一种核酸保存液制造技术

本发明专利技术提供了一种核酸保存液，由核酸酶抑制剂、蛋白变性剂、稳定剂、抑菌剂和Tricine缓冲液组成，其中核酸酶抑制剂浓度为5‑20mg/ml、蛋白变性剂浓度为20‑80mg/ml，稳定剂浓度为30‑90mg/ml，抑菌剂浓度为100‑500mg/ml，Tricine缓冲液的浓度为20‑120mM，本发明专利技术的有益效果：本发明专利技术的提供的核酸保存液可以在常温下有效防止核酸的降解，为核酸提供稳定的环境，延长核酸的保存时间，能够保证采集、运输、检测的安全性，同时能够灭活病原微生物，具有制备成本低、性能稳定和易保存等优点。

A kind of nucleic acid preservation solution

【技术实现步骤摘要】
一种核酸保存液
本专利技术涉及核酸
，具体是一种核酸保存液。
技术介绍
呼吸道感染（Respiratorytractinfection，RTI）是人类最常见的一类疾病，可以在任何性别、年龄和地域中发生，是全球范围内引起人群发病和死亡的最主要原因之一。呼吸道感染引起的临床症状和体征都较为相似，其临床表现主要为鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃体炎等症状，严重的可引起气管炎、支气管炎及肺炎等，但不同病原体引起的感染，其治疗方法、疗效和病程也不尽相同。目前已证明，大部分呼吸道疾病是由细菌、病毒和其他的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。临床上常见的呼吸道病原体包括甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、人偏肺病毒、腺病毒、呼吸道感染肠道病毒（肠道病毒/鼻病毒）、肺炎支原体、肺炎衣原体、冠状病毒、博卡病毒、嗜肺军团菌等。目前，检测呼吸道病原体的核酸检测方法主要包扩基因芯片法、核酸等温扩增法和实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。基于上述方法已研发出了多种呼吸道病原体基因检测试剂盒，但是目前市面上并没有经济、有效、稳定和多种呼吸道病原体基因检测试剂盒的质控品销售，且现有的核酸质控品类产品多具有不稳定、易降解和不易保存等缺点，而质控品又是衡量和评估一款试剂盒检测准确性和稳定性等性能的重要方法和质量指标。因此，急需提供一种可稳定保存的核酸质控品。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种核酸保存液，具体技术方案如下：一种核酸保存液，由核酸酶抑制剂、蛋白变性剂、稳定剂、抑菌剂和Tricine缓冲液组成，其中核酸酶抑制剂浓度为5-20mg/ml、蛋白变性剂浓度为20-80mg/ml，稳定剂浓度为30-90mg/ml，抑菌剂浓度为100-500mg/ml，Tricine缓冲液的浓度为20-120mM。作为进一步的改进，其特征在于：所述核酸酶抑制剂为EDTA、CDTA、异硫氰酸胍、8－羟基喹啉中的一种或多种。作为进一步的改进，其特征在于：所述蛋白变性剂为SDS、胍盐、尿素、DTT中的一种或多种。作为进一步的改进，其特征在于：所述稳定剂为甘氨酸、甘露糖、乙酸钠中的一种或多种。作为进一步的改进，其特征在于：所述抑菌剂为乙醇或山梨酸钾。本专利技术的有益效果：本专利技术的提供的核酸保存液可以在常温下有效防止核酸的降解，为核酸提供稳定的环境，延长核酸的保存时间，能够保证采集、运输、检测的安全性，同时能够灭活病原微生物，具有制备成本低、性能稳定和易保存等优点。核酸主要包括唾液核酸、口腔脱落细胞核酸、宫颈细胞核酸、宫颈病原微生物核酸、人呼吸道病原体的核酸等。附图说明图1-3为实施例4中核酸的Ct-d线条图。图4为实施例4中鸡胚的病变结果图。图5为实施例4中尿囊液病毒检测结果图。具体实施方式为了加深对本专利技术的理解，下面将结合附图和实施例对本专利技术做进一步详细描述，该实施例仅用于解释本专利技术，并不对保护范围构成限定。实施例1一种核酸保存液，包括5mg/ml核酸酶抑制剂、40mg/ml蛋白变性剂、50mg/ml稳定剂、100mg/ml抑菌剂、80mMTricine盐缓冲液。其中，核酸酶抑制剂为EDTA、CDTA、异硫氰酸胍、8－羟基喹啉中的一种或多种，蛋白变性剂为SDS、胍盐、尿素、DTT中的一种或多种，稳定剂为甘氨酸、甘露糖、乙酸钠中的一种或多种，抑菌剂为乙醇或山梨酸钾。实施例2一种核酸保存液，包括10mg/ml核酸酶抑制剂、60mg/ml蛋白变性剂、60mg/ml稳定剂、200mg/ml抑菌剂、80mMTricine盐缓冲液。