基于PCR的病毒快速检测方法及其试剂盒技术

本发明专利技术提供病毒保保液，核酸扩增反应制剂(可以为冻干粉末形式)，基于qPCR的通过核酸扩增检测病毒的方法和PCR试剂盒。该病毒保存溶液可以在室温下长时间保存病毒样品并防止RNA降解。样品溶液可直接与核酸扩增反应制剂混合用于qPCR扩增，而无需进行病毒核酸提取步骤，可快速，高灵敏度检测病毒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于PCR的病毒快速检测方法及其试剂盒
本专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及一种病毒保存液、核酸扩增反应液、核酸PCR扩增方法、PCR扩增试剂盒。
技术介绍
目前，常用的病毒RNA检测方法通常包括三个步骤：1)采集受试者的病毒样本并将样本转移到实验室；2)通过硅胶膜柱或磁珠吸附从病毒样本中提取病毒RNA；3)进行RT-PCR扩增和荧光定量检测(结果可以根据Ct值进行解释)。在这种方法中，RNA提取试剂盒通常与病毒样品保存试剂盒及RT-qPCR检测试剂盒是相互分开的。另外，采集的样本中常含有RT-PCR聚合酶抑制剂，如果直接与PCR试剂混合，会阻碍核酸扩增。另外，通常情况下，病毒保存液需要在2-8度的条件下储存和运输，而常规RT-qPCR的检测试剂盒一般为液体制剂，需要-20摄氏度保存，且在运输过程中也需要冷藏(如用干冰)。病毒提取和PCR操作需要严格的生物安全标准以及实验室技术人员的经验和技能。最终的检测结果通常需要数小时才能得到。总的来说，上述传统的检测方法繁琐、复杂，容易出错。它们的低效率会严重限制社会对紧急情况，如SAR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种病毒保存液，包括：/n牛血清白蛋白、鱼明胶、表面活性剂、pH缓冲液，所述病毒保存液的pH值在8.0到8.5之间。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种病毒保存液，包括：
牛血清白蛋白、鱼明胶、表面活性剂、pH缓冲液，所述病毒保存液的pH值在8.0到8.5之间。


2.根据权利要求1所述病毒保存液，其特征在于，所述pH缓冲剂包含TrisHCl。


3.根据权利要求1所述病毒保存液，其特征在于，所述病毒保存液还包含一种螯合剂，优选EDTA。


4.根据权利要求1所述病毒保存液，其特征在于，所述病毒保存液还包含防腐剂，较佳为NaN3。


5.根据权利要求1所述病毒保存液，其特征在于，所述病毒保存液还包含：二甲基亚砜及甘油。


6.根据权利要求1所述病毒保存液，其特征在于，所述病毒保存液还包含：在PCR反应中抑制TaqDNA聚合酶抑制剂的抑制成分。


7.根据权利要求1所述病毒保存液，其特征在于，所述pH缓冲液包含TrisHCl，且在该溶液之总量中：
Tris-HCl的摩尔浓度在10mM到200mM之间，
牛血清白蛋白的质量浓度在1μg/μl到10μg/μl之间，并且
鱼明胶的质量百分比浓度在0.1％～2％之间。


8.根据权利要求7所述病毒保存液，其特征在于，所述病毒保存液还包含二甲基亚砜及甘油，且在该溶液之总量中：
二甲基亚砜的体积百分比在0.1％到5％之间，
甘油的体积百分比在1％到10％之间。


9.一种核酸扩增反应溶液，包括：
M-MLV逆转录酶(MMLV)、TaqDNA聚合酶、dNTP、引物和荧光探针。


10.根据权利要求9所述核酸扩增反应溶液，其特征在于，所述核酸扩增反应溶液还包含KCl。


11.根据权利要求9所述核酸扩增反应溶液，其特征在于，所述核酸扩增反应溶液还包含MgCl2。


12.根据权利要求9所述核酸扩增反应溶液，其特征在于，所述核酸扩增反应溶液还包含聚氧乙烯(20)山梨醇酐单月桂酸酯。


13.根据权利要求9所述核酸扩增反应溶液，其特征在于，所述核酸扩增反应溶液还包含pH缓冲液。


14.根据权利要求9所述核酸扩增反应溶液，其特征在于，所述核酸扩增反应溶液还包含KCl及聚氧乙烯(20)山梨醇酐单月桂酸酯，其中在该溶液已重配后并准备好进行qPCR反应的溶液总量中：
dNTP的浓度在0.05mM到0.5mM之间，
引物的浓度在0.05μM和0.5μM之间，
荧光探针的浓度为0.05μM和0.5μM之间，
MMLV的浓度在1U/μl和50U/μl之间，并且
TaqDNA聚合酶的浓度在0.1U/μl～3U/μl之间。


15.根据权利要求14所述核酸扩增反应溶液，其特征在于，所述核酸扩增反应溶液还包含至少一种糖。


16.根据权利要求15所述的核酸扩增反应溶液，其特征在于，所述至少一种糖包括海藻糖或蔗糖，所述核酸扩增反应溶液进一步包含聚氧乙烯(20)山梨醇酐单月桂酸酯，当在所述溶液重配后并准备好进行qPCR反应时：
海藻糖的重量浓度在1％到1...

【专利技术属性】
技术研发人员：王春香，郭金海，肖欢欢，
申请(专利权)人：江苏康为世纪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32