一种人血浆中同型半胱氨酸的检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种人血浆中同型半胱氨酸的检测方法及试剂盒，步骤如下：在人血浆样品中依次加入同型半胱氨酸同位素内标溶液、碱溶液和还原剂溶液后，混匀并在室温下孵育，再加入蛋白沉淀剂溶液，震荡离心后，取上清液进样分析，用高效液相色谱‑三重四极杆质谱仪进行检测，本发明专利技术检测方法前处理简单、检测成本低、特异性和抗基质干扰能力强，检测LOQ较常规方法进一步降低。

【技术实现步骤摘要】
一种人血浆中同型半胱氨酸的检测方法及试剂盒
本专利技术涉及一种人血浆中同型半胱氨酸的检测方法及试剂盒，属于生物检测领域。技术背景同型半胱氨酸Hcy又称高半胱氨酸，是体内蛋氨酸循环和半胱氨酸代谢的中间产物，并能回转成蛋氨酸，或经过转硫途径而回转为半胱氨酸。正常血浆总同型半胱氨酸浓度一般在5-15μmol/L，平均浓度大约为10μmol/L。血浆总同型半胱氨酸浓度越高，患心脑血管疾病(如冠心病)，动脉粥样硬化，肾功能障碍和糖尿病的风险越高。心脑血管疾病是心脏血管和脑血管疾病的统称，泛指由于高脂血症、血液粘稠、动脉粥样硬化、高血压等所导致的心脏、大脑及全身组织发生的缺血性或出血性疾病。心脑血管疾病的常见指标有血清脂质、C反应蛋白(CRP)和同型半胱氨酸(Hcy)。当人体的新陈代谢出现障碍时，同型半胱氨酸由于无法降解而在体内聚集。高浓度的同型半胱氨酸会对血管内壁造成损害，使血管内膜增厚、粗糙，形成斑块，进而使管腔狭窄甚至阻塞，动脉供血不全，导致动脉粥样硬化和冠心病的发生。同型半胱氨酸Hcy、半胱氨酸Cys和甲硫氨酸(Met,也称蛋氨酸)是体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人血浆中同型半胱氨酸的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)取人血浆样品100μL，分别加入10-100μL 10-50μmol/L高胱氨酸-d8溶液、10-30μL碱溶液和20-100μL二硫苏糖醇DTT水溶液，混匀，室温下孵育10-20min；/n2)向步骤1)所述溶液中加入500-1000μL蛋白沉淀剂，混匀，离心；/n3)取步骤2)离心后上清液进样，采用高效液相色谱-三重四极杆质谱仪检测，获得所述同型半胱氨酸检测结果，所述高效液相方法条件如下，/n色谱柱Agilent poroshell 120 EC-C18，2.1×50mm，2.7μm；/n色谱柱柱温25-35℃；/n...

【技术特征摘要】
1.一种人血浆中同型半胱氨酸的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)取人血浆样品100μL，分别加入10-100μL10-50μmol/L高胱氨酸-d8溶液、10-30μL碱溶液和20-100μL二硫苏糖醇DTT水溶液，混匀，室温下孵育10-20min；
2)向步骤1)所述溶液中加入500-1000μL蛋白沉淀剂，混匀，离心；
3)取步骤2)离心后上清液进样，采用高效液相色谱-三重四极杆质谱仪检测，获得所述同型半胱氨酸检测结果，所述高效液相方法条件如下，
色谱柱Agilentporoshell120EC-C18，2.1×50mm，2.7μm；
色谱柱柱温25-35℃；
进样量1-5μL；
流速0.1-0.3mL/min；
流动相体积比0.1％甲酸水:0.1％甲酸甲醇为90～99:10～1。


2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述碱溶液为1-5％氨水。


3.根据权利要求2所述检测方法，其特征在于，所述氨水浓度为2.5％。


4.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述二硫苏糖醇水溶液为0.1-0.5mol/L。


5.根据权利要求4所述检测方法，其特征在于，所述二硫苏糖醇水溶液为0.3mol/L。


6.根据权利要求1所述检测方...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱学庆，秦炜，吴小虎，贺笑非，
申请(专利权)人：上海润达榕嘉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31