降低USP1表达的物质在制备治疗儿童T系急性淋巴细胞白血病的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了降低USP1表达的物质在制备治疗儿童T系急性淋巴细胞白血病的药物中的应用。本发明专利技术公开形成茎环结构的短发夹RNA，其为shRNA‑1或shRNA‑2。去泛素化酶USP1在T系急性淋巴细胞白血病细胞中具有抑制细胞凋亡、促进细胞增殖的作用，本发明专利技术证明抑制USP1的表达可促进肿瘤细胞白血病细胞发生凋亡，抑制白血病细胞的增殖。本发明专利技术为T系急性淋巴细胞白血病治疗提供了一条新的途径，去泛素化酶USP1有望成为抗白血病治疗的一个潜在靶点，在医学领域具有十分广阔的应用前景。

Application of substances that reduce the expression of usp1 in the preparation of drugs for the treatment of childhood T-lineage acute lymphoblastic leukemia

【技术实现步骤摘要】
降低USP1表达的物质在制备治疗儿童T系急性淋巴细胞白血病的药物中的应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及降低去泛素化酶USP1表达的物质在制备治疗儿童T系急性淋巴细胞白血病的药物中的应用。
技术介绍
急性淋巴细胞白血病(Acutelymphoblasticleukemia,ALL)是儿童最常见的恶性肿瘤，也是儿童期疾病相关死亡的主要原因。T系急性淋巴细胞白血病(T-ALL)是ALL中极具侵袭性的一个亚型，目前仍有高达30％的T-ALL患儿治疗无效或发生复发。发生发展的机制未明是T-ALL治愈率进一步提高的瓶颈。因此，深入研究儿童T-ALL，特别是难治复发T-ALL发生发展的分子机制，对于探索新的靶向治疗方案，以及提高生存率都至关重要。USP1(Ubiquitin-specificpeptidase1)，即泛素特异性肽酶1，是一种半胱氨酸酶，属于去泛素化酶(Deubiquitinases,DUBs)的USPs家族，与其他的USPs成员一样，USP1包含高度保守的半胱氨酸结构域(Cysbox)和组氨酸结构域(Hisbox)。研究发现USP1与靶蛋白相互作用，通过去泛素化调节靶蛋白的稳定性，从而影响DNA损伤修复、基因组稳定性、细胞凋亡、衰老、分化、生长、周期进展、自噬、干细胞特征维持等重要的生物学过程。USP1在多发骨髓瘤、胶质母细胞瘤、结直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌等多种人类肿瘤中存在高表达，并且与肿瘤的发生发展密切相关，其作为肿瘤治疗的靶点已受到广泛关注。但是目前USP1在T-ALL，特别是儿童T-ALL发生发展中的作用机制还未见报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种可促进T系急性淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞凋亡、抑制该细胞增殖的短发夹RNA(shRNA，shorthairpinRNA)及其相关生物材料。本专利技术提供形成茎环结构的短发夹RNA，其为以下shRNA-1或shRNA-2：(1)shRNA-1，所述shRNA-1的茎环(Stem-loop)结构中茎(Stem)的一条链序列为SEQIDNO:1，茎的另一条链序列为SEQIDNO:2，其中SEQIDNO:1和SEQIDNO:2均由21个核糖核苷酸组成；(2)shRNA-2，所述shRNA-2的茎环结构中茎的一条链序列为SEQIDNO:3，茎的另一条链序列为SEQIDNO:4，其中SEQIDNO:3和SEQIDNO:4均由21个核糖核苷酸组成。所述短发夹RNA(shRNA-1和shRNA-2)中的环(loop)只要满足使所述短发夹RNA能产生由SEQIDNO:1所示的单链RNA和SEQIDNO:2所示的单链RNA组成的双链小干扰RNA(siRNA)或产生由SEQIDNO:3所示的单链RNA和SEQIDNO:4所示的单链RNA组成的双链小干扰RNA即可。在本专利技术的一个实施方案中，所述shRNA-1的核苷酸序列为SEQIDNO:5，其中SEQIDNO:5由48个核糖核苷酸组成，SEQIDNO:5的第1-21位与SEQIDNO:1相同，SEQIDNO:5的第28-48位与SEQIDNO:2相同。在本专利技术的一个实施方案中，所述shRNA-2的核苷酸序列是SEQIDNO:6，其中，SEQIDNO:6由48个核糖核苷酸组成，SEQIDNO:6的第1-21位与SEQIDNO:3相同，SEQIDNO:6的第28-48位与SEQIDNO:4相同。本专利技术还提供编码上述短发夹RNA(shRNA-1和shRNA-2)的DNA分子。在本专利技术的一个实施方案中，编码shRNA-1的DNA分子为SEQIDNO:8和SEQIDNO:9形成的双链DNA分子。在本专利技术的一个实施方案中，编码shRNA-2的DNA分子为SEQIDNO:10和SEQIDNO:11形成的双链DNA分子。本专利技术还提供与上述短发夹RNA(shRNA-1和shRNA-2)相关的生物材料，为如下1)-5)中的任一种：1)含有上述任一所述的DNA分子的表达盒；2)含有上述任一所述的DNA分子的重组载体、或含有1)所述的表达盒的重组载体；3)含有上述任一所述的DNA分子的重组微生物、或含有1)所述的表达盒的重组微生物或含有2)所述的重组载体的重组微生物；4)含有上述任一所述的DNA分子的转基因细胞系、或含有1)所述的表达盒的转基因细胞系或含有2)所述的重组载体的转基因细胞系；5)小干扰RNA，siRNA-1和siRNA-2，其中所述siRNA-1由SEQIDNO:1和SEQIDNO:2两条链组成，所述siRNA-2由SEQIDNO:3和SEQIDNO:4两条链组成。经过细胞内Dicer酶的酶切作用，shRNA-1可以产生siRNA-1，shRNA-2可以产生siRNA-2，siRNA-1的靶位点为sh-1，sh-1为SEQIDNO:14的第2574-2594位，siRNA-2的靶位点为sh-2，sh-2为SEQIDNO:14的第2030-2050位。上述生物材料中，1)所述的表达盒是指能够在宿主细胞中表达上述任一所述的DNA分子的DNA，该DNA不但可以包括启动shRNA-1或shRNA-2基因转录的启动子，还可以包括终止shRNA-1或shRNA-2基因转录的终止子，进一步地，还可以包括增强子序列；2)所述重组载体具体为用编码shRNA-1或shRNA-2的DNA分子替换GV493的AgeⅠ和EcoRⅠ之间的片段得到的GV493-USP1-sh-1或GV493-USP1-sh-2；3)所述重组微生物具体可为细菌、酵母、藻和真菌；4)所述转基因细胞不包括动物和植物的繁殖材料。本专利技术所要解决的又一个技术问题是提供治疗和/或预防T系急性淋巴细胞白血病的产品，所述产品的活性成分包括如下b1-b4中的至少一种：b1、上述任一所述的短发夹RNA；b2、上述任一所述的DNA分子；b3、上述任一所述的生物材料；b4、USP1抑制剂，优选ML323。本专利技术所要解决的又一个技术问题是提供促进T系急性淋巴细胞白血病细胞凋亡的产品，所述产品的活性成分包括如下b1-b4中的至少一种：b1、上述任一所述的短发夹RNA；b2、上述任一所述的DNA分子；b3、上述任一所述的生物材料；b4、USP1抑制剂，优选ML323。本专利技术所要解决的又一个技术问题是提供抑制T系急性淋巴细胞白血病细胞增殖的产品，所述产品的活性成分包括如下b1-b4中的至少一种：b1、上述任一所述的短发夹RNA；b2、上述任一所述的DNA分子；b3、上述任一所述的生物材料；b4、USP1抑制剂，优选ML323。本专利技术所要解决的又一个技术问题是提供降低去泛素化酶USP1表达的物质的用途，所述用途为a1-a3中的任一种：a1、治疗和/或预防T系急性淋巴细胞白血病；a2、促进T系急性淋巴细胞白血病细胞凋亡；a3、抑制T系本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.形成茎环结构的短发夹RNA，其为以下shRNA-1或shRNA-2：/n(1)shRNA-1，所述shRNA-1的茎环结构中茎的一条链序列为SEQ ID NO:1，茎的另一条链序列为SEQ ID NO:2；/n(2)shRNA-2，所述shRNA-2的茎环结构中茎的一条链序列为SEQ ID NO:3，茎的另一条链序列为SEQ ID NO:4。/n

