包含p53肽和MHCI类分子。
技术介绍
肿瘤抑制基因p53是恶性肿瘤中最常见的突变基因之一。p53转录因子通过调节参与凋亡、衰老、细胞周期停滞和基因组稳定性的基因在肿瘤抑制中起重要作用。p53的突变因而导致功能丧失增加了对肿瘤发生的易感性。在抗肿瘤免疫反应中，免疫系统的关键组成部分是CD8+T细胞反应对肿瘤细胞的细胞毒性。细胞毒性CD8+T细胞通过识别来自细胞内加工的肽来区分肿瘤细胞和正常健康细胞，所述肽通过MHCI类分子，如HLA*A24，呈递至细胞表面。然而，为了使CD8+T细胞进行有效免疫应答，肽-MHC复合物必须是外来的或“非自身的”才能破坏耐受性。p53的突变可能潜在地导致这种与正常健康细胞不同的肽的产生，因此可被T细胞识别以引发强大的抗肿瘤免疫应答。此外，p53突变体在肿瘤细胞中的积累可导致p53降解反应的改变，这反过来导致区分肿瘤细胞和正常细胞的不同的抗原肽库的生成。尽管已经证明治疗性单克隆抗体在癌症治疗领域是成功的，但其受限于癌细胞表面上靶分子的有效性。经典抗体途径无法接触到细胞内蛋白如p53。源自细胞内蛋白的抗原表位呈递为表达于细胞表面的肽-MHC复合物的过程，提供了用单克隆抗体靶向此类抗原的机会。不同的小组已经开发了靶向癌症期间MHCI类分子异常表达的细胞内靶标的抗体。然而，这些抗体主要集中于HLA*A02，其是高加索人种中的主要等位基因，例如在欧洲的14种最常见的HLA*A类型中，HLA*A02代表其中约30％。亚洲的HLA-A分布更分散，HLA*A24和HLA*A11也是常见的等位基因。专利技术概述在一个方面，本专利技术提供一种任选分离的抗体或抗原结合片段，其能够与细胞内蛋白肽和MHCI类分子的复合物结合。在一些实施方案中，所述的细胞内蛋白是p53。另一方面，本专利技术提供一种任选分离的抗体或抗原结合片段，其能够与包含p53肽和MHCI类分子的肽-MHC复合物结合。在根据本专利技术的各个方面的一些实施方案中，所述的MHCI类分子包含由HLA-A*24等位基因编码的MHCI类α链。在一些实施方案中，所述的p53肽包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：SEQIDNO：75所示氨基酸序列或在该氨基酸序列中具有一个或两个或三个氨基酸取代的其变体。在一些实施方案中，所述的抗体或抗原结合片段包含氨基酸序列i)至vi)：i)LC-CDR1：X1GSX2SNIGX3X4YX5X6X7(SEQIDNO：46)；TGTSSDVGGYNYVS(SEQIDNO：29)；或者RASQSIGTDLA(SEQIDNO：21)；ii)LC-CDR2：GNX8NRPS(SEQIDNO：47)；DASNRAT(SEQIDNO：22)；或者DVSSRPS(SEQIDNO：30)；iii)LC-CDR3：QSYDSX9LSX10X11WV(SEQIDNO：48)；QQRSNWPPT(SEQIDNO：23)；或者SSYTVFSTLV(SEQIDNO：31)；iv)HC-CDR1：SGGYYWX12(SEQIDNO：49)；或者X13YYX14H(SEQIDNO：50)；v)HC-CDR2：YIYYSGX15TYYNPSLKS(SEQIDNO：51)；或者WX16X17PX18SX19X20TX2`YAQKFQG(SEQIDNO：52)；vi)HC-CDR3：ENFGX22X23DX24(SEQIDNO：53)；EGADGIYYFDY(SEQIDNO：39)；或者DTYGHDY(SEQIDNO：45)；或其变体，所述变体在序列i)至vi)的一个或多个序列中有一个或两个或三个氨基酸被另一氨基酸取代；其中X1＝T或A，X2＝S或Y，X3＝A或D，X4＝G或D，X5＝D或E，X6＝V或T，X7＝H或N，X8＝N或T，X9＝N或S，X10＝不存在或D，X11＝A或T，X12＝S或A，X13＝G或D，X14＝M或I，X15＝S或T，X16＝I或M，X17＝N或S，X18＝N或D，X19＝A或G，X20＝G或A，X21＝N或Y，X22＝A或S，X23＝F或Y，X24＝H或Y。在一些实施方案中，LC-CDR1是TGSSSNIGADYETH(SEQIDNO：17)，AGSYSNIGDDYETH(SEQIDNO：20)，TGSSSNIGAGYDVH(SEQIDNO：24)，TGSSSNIGAGYDVN(SEQIDNO：27)，TGTSSDVGGYNYVS(SEQIDNo：29)或RASQSIGTDLA(SEQIDNO：21)之一。在一些实施方案中，LC-CDR2是GNTNRPS(SEQIDNO：18)，GNNNRPS(SEQIDNO：25)，DASNRAT(SEQIDNo：22)或DVSSRPS(SEQIDNO：30)之一。在一些实施方案中，LC-CDR3是QSYDSNLSAWV(SEQIDNO：19)，QSYDSNLSDTWV(SEQIDNO：26)，QSYDSSLSAWV(SEQIDNO：28)，QQRSNWPPT(SEQIDNo：23)或SSYTVFSTLV(SEQIDNO：31)之一。在一些实施方案中，HC-CDR1是SGGYYWS(SEQIDNO：32)，SGGYYWA(SEQIDNO：35)，SGGYYWS(SEQIDNO：40)，GYYMH(SEQIDNo：37)或DYYIH(SEQIDNO：43)之一。在一些实施方案中，HC-CDR2是YIYYSGSTYYNPSLKS(SEQIDNO：33)，YIYYSGTTYYNPSLKS(SEQIDNO：41)，WINPNSAGTNYAQKFQG(SEQIDNo：38)或WMSPDSGATYYAQKFQG(SEQIDNO：44)之一。在一些实施方案中，HC-CDR3是ENFGAFDH(SEQIDNO：34)，ENFGSYDY(SEQIDNO：36)，EGADGIYYFDY(SEQIDNo：39)或DTYGHDY(SEQIDNO：45)之一。在一些实施方案中，所述的抗体或抗原结合片段具有至少一个包含以下CDR的轻链可变区：LC-CDR1：TGSSSNIGADYETH(SEQIDNO：17)LC-CDR2：GNTNRPS(SEQIDNO：18)LC-CDR3：QSYDSNLSAWV(SEQIDNO：19)；或者LC-CDR1：AGSYSNIGDDYETH(SEQIDN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含能够结合包含p53的肽和MHC I类分子的肽-MHC复合物的抗体或抗原结合片段。/n

