一种联合检验COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡制造技术

本发明专利技术公开了一种联合检验新型冠状病毒COVID‑19 N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，由卡壳、设置于卡壳上的两个加样孔和含有N抗原检测试纸条或S蛋白抗体检测试纸条的两个观察窗构成，其中所述检测试纸条由依次相连的样品垫、结合垫、反应垫和吸水垫构成；本发明专利技术通过同时检测新型冠状病毒N抗原及S蛋白抗体的IgM抗体和IgG抗体，能够快速确定被检者是否感染新型冠状病毒COVID‑19，避免了“假阴性”结果，为临床诊治新型冠状病毒肺炎提供了帮助。本发明专利技术的胶体金免疫层析检测卡特异性强，检测速度快、操作简便，无需专门设备，也不需要专业人员的操作，可广泛应用于社区、基层医院、机场、海关甚至家庭等多种场所的辅助筛查。

【技术实现步骤摘要】
一种联合检验COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡
本专利技术涉及一种联合检测病毒抗原和抗体的检测卡，尤其涉及一种联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，属于生物检测

技术介绍
新型冠状病毒COVID-19感染的肺炎以发热、乏力、干咳等症状为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等上呼吸道和消化道症状。重症病例多在1周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。迄今COVID-19还没有针对性的特效药。一些个案报道的治疗药物仍需更多的临床实践证明效果，相关疫苗的研发也在开展中，但距离临床应用尚需时间。眼下当务之急应是尽快研究有效的诊断试剂，采取早诊断、早隔离、切断传播途径，控制疫情蔓延。目前针对新型冠状病毒COVID-19的检测主要是以PCR为基础的病毒核酸检测，其检测原理是以病毒独特的基因序列为检测靶标，通过PCR扩增，使靶标DNA序列指数级增加，每一个扩增出来的DNA序列，都可与预先加入的一段荧光标记探针结合，产生荧光信号，扩增出来的靶基因越多，累积的荧光信号就越强，意味着有被检病毒。而没有病毒的样本中，由于没有靶标DNA序列扩增，因此就检测不到荧光信号增强。所以，核酸检测，其实就是通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否有病毒核酸。新型冠状病毒COVID-19感染的肺炎以发热、乏力、干咳等症状为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等上呼吸道和消化道症状。重症病例多在1周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。迄今COVID-19还没有针对性的特效药。一些个案报道的治疗药物仍需更多的临床实践证明效果，相关疫苗的研发也在开展中，但距离临床应用尚需时间。眼下当务之急应是尽快研究有效的诊断试剂，采取早诊断、早隔离、切断传播途径，控制疫情蔓延。目前针对新型冠状病毒COVID-19的检测主要是以PCR为基础的病毒核酸检测，其检测原理是以病毒独特的基因序列为检测靶标，通过PCR扩增，使靶标DNA序列指数级增加，每一个扩增出来的DNA序列，都可与预先加入的一段荧光标记探针结合，产生荧光信号，扩增出来的靶基因越多，累积的荧光信号就越强，意味着有被检病毒。而没有病毒的样本中，由于没有靶标DNA序列扩增，因此就检测不到荧光信号增强。所以，核酸检测，其实就是通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否有病毒核酸。新型冠状病毒COVID-19核酸检测有较高的特异性和灵敏度，但是该检测方法对技术要求高，对新型冠状病毒的检测用时长，容易出现假阴性，标本需要特殊处理，还要求具备PCR扩增仪及凝胶电泳等专业的仪器设备，需专业技术人员操作和判断才能给出检测结果。不便应用于社区、基层医院、机场、海关甚至家庭等基层对新型冠状病毒COVID-19的早期初步筛查。基于此，亟需一种更早期、更准确、更快捷、更有效的检测新型冠状病毒COVID-19的诊断试剂或试剂盒，以便于进行早期鉴别辅助诊断。胶体金免疫层析技术是近年来发展迅速的一种简便、快速的免疫学检测方法，但是目前国内关于胶体金免疫层析技术检测新型冠状病毒COVID-19的研究报道较少，经检索目前市面上还没有通过同时检测新型冠状病毒COVID-19N抗原及S蛋白抗体的IgM抗体和IgG抗体，能够准确的判断机体的免疫学反应状态的有关联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡的报道。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术要解决的问题是提供一种联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡。