一种DNA产物的脱盐处理方法及单链DNA的制备和制备试剂盒技术

本发明专利技术公开一种DNA产物的脱盐处理方法及单链DNA的制备和制备试剂盒。该DNA产物脱盐处理方法，将琼脂糖、葡萄糖和无菌水混合加热熔融，然后冷却形成凝胶，并使得所述的凝胶上形成有可放入液体的空间，将DNA产物置于所述空间，冰上处理60‑120min，即可。脱盐后的DNA产物基本没有损耗，同时该脱盐处理方法操作简单，对环境、设备和人员素质的依懒性低。本发明专利技术提供序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的载体，解决了现有载体的酶切位点对制备ssDNA的限制性问题。

【技术实现步骤摘要】
一种DNA产物的脱盐处理方法及单链DNA的制备和制备试剂盒
本专利技术涉及生物工程
，具体涉及一种DNA产物的脱盐处理方法及单链DNA的制备和制备试剂盒。
技术介绍
成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)-相关联的(Cas)体系(CRISPR-Cas系统)用于哺乳动物细胞中所需基因组位点处的基因编辑。在CRISPR-Cas系统中，Cas9核酸酶通过与指导RNA(gRNA)复合而靶向至与gRNA互补的DNA区域，并切断DNA双链，细胞随即展开修复。如果修复过程中没有可供修复的DNA模板，修复的过程会引入大量的随机突变；如果提供修复模板，就有可能将修复模板整合在DNA中，从而引入设计的突变类型。本领域技术人员发现以单链脱氧核糖核酸(ssDNA)为同源重组修复模板进行基因敲入，具有随机插入概率低、编辑效率高等优势。ssDNA的制备方法主要有T7逆转录法、核酸外切酶法、变性高效液相色谱法、磁珠捕获法、不对称PCR、切刻酶制备法等。日本BiodynamicsLaboratoryInc提供的长单链DNA(ssDNA)制备试剂盒，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种DNA产物的脱盐处理方法，其特征在于，包括：将琼脂糖、葡萄糖和无菌水混合加热熔融，然后冷却形成凝胶，并使得所述的凝胶上形成有可放入液体的空间，将DNA产物置于所述空间，冰上处理60-120min。/n

【技术特征摘要】
1.一种DNA产物的脱盐处理方法，其特征在于，包括：将琼脂糖、葡萄糖和无菌水混合加热熔融，然后冷却形成凝胶，并使得所述的凝胶上形成有可放入液体的空间，将DNA产物置于所述空间，冰上处理60-120min。


2.根据权利要求1所述的脱盐处理方法，其特征在于，加热熔融后，所述琼脂糖的浓度为6-16g/mL，葡萄糖的浓度为12-24g/mL。


3.根据权利要求1所述的脱盐处理方法，其特征在于，所述DNA产物为PCR产物、酶切产物或质粒DNA。


4.一种单链DNA的制备方法，包括如下步骤：
将目标DNA克隆到载体中，形成重组载体，所述目标DNA位于限制性内切酶和/或切刻内切酶酶切位点之间；
使用相应的限制性内切酶和/或切刻内切酶消化所述重组载体；
消化后的重组载体采用权利要求1-3任一项所述的脱盐处理方法进行脱盐处理；
脱盐处理后的重组载体进行变性；
变性后的重组载体进行琼脂糖凝胶电泳，切出目的条带，纯化后即得。


5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述载体序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示。


6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，采用平端连接、重组连接或粘性末端连接构建重组载体。


7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦尉，秦珂，陈业，吴昕，廖国娟，
申请(专利权)人：苏州金唯智生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32