【技术特征摘要】
20170308 SG 10201701883R1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含能够结合包含p53的肽和MHCI类分子的肽-MHC复合物的抗体或抗原结合片段。


2.如权利要求1所述的CAR，其特征在于，所述MHCI类分子包含由HLA-A*24等位基因编码的MHCI类α链。


3.如权利要求1或2所述的CAR，其特征在于，所述p53的肽包含SEQIDNO：75的氨基酸序列，或由其组成，或其变体，所述变体在氨基酸序列中具有一个或两个或三个氨基酸取代。


4.如权利要求1－3中任一项所述的CAR，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段包含氨基酸序列i)至vi)：
i)LC-CDR1：X1GSX2SNIGX3X4YX5X6X7(SEQIDNO：46)；
TGTSSDVGGYNYVS(SEQIDNO：29)；或者
RASQSIGTDLA(SEQIDNO：21)；
ii)LC-CDR2：GNX8NRPS(SEQIDNO：47)；
DASNRAT(SEQIDNO：22)；或者
DVSSRPS(SEQIDNO：30)；
iii)LC-CDR3：QSYDSX9LSX10X11WV(SEQIDNO：48)；
QQRSNWPPT(SEQIDNO：23)；或者
SSYTVFSTLV(SEQIDNO：31)；
iv)HC-CDR1：SGGYYWX12(SEQIDNO：49)；或者
X13YYX14H(SEQIDNO：50)；
v)HC-CDR2：YIYYSGX15TYYNPSLKS(SEQIDNO：51)；或者
WX16X17PX18SX19X20TX2`YAQKFQG(SEQIDNO：52)；
vi)HC-CDR3：ENFGX22X23DX24(SEQIDNO：53)；
EGADGIYYFDY(SEQIDNO：39)；或者
DTYGHDY(SEQIDNO：45)；
或其变体，所述变体在序列i)至vi)的一个或多个序列中有一个或两个或三个氨基酸被另一氨基酸取代；
其中X1＝T或A，X2＝S或Y，X3＝A或D，X4＝G或D，X5＝D或E，X6＝V或T，X7＝H或N，X8＝N或T，X9＝N或S，X10＝不存在或D，X11＝A或T，X12＝S或A，X13＝G或D，X14＝M或I，X15＝S或T，X16＝I或M，X17＝N或S，X18＝N或D，X19＝A或G，X20＝G或A，X21＝N或Y，X22＝A或S，X23＝F或Y，X24＝H或Y。