其中，核酸酶抑制剂为EDTA、CDTA、异硫氰酸胍、8－羟基喹啉中的一种或多种，蛋白变性剂为SDS、胍盐、尿素、DTT中的一种或多种，稳定剂为甘氨酸、甘露糖、乙酸钠中的一种或多种，抑菌剂为乙醇或山梨酸钾。实施例3一种核酸保存液，包括20mg/ml核酸酶抑制剂、80mg/ml蛋白变性剂、80mg/ml稳定剂、200mg/ml抑菌剂、100mMTricine盐缓冲液。其中，核酸酶抑制剂为EDTA、CDTA、异硫氰酸胍、8－羟基喹啉中的一种或多种，蛋白变性剂为SDS、胍盐、尿素、DTT中的一种或多种，稳定剂为甘氨酸、甘露糖、乙酸钠中的一种或多种，抑菌剂为乙醇或山梨酸钾。实施例4核酸放入上述三个实施例对应的三种保存液中，进行观察。采用鸡传染性支气管炎病毒（IBV），该病毒与新型冠状病毒（SARS-CoV-2）同为套式病毒目、冠状病毒科、冠状病毒属成员，两者基因组长度相近、病毒外壳的蛋白组成和结构也类似。安全性方面，IBV是弱毒株，只能感染鸡，对人等其他物种无感染能力。实验方法样品制备（1）准备实施例1-3的保存液，分别加入20μlIBV（鸡传染性支气管炎病毒），上下颠倒混匀。（2）分别置于37℃，常温，-20℃保存，每天取样进行检测，见表1。表1提取效果检测一、检测方法（使用康为世纪CW3023试剂盒）（1）取1.5ml离心管（自备），加入20μlProteinaseK，加入200μl样本，200μlBufferRLT，300μl异丙醇，涡旋震荡5s后，置于室温，1200rpm的恒温混匀仪震荡10min。（2）将步骤（1）所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱（SpinColumnsDM）中。12,000rpm（~13,400xg）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（3）向吸附柱中加入500μlBufferPGWT，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（4）向吸附柱中加入500μlBufferGWT2，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（5）12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。（6）将吸附柱置于室温2分钟，晾干。将吸附柱置于新的收集管（RNase-FreeCentrifugeTube）中，向吸附柱膜的中间部位悬空加入30μlRNase-FreeWater，室温放置2分钟，12,000rpm离心1min，收集核酸溶液。实时荧光定量检测（使用康为世纪CW2207试剂盒）（1）引物和探针序列，见表2表2引物和探针序列5’—3’IBV-FGCTTTTGAGCCTAGCGTTIBV-RGCCATGTTGTCACTGTCTATTGIBV-PCACCACCAGAACCTGTCACCTC（2）反应体系，见表3表3组成体积2×GoldStarProbeOneStepBuffer12.5µlForwardPrimer（10µM）0.5µlReversePrimer（10µM）0.5µlProbe（10µM）0.5µlGoldStarProbeOneStepEnzymeMix1µ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸保存液，其特征在于：由核酸酶抑制剂、蛋白变性剂、稳定剂、抑菌剂和Tricine缓冲液组成，其中核酸酶抑制剂浓度为5-20mg/ml、蛋白变性剂浓度为20-80mg/ml，稳定剂浓度为30-90mg/ml，抑菌剂浓度为100-500mg/ml，Tricine缓冲液的浓度为20-120mM。/n

【技术特征摘要】
1.一种核酸保存液，其特征在于：由核酸酶抑制剂、蛋白变性剂、稳定剂、抑菌剂和Tricine缓冲液组成，其中核酸酶抑制剂浓度为5-20mg/ml、蛋白变性剂浓度为20-80mg/ml，稳定剂浓度为30-90mg/ml，抑菌剂浓度为100-500mg/ml，Tricine缓冲液的浓度为20-120mM。


2.根据权利要求1所述的一种核酸保存液，其特征在于：所述核酸酶抑制剂为EDTA、CD...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷剑峰，王春香，
申请(专利权)人：江苏康为世纪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32