【技术实现步骤摘要】
一种低成本提取干燥植物叶片DNA的方法与应用
本专利技术属于分子生物学
，特别涉及一种低成本提取干燥植物叶片DNA的方法与应用。
技术介绍
DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，获得高质量DNA的是分子生物学实验最关键的第一步。与动物相比植物细胞除有细胞壁外，还含有较多的多糖、多酚等多种不易与DNA分离的次生代谢物，使得植物DNA提取的难度较大、成功率低，在植物DNA提取中DNA的溶液常出现黏度大乃至呈胶状，主要是由于多糖、酚类在提取过程中与DNA共沉淀，形成包裹DNA的黏稠胶状物，难以溶解或产生褐变，严重影响了DNA质量和纯度，而且用于DNA提取的组织(如叶片)的成熟度也常常难以控制。目前常用的植物DNA提取方法有：CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法、SDS(十二烷基硫酸钠)法和试剂盒法，采用CTAB法和SDS法这两种方法可从几乎所有植物较为幼嫩的叶片中提取植物DNA，费用低廉，但是这两种方法存在以下不足：一是需要采用春季幼嫩未完全展开的叶片进行提取，取样时间受限，增加了叶片保鲜保存工作量；二是提取...
【技术保护点】
1.一种低成本提取干燥植物叶片DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）取植物叶片放入装有钢珠的离心管中，干燥后通过研磨仪研磨成粉；/n（2）向步骤（1）中的离心管内加入裂解缓冲液和RNase A，混匀，50~60℃水浴15~20min；/n（3）向步骤（2）中的离心管内加入醋酸钠溶液，混匀，冰浴4~6min，室温下离心，取上清液；/n（4）将步骤（3）取得的上清液加入装有硅粉-DNA吸附液的离心管中，混匀，室温放置15~20min后离心，弃上清液；/n（5）加入洗脱液，混匀，室温下离心，弃上清液；/n（6）重复步骤（5）1~2次；/n（7）室温下离心，晾干30~4...
【技术特征摘要】
1.一种低成本提取干燥植物叶片DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取植物叶片放入装有钢珠的离心管中，干燥后通过研磨仪研磨成粉；
（2）向步骤（1）中的离心管内加入裂解缓冲液和RNaseA，混匀，50~60℃水浴15~20min；
（3）向步骤（2）中的离心管内加入醋酸钠溶液，混匀，冰浴4~6min，室温下离心，取上清液；
（4）将步骤（3）取得的上清液加入装有硅粉-DNA吸附液的离心管中，混匀，室温放置15~20min后离心，弃上清液；
（5）加入洗脱液，混匀，室温下离心，弃上清液；
（6）重复步骤（5）1~2次；
（7）室温下离心，晾干30~40min；
（8）加入TEbuffer溶解DNA，混匀，室温放置5~8min后离心，取上清液，即为提取的植物DNA，-20°C下保存备用。
2.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片DNA的方法，其特征在于，所述步骤（2）中裂解缓冲液的制备方法为：将SDS溶于10*TE缓冲液得到裂解缓冲液，所述SDS质量与所述10*TE缓冲液体积比为5g:1L。
3.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片DNA的方法，其特征在于，所述步骤（4）中硅粉-DNA吸附液制备方法为：
S1.将硅粉加入离心管中；
S2.向步骤S1中离心管加入dH2O，涡旋混匀15~20min，弃去液体，所述dH2O体积与步骤S1中硅粉的质量比为30mL:800mg；
S3.重复步骤S2两次；
S4.加入dH2O，充分混匀得到硅粉悬浮液，所述硅粉悬浮液中硅粉与dH2O体积比为1:1；
S5.取步骤S4得到的硅粉悬浮液于离心管，加dH2O涡旋混匀，11000~13000rpm离心10~20sec，弃上清液，所述硅粉悬浮液与dH2O的体积比为0.05:1；
S6.加入KI溶液，充分混匀得到硅粉-DNA吸附液，所述KI溶液溶度为6mol/L，所述KI溶液与步骤S5中硅粉悬浮液的体积比为700:50。
4.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄诚梅，罗海斌，曹辉庆，吴凯朝，魏源文，邓智年，江文，蒋胜理，徐林，叶丽萍，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：广西;45
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