一种Cas9蛋白的表达纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种Cas9蛋白的表达纯化方法，属于生物技术和基因工程技术领域。通过选择带有His6标签的Cas9蛋白外源质粒在大肠杆菌表达系统中大量表达，并最终采用Ni

【技术实现步骤摘要】
一种Cas9蛋白的表达纯化方法
本专利技术属于生物技术和基因工程
，具体涉及一种Cas9蛋白的表达纯化方法。
技术介绍
近年来，基因治疗随着DNA重组技术和基因克隆技术的发展成为最具革命性的医学技术之一，引起了人们的广泛关注。基因编辑作为基因治疗的重要手段之一，是能对生物体基因组特定目标基因进行精确修饰的一种基因工程技术。CRISPR/Cas9系统是继锌指核酸内切酶(zincfingernuclease,ZFN)、类转录激活因子效应物核酸酶(transcriptionactivator-likeeffectornuclease,TALEN)之外出现的第三代基因编辑技术，其介导的基因编辑可用于生成转基因模型、调节转录、调控表观遗传等。CRISPR/Cas9系统主要是由Cas9蛋白和单链导向RNA(singleguideRNA,sgRNA)组成，Cas9蛋白在sgRNA的导向作用下造成DNA双链断裂，二者形成的核糖蛋白复合物具有基因编辑的性能，因此Cas9蛋白是该基因编辑药物的重要组成元件之一。目前，Cas9蛋白在纯化过程中容易出现内本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Cas9蛋白的表达纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤1，将pET-28b-Cas9-His6质粒转入宿主细胞

【技术特征摘要】
1.一种Cas9蛋白的表达纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1，将pET-28b-Cas9-His6质粒转入宿主细胞E.coliRosetta(DE3)pLysS，获得重组菌株Rosetta(DE3)pLysS；
步骤2，将重组菌株转接活化，采用IPTG对重组菌株诱导表达Cas9蛋白，菌液离心收集菌体，获得含有Cas9蛋白的大肠杆菌菌体；
步骤3，用缓冲液将上述所得菌体重悬，超声破菌，收集上清；
步骤4，将收集得到的上清经Ni-NTA树脂柱，清洗液清洗后，用洗脱液洗脱蛋白得Cas9蛋白溶液；
步骤5，将得到的Cas9蛋白溶液超滤浓缩，即得Cas9蛋白。


2.根据权利要求1所述的表达纯化方法，其特征在于：步骤2中将重组菌株转接至5m...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴正红，潘秀华，祁小乐，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32