本专利技术所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，所述检测卡由卡壳、设置于卡壳上的两个加样孔和含有COVID-19N抗原检测试纸条或COVID-19S蛋白抗体检测试纸条的两个观察窗构成，其特征在于：所述卡壳上的加样孔与观察窗间隔状直线排列，每组加样孔与观察窗同方向设置且间隔状平行排列；所述COVID-19N抗原检测试纸条由依次相连的第一样品垫、第一结合垫、第一反应垫和第一吸水垫构成；其中所述第一结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒COVID-19N蛋白单克隆抗体，所述第一反应垫上沿样品流动方向依次设有第一检测线和第一质控线，第一检测线上包被有新型冠状病毒COVID-19N蛋白捕获抗体，第一质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述COVID-19S蛋白抗体检测试纸条由依次相连的第二样品垫、第二结合垫、第二反应垫和第二吸水垫构成；其中所述第二结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白抗原；所述第二反应垫上沿样品流动方向依次设有第二检测线、第三检测线和第二质控线，第二检测线上包被有抗人IgM抗体，所述第三检测线上包被有抗人IgG抗体，第二质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述COVID-19N抗原检测试纸条或COVID-19S蛋白抗体检测试纸条分别设置在卡壳上的每组加样孔与观察窗所在的位置，每组中的加样孔与所述第一样品垫或第二样品垫相对应，组中相应的观察窗与所述第一反应垫或第二反应垫相对应；所述第一反应垫上的第一检测线与第一质控线的间距不少于1cm，所述第二反应垫上第二检测线、第三检测线和第二质控线之间的距离不少于1cm。本专利技术中对胶体金的具体的制备方法没有特别的限制，为本领域技术人员熟知的制备方法即可，例如：采用柠檬酸三钠还原法制备等方法，可以通过调节氯金酸和柠檬酸三钠的加入比例来改变和控制胶体金的粒径大小。对胶体金具体的标记过程不作特别限定，采用本领域技术人员熟知的方法即可。上述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，优选的实施方式是：所述胶体金标记中所采用的胶体金的粒径为20-30nm；胶体金的质量比浓度为万分之六。针对新型冠状病毒COVID-19这种新型冠状病毒的检测，如何提高检测的灵敏度仍然是技术难题。专利技术人在研究中发现，即使参照现有的冠状病毒胶体金免疫层析试纸条制备新型冠状病毒COVID-19胶体金免疫层析试纸条，检测的灵敏度不高。为了解决现有技术中针对新型冠状病毒COVID-19检测N抗原时的胶体金免疫层析试纸条灵敏度低的技术问题，专利技术人进一步深入研究发现，通过在胶体金标记中采用粒径为20-30nm的胶体金，使所述胶体金的浓度为万分之六，检测N抗原时，采用喷有胶体金标记的新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体作为检测抗体，并在第一检测线上包被新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体，可以提高N抗原检测时的灵敏度。上述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，优选的实施方式是：所述新型冠状病毒COVID-19N蛋白单克隆抗体与胶体金的结合浓度为每100ml体金浓液加入0.8mgN蛋白单克隆抗体；所述新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白抗原与胶体金的结合浓度为每100ml体金浓液加入0.8mg本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，所述检测卡由卡壳、设置于卡壳上的两个加样孔和含有COVID-19N抗原检测试纸条或COVID-19S蛋白抗体检测试纸条的两个观察窗构成，其特征在于：/n所述卡壳上的加样孔与观察窗间隔状直线排列，每组加样孔与观察窗同方向设置且间隔状平行排列；所述COVID-19N抗原检测试纸条由依次相连的第一样品垫、第一结合垫、第一反应垫和第一吸水垫构成；其中所述第一结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒COVID-19N蛋白单克隆抗体，所述第一反应垫上沿样品流动方向依次设有第一检测线和第一质控线，第一检测线上包被有新型冠状病毒COVID-19N蛋白捕获抗体，第一质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述COVID-19S蛋白抗体检测试纸条由依次相连的第二样品垫、第二结合垫、第二反应垫和第二吸水垫构成；其中所述第二结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白抗原；所述第二反应垫上沿样品流动方向依次设有第二检测线、第三检测线和第二质控线，第二检测线上包被有抗人IgM抗体，所述第三检测线上包被有抗人IgG抗体，第二质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述COVID-19N抗原检测试纸条或COVID-19S蛋白抗体检测试纸条分别设置在卡壳上的每组加样孔与观察窗所在的位置，每组中的加样孔与所述第一样品垫或第二样品垫相对应，组中相应的观察窗与所述第一反应垫或第二反应垫相对应；所述第一反应垫上的第一检测线与第一质控线的间距不少于1cm，所述第二反应垫上第二检测线、第三检测线和第二质控线之间的距离不少于1cm。/n...

