一种新型冠状病毒中和抗体定量检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒中和抗体定量检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及一种冠状病毒中和抗体的检测，尤其涉及一种新型冠状病毒(SARS
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2)中和抗体定量检测试剂盒及其应用，属于临床检验


技术介绍

[0002]自2019年新型冠状病毒(SARS
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2，以下简称新冠)被报道以来，新冠疫情在全世界持续蔓延，且感染例数不断攀升。为有效应对疫情，世界各国都在加紧新冠疫苗的研发，到目前为止，各个国家和地区已相继批准多个疫苗用于人群接种。截至2021年8月，中国已完成新冠疫苗接种19亿剂次。
[0003]在疫苗临床有效性的评价中，疫苗保护效力(即评价接种疫苗后所预防疾病的发病率下降百分比)是最为关键的评价指标。同时，中和抗体的检测对于评价疫苗接种后人体免疫应答水平等也起到非常重要的作用。
[0004]中和抗体检测的实验室金标准是感染抑制试验，主要包括利用活病毒进行的蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test，PRNT)和通过检测细胞病变(cytopathic effect，CPE)量来进行分析的微量细胞中和试验。这两种方法均使用定量的活病毒与不同稀释度的等量血清混合后，接种预先准备好的单层细胞，通过不同的指标评价细胞的病变程度评价中和抗体效价。采用体外培养的活病毒进行的中和试验反映的是人体血液样本中能够阻断病毒感染的总中和抗体的效价。但试验方法需要专业细胞培养过程，对实验等级要求高，周期长、操作复杂，不适合普通接种疫苗人群高通量筛查。
[0005]目前，国内外很多科研机构和企业将中和抗体检测试剂作为研发方向，进行了很多探索。一般是基于单抗原表位或多抗原表位采用竞争抑制原理的酶联免疫法进行中和抗体检测。产品拟定预期用途与疫苗接种后有效性评价有关。但上述产品或技术均为中和抗体体外诊断定性产品，无法有效评价中和抗体的浓度值与疫苗保护效力的相关性。经检索，有关能够准确对新冠疫苗注射人群体内的新型冠状病毒中和抗体进行精确定量测定以及对中和抗体亲和力测定并利于对疫苗保护效力做出评价的检测试剂盒及其制备方法与应用还未见报道。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足，本专利技术要解决的问题是提供一种新型冠状病毒(SARS
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2)中和抗体定量检测试剂盒及其应用。
[0007]本专利技术所述的新型冠状病毒SARS
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2中和抗体定量检测试剂盒，由设在盒体内的包被有新冠病毒S1蛋白的微孔板1、包被有AXL蛋白和ACE2蛋白的微孔板2、中和抗体标准品溶液、阳性对照、阴性对照、样品稀释液、重组RBD+NTD蛋白酶结合物、20
×
浓缩洗涤液、显示液A、显示液B、终止液和说明书构成；
[0008]其特征在于：
[0009]所述微孔板1为聚苯乙烯微孔板，其各孔包被有浓度为1
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5μg/ml的新冠病毒S1蛋
白；
[0010]所述微孔板2为聚苯乙烯微孔板，其各孔包被有浓度为1
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5μg/ml AXL蛋白即酪氨酸蛋白激酶受体UFO和2
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5μg/ml ACE2蛋白即血管紧张素转换酶2，其中所述AXL蛋白与ACE2蛋白在每微孔中包被比例量为1:2～1:4；
[0011]所述中和抗体标准品溶液为含RBD中和抗体和NTD中和抗体的混合液，其中RBD中和抗体与NTD中和抗体的摩尔比为2:1；该标准品溶液为浓度梯度分别是0AU/mL、0.1563AU/mL、0.3125AU/mL、0.625AU/mL、1.25AU/mL、2.5AU/mL、5AU/mL的7个标准品溶液，其中0AU/mL为标准品缓冲液即：pH7.4磷酸盐缓冲液；
[0012]所述阳性对照为3ug/ml的RBD中和抗体和1ug/ml的NTD中和抗体的混合液；
[0013]所述阴性对照为正常人新冠病毒SARS
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2抗体阴性血清；
[0014]所述样品稀释液的配方是：除菌的1000mL纯水中，含NaCl 8g、NaH2PO4·
2H2O 0.2g、Na2HPO4·
12H2O 2.9g、CTAB 1g、BSA 5g、TritonX
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100 0.1mL、Proclin300 1mL，pH 7.4；
[0015]所述RBD+NTD蛋白酶结合物是辣根过氧化物酶标记的重组RBD+NTD蛋白酶结合物；该酶标酶结合物工作效价为1:7000，稀释液为酶结合物稀释液，该酶结合物稀释液的配方是：除菌的1000mL纯水中，含NaCl 8g、NaH2PO4·
2H2O 0.2g、Na2HPO4·
12H2O 2.9g、BSA 3.5g、Proclin300 1mL；
[0016]所述20
×
浓缩洗涤液的配方是：除菌的50mL双蒸水中，含NaCl 8.0g、NaH2PO4·
2H2O 0.2g、Na2HPO4·
12H2O 2.9g、吐温20 0.5mL；
[0017]所述显示液A是浓度为0.3mg/mL的四甲基联苯胺(TMB)溶液；所述显示液B是浓度为0.74mg/mL的过氧化脲溶液；使用时将显示液A与显示液B按体积比1﹕1混合；
