【技术实现步骤摘要】
一种检测糖基化CD59的磁性微球检测试剂盒及其应用
[0001]本专利技术涉及一种糖基化CD59(gCD59)的检测,尤其涉及一种检测糖基化CD59的磁性微球检测试剂盒及其应用,属于临床检验
技术介绍
[0002]糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。长期存在的高血糖,导致各种组织,特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。在糖尿病患者人群中70%患者全身小血管和微血管出现增殖性病变,其发病机制与长期血糖升高、糖化蛋白终产物增多,细胞间粘附分子表达、某些细胞因子的增多及多糖类物质沉积与血管内皮下而引起的血管基底膜增厚有关。
[0003]糖基化CD59(gCD59)是一种新的生物标志物。CD59是一种补体调节蛋白,可保护“自身”细胞免受补体介导的损伤(Davies CS等。Glycation of CD59 impairs complement regulation on erythrocytes from diabetic subjects]。在糖尿病中,CD59被非酶糖基化物灭活,形成gCD59。血浆gCD59是一种可溶形式的CD59从细胞膜脱落。CD59是补体细胞溶解膜攻击复合物(MAC)分布广泛的膜结合抑制剂。CD59通过与新生MAC中的C8和/或C9结合而起作用,并干扰C9膜的插入和聚合。这种存在于所有细胞中的蛋白质通过一个脂尾锚定在膜的外表面。因此,它暴露于细胞外液和细胞外液中的葡萄糖水平。从细胞膜上脱落的可溶性CD59存在于循环和尿液中。已有研究表明,gCD59在糖尿病患者血 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测糖基化CD59的磁性微球检测试剂盒,由设在盒体内的偶联抗gCD59单克隆抗体的磁微球、gCD59标准品梯度溶液、样品稀释液、过氧化物酶标记的抗CD59单克隆抗体酶结合物、20
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浓缩洗涤液、发光液构成;其特征在于:所述磁微球偶联有浓度为30μg/mg的抗gCD59的鼠单克隆抗体Mab1;该磁性微球的工作浓度为0.2mg/mL,稀释液为保存液;所述gCD59标准品梯度溶液分别是:浓度梯度为0pg/mL、10pg/mL、100pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL、2000pg/mL的7个标准品溶液,其中0pg/mL为标准品缓冲液;所述样品稀释液的配方是:除菌的1000mL纯水中,含NaCl 8g、NaH2PO4·
2H2O 0.2g、Na2HPO4·
12H2O 2.9g、SDS 0.1g、酪蛋白钠盐5g、TritonX
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100 0.1mL、Proclin300 1mL;所述过氧化物酶标记的抗CD59单克隆抗体酶结合物是辣根过氧化物酶标记的抗CD59鼠单克隆抗体Mab2;该酶标抗CD59鼠单克隆抗体Mab2酶结合物工作效价为1:10000,稀释液为酶结合物稀释液;所述20
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浓缩洗涤液的配方是:除菌的50mL双蒸水中,含NaCl 8.0g、NaH2PO4·
2H2O 0.2g、Na2HPO4·
12H
2 O 2.9g、吐温20 0.5mL;所述发光液包括A液和B液,浓度为3.0mmol/L的鲁米诺溶液与0.3mmol/L对碘苯酚溶液等体积比的混合液,命名为A液;浓度为7.5mmol/L的双氧水,命名为B液;使用时将A液与B液按体积比1﹕1混合。2.根据权利要求1所述检测糖基化CD59的磁性微球检测试剂盒,其特征在于,所述磁微球的制备方法是:1.1)配制偶联缓冲液:即配制0.01mol/L的MES缓冲溶液,并调整pH值为6.0;MES
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1.95g纯化水
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定容至1000mL过滤除菌,4℃保存;1.2)配制洗涤液,洗涤液的配方及制法是:过滤除菌,4℃保存;1.3)配制保存液,保存液的配方及制法是:
过滤除菌,4℃保存;1.4)偶联操作(1)抗体酸化处理酸处理:取1mL 5mg/mL抗体Mab1溶液至2.0mL低吸附EP管,向EP管加入0.2mL酸化处理液A,室温40rpm滚轴混匀30min;中和:向酸处理后的抗体溶液中加入0.4mL处理液B中和,缓慢吸打后备用;处理液A:硼酸
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1.06g磷酸二氢钠
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2.34g超纯水
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定容至100mL调pH2.0过滤除菌,4℃保存;处理液B:硼酸
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1.06g磷酸二氢钠
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2.34g超纯水
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定容至100mL调pH...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈振,欧兰香,武建伟,张绍明,王岩,韩淑毅,
申请(专利权)人:山东莱博生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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