【技术特征摘要】
1.一种联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，所述检测卡由卡壳、设置于卡壳上的两个加样孔和含有COVID-19N抗原检测试纸条或COVID-19S蛋白抗体检测试纸条的两个观察窗构成，其特征在于：
所述卡壳上的加样孔与观察窗间隔状直线排列，每组加样孔与观察窗同方向设置且间隔状平行排列；所述COVID-19N抗原检测试纸条由依次相连的第一样品垫、第一结合垫、第一反应垫和第一吸水垫构成；其中所述第一结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒COVID-19N蛋白单克隆抗体，所述第一反应垫上沿样品流动方向依次设有第一检测线和第一质控线，第一检测线上包被有新型冠状病毒COVID-19N蛋白捕获抗体，第一质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述COVID-19S蛋白抗体检测试纸条由依次相连的第二样品垫、第二结合垫、第二反应垫和第二吸水垫构成；其中所述第二结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白抗原；所述第二反应垫上沿样品流动方向依次设有第二检测线、第三检测线和第二质控线，第二检测线上包被有抗人IgM抗体，所述第三检测线上包被有抗人IgG抗体，第二质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述COVID-19N抗原检测试纸条或COVID-19S蛋白抗体检测试纸条分别设置在卡壳上的每组加样孔与观察窗所在的位置，每组中的加样孔与所述第一样品垫或第二样品垫相对应，组中相应的观察窗与所述第一反应垫或第二反应垫相对应；所述第一反应垫上的第一检测线与第一质控线的间距不少于1cm，所述第二反应垫上第二检测线、第三检测线和第二质控线之间的距离不少于1cm。


2.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，其特征在于：所述胶体金标记中所采用的胶体金的粒径为20-30nm；胶体金的质量比浓度为万分之六。


3.根据权利要求1或2所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，其特征在于：所述新型冠状病毒COVID-19N蛋白单克隆抗体与胶体金的结合浓度为每100ml体金浓液加入0.8mgN蛋白单克隆抗体；所述新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白抗原与胶体金的结合浓度为每100ml体金浓液加入0.8mg重组S蛋白抗原。


4.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，其特征在于：第一检测线上包被有浓度为1.2mg/ml的新型冠状病毒COVID-19N蛋白捕获抗体；第二检测线上包被有浓度为1.8mg/ml的抗人IgM抗体，所述第三检测线上包被有浓度为1.6mg/ml的抗人IgG抗体。


5.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，其特征在于：第二结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白抗原及鼠IgG，其中重组S蛋白抗原与鼠IgG的体积比为2:1。


6.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈振，李焕杰，欧兰香，王岩，丁兴龙，郎伟超，汪运山，朱之炜，
申请(专利权)人：山东莱博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37