[0018]所述终止液是浓度为2mol/L的硫酸溶液。
[0019]上述的新型冠状病毒SARS
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2中和抗体定量检测试剂盒中：所述微孔板1各孔优选包被有浓度为3μg/ml的新冠病毒S1蛋白；所述微孔板2各孔优选包被有浓度为2μg/ml AXL蛋白即酪氨酸蛋白激酶受体UFO和4μg/ml ACE2蛋白即血管紧张素转换酶2，其中所述AXL蛋白与ACE2蛋白在每微孔中包被比例量优选为1:2。
[0020]上述的新型冠状病毒SARS
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2中和抗体定量检测试剂盒中：所述的RBD中和抗体是利用灭活的新型冠状病毒感染者血清经过装有重组RBD蛋白偶联的琼脂糖微球层析柱过滤，RBD中和抗体会结合到琼脂糖微球上，经过洗杂、洗脱得到纯化的RBD中和抗体，经过效价检测和筛选，经测定的RBD中和抗体可变区序列并与人源化Fc融合，通过CHO细胞重组表达获得；所述的NTD中和抗体是利用灭活的新型冠状病毒感染者血清经过装有重组NTD蛋白偶联的琼脂糖微球层析柱过滤，NTD中和抗体会结合到琼脂糖微球上，经过洗杂、洗脱得到纯化的NTD中和抗体，经过效价检测和筛选，经测定的NTD中和抗体可变区序列并与人源化Fc融合，通过CHO细胞重组表达获得。
[0021]本专利技术所述新型冠状病毒SARS
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2中和抗体定量检测试剂盒在检测含新型冠状病毒中和抗体生物样本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒SARS
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2中和抗体定量检测试剂盒，由设在盒体内的包被有新冠病毒S1蛋白的微孔板1、包被有AXL蛋白和ACE2蛋白的微孔板2、中和抗体标准品溶液、阳性对照、阴性对照、样品稀释液、重组RBD+NTD蛋白酶结合物、20
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浓缩洗涤液、显示液A、显示液B、终止液和说明书构成；其特征在于：所述微孔板1为聚苯乙烯微孔板，其各孔包被有浓度为1
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5μg/ml的新冠病毒S1蛋白；所述微孔板2为聚苯乙烯微孔板，其各孔包被有浓度为1
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5μg/ml AXL蛋白即酪氨酸蛋白激酶受体UFO和2
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5μg/ml ACE2蛋白即血管紧张素转换酶2，其中所述AXL蛋白与ACE2蛋白在每微孔中包被比例量为1:2～1:4；所述中和抗体标准品溶液为含RBD中和抗体和NTD中和抗体的混合液，其中RBD中和抗体与NTD中和抗体的摩尔比为2:1；该标准品溶液为浓度梯度分别是0AU/mL、0.1563AU/mL、0.3125AU/mL、0.625AU/mL、1.25AU/mL、2.5AU/mL、5AU/mL的7个标准品溶液，其中0AU/mL为标准品缓冲液即：pH7.4磷酸盐缓冲液；所述阳性对照为3ug/ml的RBD中和抗体和1ug/ml的NTD中和抗体的混合液；所述阴性对照为正常人新冠病毒SARS
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2抗体阴性血清；所述样品稀释液的配方是：除菌的1000mL纯水中，含NaCl 8g、NaH2PO4·
2H2O 0.2g、Na2HPO4·
12H2O 2.9g、CTAB 1g、BSA 5g、TritonX
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100 0.1mL、Proclin300 1mL，pH 7.4；所述RBD+NTD蛋白酶结合物是辣根过氧化物酶标记的重组RBD+NTD蛋白酶结合物；该酶标酶结合物工作效价为1:7000，稀释液为酶结合物稀释液，该酶结合物稀释液的配方是：除菌的1000mL纯水中，含NaCl 8g、NaH2PO4·
2H2O 0.2g、Na2HPO4·
12H2O 2.9g、BSA 3.5g、Proclin300 1mL；所述20
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浓缩洗涤液的配方是：除菌的50mL双蒸水中，含NaCl 8.0g、NaH2PO4·
2H2O 0.2g、Na2HPO4·
12H2O 2.9g、吐温20 0.5mL；所述显示液A是浓度为0.3mg/mL的四甲基联苯胺(TMB)溶液；所述显示液B是浓度为0.74mg/mL的过氧化脲溶液；使用时将显示液A与显示液B按体积比1﹕1混合；所述终止液是浓度为2mol/L的硫酸溶液。2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒SARS
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2中和抗体定量检测试剂盒，其特征在于：所述微孔板1各孔包被有浓度为3μg/ml的新冠病毒S1蛋白；所述微孔板2各孔包被有浓度为2μg/ml AXL蛋白即酪氨酸蛋白激酶受体UFO和4μg/ml ACE2蛋白即血管紧张素转换酶2，其中所述AXL蛋白与ACE2蛋白在每微孔中包被比例量为1:2。3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒SARS
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【专利技术属性】
技术研发人员：欧兰香，陈振，寇宗阳，丁兴龙，王岩，朱之炜，
申请(专利权)人：山东莱博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：