靶向敲除TNFα基因的sgRNA和敲除TNFα基因的猪胚胎成纤维细胞系及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，尤其涉及靶向敲除TNFα基因的sgRNA和敲除TNFα基因的猪胚胎成纤维细胞系及其应用；本发明专利技术提供的TNFα基因敲除的sgRNA在TNFα基因上的靶点序列位于其第一外显子上，靶点序列如SEQ ID NO：1所示。在将所述sgRNA构建至载体pX330后，将表达载体pX330‑TNFα作为TNFα基因的打靶载体，转染猪胚胎成纤维细胞，获得TNFα基因敲除的猪胚胎成纤维细胞单克隆细胞株，得到的多种不同编辑类型的突变体均可造成移码突变，编辑效率较高。本发明专利技术制备得到的猪胚胎成纤维细胞细胞系可作为体细胞核移植的供体，用于转基因猪的制备，具有较大的应用研究价值。

【技术实现步骤摘要】
靶向敲除TNFα基因的sgRNA和敲除TNFα基因的猪胚胎成纤维细胞系及其应用
本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及靶向敲除TNFα基因的sgRNA和敲除TNFα基因的猪胚胎成纤维细胞系及其应用。
技术介绍
CRISPR-Cas系统是在大多数古生菌和多数细菌中存在的一种用于抵抗外源病毒或DNA入侵的获得性免疫系统。II型RISPR-Cas9系统是目前改造最成功、应用最广泛的，主要是通过一段短的RNA序列与DNA靶点序列按照碱基互补原则形成双链后，结合Cas9蛋白在DNA靶位点诱导形成双链断裂损伤，损伤修复时可以在基因组靶位点引入特殊的基因突变。CRISPR-Cas9系统具有设计简单，打靶效率高及能在靶位点形成多种突变的优点，目前已广泛应用于基因功能及转基因动物等的研究中。肿瘤坏死因子TNFα(TumorNecrosisFactoralpha)是一种促炎细胞因子，能参与正常炎症反应和免疫反应。近年的研究发现TNFα还能通过作用于生长激素/胰岛素样生长因子轴，来抑制机体生长和导致肌肉蛋白降解，可能在肌肉发育方面起负调控作用。目前本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向敲除TNFα基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA靶点序列包括如SEQ IDNO：1所示的核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种靶向敲除TNFα基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA靶点序列包括如SEQIDNO：1所示的核苷酸序列。


2.编码权利要求1所述sgRNA的DNA分子。


3.一种生物材料，其特征在于，所述生物材料包括权利要求1所述sgRNA，所述生物材料为载体、表达盒或转基因细胞中的一种或多种。


4.一种敲除了TNFα基因的细胞系的构建方法，其特征在于，包括：
利用CRISPR-Cas9系统敲除所述细胞系的TNFα基因，所述CRISPR-Cas9系统使用的sgRNA靶点序列包括如SEQIDNO：1所示的序列。


5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述利用CRISPR...

【专利技术属性】
技术研发人员：张浩，付玉，张盼，张博，凌遥，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11