一种增强Cas9及其衍生蛋白介导的基因操纵系统的方法及应用技术方案

本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体涉及一种增强Cas9及其衍生蛋白介导的基因操纵系统的方法及应用。本发明专利技术提供了一种用于增强Cas9衍生的人工转录因子的方法，即将具有二聚化功能的多肽与Cas9或其衍生蛋白融合。根据上述方法，本发明专利技术将具有二聚化活性的CC结构域与人工激活子dCas9‑TV融合后获得新型人工激活子dCas9‑CCTV。该dCas9‑CCTV发生了蛋白质的二聚化，同时具有比原始dCas9‑TV更强劲的基因激活能力，并且在转基因植株中有着良好的多基因激活能力，可以应用于增强Cas9及其衍生蛋白介导的基因操纵系统，使该系统在基因激活生物体的产生方面具有更好的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种增强Cas9及其衍生蛋白介导的基因操纵系统的方法及应用
本专利技术属于基因工程
，涉及增强Cas9及其衍生蛋白介导的基因编辑或表达调控的方法，具体涉及一种增强Cas9及其衍生蛋白介导的基因操纵系统的方法及应用。
技术介绍
近年来，基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑技术因其简捷、高效等特点被广泛应用于生物基因功能研究、人类临床疾病治疗和作物遗传改良等领域。该系统主要由核酸酶Cas9以及向导RNA(sgRNA)组成。在sgRNA的引导下，Cas9结合于靶标基因位点处，行使核酸酶功能，产生DNA双链断裂，然后由细胞内源修复机制带来突变。科研人员发现，当通过D10A或H840A的氨基酸突变使Cas9的核酸酶活性部分或全部丧失时，其仍具有在sgRNA引导下结合靶标基因位点的功能。根据这一特性，科研人员将具有转录激活活性、转录抑制活性、胞嘧啶脱氨活性或腺嘌呤脱氨活性的多肽分别与前述核酸酶活性部分或全部丧失的Cas9蛋白融合，开发了一系列基于CRISPR/Cas9的转录调控工具和单碱基编辑工具[统称“基因操纵(genemanipula本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于增强Cas9衍生的人工转录因子的方法，其特征在于，将具有二聚化功能的多肽与Cas9或其衍生蛋白融合。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于增强Cas9衍生的人工转录因子的方法，其特征在于，将具有二聚化功能的多肽与Cas9或其衍生蛋白融合。


2.根据权利要求1所述的一种用于增强Cas9衍生的人工转录因子的方法，其特征在于，所述具有二聚化功能的多肽包括但不限于来自于酵母转录激活子GCN4的螺旋卷曲结构域，所述螺旋卷曲结构域的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。


3.根据权利要求1所述的一种用于增强Cas9衍生的人工转录因子的方法，其特征在于，所述Cas9包括但不限于SpCas9、SaCas9、ScCas9，及其变体。


4.根据权利要求1所述的一种用于增强Cas9衍生的人工转录因子的方法，其特征在于，所述Cas9衍生的人工转录激活子包括但不限于人工转录激活子dCas9-TV。


5.根据权利要求1所述的一种用于增强Cas9衍生的人工转录因子的方法，其特征在于，所述具有二聚化功能的多肽与Cas9或其衍生蛋白通过接头融合连接。


6.采用权利要求1-5任一项所述的方法制备得到的Cas9衍生的人工转录激活子。


7.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：李剑峰，熊翔宇，梁洁坪，黎镇祥，龚本强，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44