【技术特征摘要】
1.形成茎环结构的短发夹RNA，其为以下shRNA-1或shRNA-2：
(1)shRNA-1，所述shRNA-1的茎环结构中茎的一条链序列为SEQIDNO:1，茎的另一条链序列为SEQIDNO:2；
(2)shRNA-2，所述shRNA-2的茎环结构中茎的一条链序列为SEQIDNO:3，茎的另一条链序列为SEQIDNO:4。


2.根据权利要求1所述的短发夹RNA，其特征在于：所述shRNA-1的核苷酸序列为SEQIDNO:5，所述shRNA-2的核苷酸序列为SEQIDNO:6。


3.编码权利要求1或2所述的短发夹RNA的DNA分子。


4.与权利要求1或2所述的短发夹RNA相关的生物材料，为如下1)-5)中的任一种：
1)含有权利要求3所述的DNA分子的表达盒；
2)含有权利要求3所述的DNA分子的重组载体、或含有1)所述的表达盒的重组载体；
3)含有权利要求3所述的DNA分子的重组微生物、或含有1)所述的表达盒的重组微生物或含有2)所述的重组载体的重组微生物；
4)含有权利要求3所述的DNA分子的转基因细胞系、或含有1)所述的表达盒的转基因细胞系或含有2)所述的重组载体的转基因细胞系；
5)小干扰RNA，siRNA-1和siRNA-2，其中所述siRNA-1由SEQIDNO:1和SEQIDNO:2两条链组成，所述siRNA-2由SEQIDNO:3和SEQIDNO:4两条链组成。


5.治疗和/或预防T系急性淋巴细胞白血病的产品，所述产品的活性成分包括如下b1-b4中的至少一种：
b1、权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘曙光，高超，郑胡镛，张瑞东，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京儿童医院，
类型：发明
国别省市：北京;11