5.如权利要求1－4中任一项所述的CAR，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段包含：
(i)至少一个包含以下CDR的轻链可变区：
LC-CDR1：TGSSSNIGADYETH(SEQIDNO：17)
LC-CDR2：GNTNRPS(SEQIDNO：18)
LC-CDR3：QSYDSNLSAWV(SEQIDNO：19)；和
至少一个包含以下CDR的重链可变区：
HC-CDR1：SGGYYWS(SEQIDNO：32)
HC-CDR2：YIYYSGSTYYNPSLKS(SEQIDNO：33)
HC-CDR3：ENFGAFDH(SEQIDNO：34)；
或
(ii)至少一个包含以下CDR的轻链可变区：
LC-CDR1：TGSSSNIGADYETH(SEQIDNO：17)
LC-CDR2：GNTNRPS(SEQIDNO：18)
LC-CDR3：QSYDSNLSAWV(SEQIDNO：19)；和
至少一个包含以下CDR的重链可变区：
HC-CDR1：SGGYYWA(SEQIDNO：35)
HC-CDR2：YIYYSGSTYYNPSLKS(SEQIDNO：33)
HC-CDR3：ENFGSYDY(SEQIDNO：36)；
或
(iii)至少一个包含以下CDR的轻链可变区：
LC-CDR1：TGSSSNIGADYETH(SEQIDNO：17)
LC-CDR2：GNTNRPS(SEQIDNO：18)
LC-CDR3：QSYDSNLSAWV(SEQIDNO：19)；和
至少一个包含以下CDR的重链可变区：
HC-CDR1：SGGYYWA(SEQIDNO：35)
HC-CDR2：YIYYSGSTYYNPSLKS(SEQIDNO：33)
HC-CDR3：ENFGAFDH(SEQIDNO：34)；
或
(iv)至少一个包含以下CDR的轻链可变区：
LC-CDR1：TGSSSNIGADYETH(SEQIDNO：17)
LC-CDR2：GNTNRPS(SEQIDNO：18)
LC-CDR3：QSYDSNLSAWV(SEQIDNO：19)；和
至少一个包含以下CDR的重链可变区：
HC-CDR1：SGGYYWS(SEQIDNO：32)
HC-CDR2：YIYYSGSTYYNPSLKS(SEQIDNO：33)
HC-CDR3：ENFGSYDY(SEQIDNO：36)；
或
(v)至少一个包含以下CDR的轻链可变区：
LC-CDR1：AGSYSNIGDDYETH(SEQIDNO：20)
LC-CDR2：GNTNRPS(SEQIDNO：18)
LC-CDR3：QSYDSNLSAWV(SEQIDNO：19)；和
至少一个包含以下CDR的重链可变区：
HC-CDR1：SGGYYWS(SEQIDNO：32)
HC-CDR2：YIYYSGSTYYNPSLKS(SEQIDNO：33)
HC-CDR3：ENFGAFDH(SEQIDNO：34)；
或
(vi)至少一个包含以下CDR的轻链可变区：
LC-CDR1：AGSYSNIGDDYETH(SEQIDNO：20)
LC-CDR2：GNTNRPS(SEQIDNO：18)
LC-CDR3：QSYDSNLSAWV(SEQIDNO：19)；和
至少一个包含以下CDR的重链可变区：
HC-CDR1：SGGYYWA(SEQIDNO：35)
HC-CDR2：YIYYSGSTYYNPSLKS(SEQIDNO：33)
HC-CDR3：ENFGSYDY(SEQIDNO：36)；
或

【专利技术属性】
技术研发人员：汪正一，刘建荣，吴喜华，王蓓，李文心，黄庆文，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG