一种用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法技术

本发明专利技术提供了一种用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，包括如下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水为流动相A、乙腈‑甲醇（体积比60:40~40:60）为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～40℃，检测波长为205~230nm，采用紫外检测器对依帕列净中间体的有关物质进行检测。本发明专利技术方法通过综合考虑分析柱、流动相、梯度洗脱程序以及流速、柱温对分离检测的综合影响，使得检测结果达到了最优化，具有快速简便、灵敏度高、准确可靠、适用性广的优点，适用于分离测定依帕列净中间体的有关物质，从而有效的控制药品的质量。

【技术实现步骤摘要】
一种用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法
本专利技术涉及分析化学
，具体涉及一种用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法。
技术介绍
依帕列净(Empagliflozin，商品名Jardiance)，由勃林格殷格翰与礼来公司联合开发的一种新型的抗糖尿病药物，于2014年08月01日经美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市，用于改善2型糖尿病成人患者的血糖控制。依帕列净是一种新的钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂药物，通过抑制肾脏对葡萄糖的重吸收，增加葡萄糖排泄，进而降低糖尿病患者已升高的血糖水平。(1S)-1,5-脱水-1-C-[4-氯-3-[[4-[[(3S)-四氢-3-呋喃基]氧基]苯基]甲基]苯基]-D-山梨糖醇四乙酸酯为依帕列净中间体，分子式：C31H35ClO11，分子量：619.06，化学结构式如下式(1)：该中间体在制备过程中，因起始原料、合成工艺、降解等多种因素产生多个杂质，其中以杂质Ⅰ、杂质Ⅱ、杂质Ⅲ、杂质Ⅳ、杂质Ⅴ、杂质Ⅵ和杂质Ⅶ在合成工艺中较易产生，作为有关物质项目中主要考察杂质，其限度要求均为不得过0.50wt％。杂质Ⅰ为副产物，分子式：C31H35ClO11，分子量：619.06，化学结构式如下式(2)：杂质Ⅱ为第2步反应中间体，分子式：C32H37ClO12，分子量：649.08，化学结构式如下式(3)：杂质Ⅲ为副产物，分子式：C23H27ClO7，分子量：450.91，化学结构式如下式(4)：杂质Ⅳ为第1步反应中间体，分子式：C24H29ClO8，分子量：480.94，化学结构式如下式(5)：杂质Ⅴ为起始物料，分子式：C17H16BrClO2，分子量：367.66，化学结构式如下式(6)：杂质Ⅵ为副产物，分子式：C34H32Cl2O4，分子量：575.52，化学结构式如下式(7)：杂质Ⅶ为依帕列净中间体的手性杂质，在反相色谱中与主峰重合，不能分开，需要正相色谱(手性)方法进行控制，杂质Ⅶ的分子式：C31H35ClO11，化学结构式如下式(8)。该中间体的分析检测对反应控制和收率提高有着重要的作用，同时也直接影响着终产品的质量，所以建立一种操作简单、稳定有效的分析检测方法对依帕列净中间体进行分析检测是非常必要的。在现有的技术中，没有适合于快速、简便、精确分析检测依帕列净中间体有关物质的分析方法。因此，对于依帕列净中间体有关物质的测定方法存在进一步的改进和优化需求。
技术实现思路
为了克服现有技术存在的上述技术问题，本专利技术人在进行了大量的深入研究之后，提供了一种用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，具有快速简便、灵敏度高、准确可靠的优点。本专利技术采用的技术方案是：一种用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，包括如下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水为流动相A、乙腈-甲醇为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～40℃，流动相B乙腈-甲醇体积比为60:40～40:60；采用紫外检测器对依帕列净中间体的有关物质进行检测，所述紫外检测器的检测波长为205～230nm。本专利技术所述的用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其中，所述梯度洗脱的条件为：时间，分钟流动相A，体积％流动相B，体积％035～4555～65355～1585～95505～1585～955135～4555～656535～4555～65由此可以提高主峰、杂质Ⅰ、杂质Ⅱ与杂质Ⅲ之间的分离度；若条件改变会降低主峰、杂质Ⅰ、杂质Ⅱ与杂质Ⅲ之间的的分离度。本专利技术所述的用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其中，所述梯度洗脱的条件为：时间，分钟流动相A，体积％流动相B，体积％04060351090501090514060654060。由此得到的分离效果最佳，峰形最好。本专利技术所述的用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其中，流动相B乙腈-甲醇体积比为50:50。由此，分离度和理论板数都较好。本专利技术所述的用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其中，色谱柱长为150mm～250mm，所述填充剂的粒径为1.8～5μm。本专利技术所述的用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其中，所述紫外检测器的检测波长为224nm。本专利技术所述的用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其中，所述依帕列净中间体的有关物质包括杂质Ⅰ、杂质Ⅱ、杂质Ⅲ、杂质Ⅳ、杂质Ⅴ和杂质Ⅵ的一种或多种，具体结构式如下所示：本专利技术所述的用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其中，色谱柱长为250mm。由此，可以进一步提高提高主峰、杂质Ⅰ、杂质Ⅱ与杂质Ⅲ之间的分离度。本专利技术所述的用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其中，所述填充剂的粒径为5μm。由此，可以进一步提高分离度。本专利技术所述的用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其中，流速为1.0ml/min，柱温为35℃。由此，可以进一步提高分离度。与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：本专利技术所述的用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，通过综合考虑分析柱、流动相、梯度洗脱程序以及流速、柱温对分离检测的综合影响，使得检测结果达到了最优化，可以将依帕列净中间体中的杂质Ⅰ、杂质Ⅱ、杂质Ⅲ、杂质Ⅳ、杂质Ⅴ和杂质Ⅵ在同一色谱条件进行快速高效的分离，并且该检测方法灵敏度高、专属性强、准确性强、快速简便、操作方便，可有效控制药品的质量，适用于分离测定依帕列净中间体的有关物质。附图说明图1为本专利技术中按实施例1条件检测的空白溶液的色谱图；图2为本专利技术中按实施例1条件检测的系统适用性溶液的色谱图；图3为本专利技术中按实施例1条件检测的供试品溶液的色谱图；图4为本专利技术中按实施例1条件检测的定量限溶液的色谱图；图5为本专利技术中按实施例1条件检测的检测限溶液的色谱图；图6为本专利技术中按实施例2条件检测的空白溶液的色谱图；图7为本专利技术中按实施例2条件检测的系统适用性溶液的色谱图；图8为本专利技术中按实施例2条件检测的供试品溶液的色谱图；图9为本专利技术中按实施例2条件检测的定量限溶液的色本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其特征在于：包括如下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水为流动相A、乙腈-甲醇为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～40℃，流动相B乙腈-甲醇体积比为60:40～40:60；采用紫外检测器对依帕列净中间体的有关物质进行检测，所述紫外检测器的检测波长为205～230nm。/n

【技术特征摘要】
1.一种用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其特征在于：包括如下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水为流动相A、乙腈-甲醇为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～40℃，流动相B乙腈-甲醇体积比为60:40～40:60；采用紫外检测器对依帕列净中间体的有关物质进行检测，所述紫外检测器的检测波长为205～230nm。


2.根据权利要求1所述的用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其特征在于：所述梯度洗脱的条件为：









时间，分钟
流动相A，体积％
流动相B，体积％


0
35～45
55～65


35
5～15
85～95


50
5～15
85～95


51
35～45
55～65


65
35～45
55～65






。


3.根据权利要求1所述的用HPLC分离测定依帕列净中间体有关物质的方法，其特征在于：所述梯度洗脱的条件为：









时间，分钟
流动相A，体积％
流动相B，体积％


0
40
60


35
10...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴其华，葛德培，陈海兵，李强，邵广晴，
申请(专利权)人：安徽联创生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34