一种基因组柱提取试剂盒和提取方法技术

本发明专利技术公开了一种基因组柱提取试剂盒，所述试剂盒包括：裂解液、蛋白酶K、异丙醇、洗涤液、洗脱液和硅胶滤膜吸附柱；裂解液：4～6mol/L异硫氰酸胍、0.6～1％TritonX‑100、35～45mmol/LTris‑HCl和35～45mmol/L尿素，pH值为4～5；洗涤液包括A液和B液，A液：120～130mmol/l NaCl，80～90％无水乙醇；B液：25～35mmol/l Tris，80～90％无水乙醇；洗脱液：7～9mM Tris‑HCl；0.4～0.6mM EDTA。该试剂盒在柱提取裂解过程和洗脱过程不需要加热，整个提取过程都在常温下进行，提取的核酸浓度高，纯度高。

【技术实现步骤摘要】
一种基因组柱提取试剂盒和提取方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种基因组柱提取试剂盒和提取方法。
技术介绍
核酸提取是各种分子生物学检测方法的基础，高效完整地提取DNA是PCR扩增、文库构建、分子诊断等工作的基础。除组织器官样本外，分子生物学检测中最常用的离体样本为血液样本，但采血一方面需要专业人员使用无菌采血设备，成本和复杂程度较高，另一方面采血会给患者带来直接的疼痛和恐惧，受到很多人的排斥；由于以上原因，以血液样本进行分子生物学检测在许多情形下，特别是大范围筛查或鉴定中有诸多不便。有必要开发使用容易获取的样本，如头发、唾液等提取DNA用于分子生物学检测的方法。大多数样品，例如唾液属于可以无损伤轻易提取的生物样品，其成分与血清、血浆中存在较大差异，难以使用相同或类似的试剂盒完成DNA提取(杨泽民，林静，陈龙辉等2015)：唾液为无色、无味、无嗅的液体；PH约6-7；唾液中含有淀粉酶、溶菌酶、过氧化物酶、粘蛋白、粘多糖、磷脂等物质(王铮敏.1996)；其中的大量粘蛋白、粘多糖使得唾液粘稠度达到水的仅20倍，这些成分也是唾液DNA提取中需要解决的主要问题，需要去除的主要物质。现有的基因组柱提取试剂盒存在如下缺点：(1)提取效率不高，纯度不高；(2)柱提取裂解过程和洗脱过程需要加热；(3)裂解时间较长；(4)采用氯仿苯酚等有毒试剂，存在一定的污染。因此，如何开发一种提取效率高，柱提取裂解过程和洗脱过程不需要加热；裂解时间大大缩短，不需要采用氯仿苯酚等有毒试剂的基因组柱提取试剂盒和提取方法，成为亟待解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种基因组柱提取试剂盒，柱提取裂解过程和洗脱过程不需要加热，裂解时间与天根试剂盒相比缩短10min；安全无污染，无氯仿苯酚等有毒试剂，既可以手工操作也可以用于自动化平台；本专利技术整个提取过程都在常温下进行，提取出浓度更高，纯度更好的核酸，为后续分子诊断，目的基因检测等提供了便利。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种基因组柱提取试剂盒，所述试剂盒包括：裂解液、蛋白酶K、异丙醇、洗涤液、洗脱液和硅胶滤膜吸附柱；所述裂解液包括如下终浓度的组分：4～6mol/L异硫氰酸胍、体积浓度为0.6～1％TritonX-100、35～45mmol/LTris-HCl和35～45mmol/L尿素，pH值为4～5；所述洗涤液包括A液和B液，所述A液为：120～130mmol/lNaCl，体积浓度80～90％无水乙醇；所述B液为：25～35mmol/lTris，体积浓度80～90％无水乙醇；所述洗脱液包括如下终浓度的组分：7～9mMTris-HCl；0.4～0.6mMEDTA。进一步地，所述裂解液包括如下终浓度的组分：5mol/L异硫氰酸胍、体积浓度为0.8％TritonX-100、40mmol/LTris-HCl和40mmol/L尿素，pH值为4.4。进一步地，所述洗涤液包括A液和B液，所述A液为：125mmol/lNaCl，体积浓度85％无水乙醇；所述B液为：30mmol/lTris，体积浓度85％无水乙醇。进一步地，所述洗脱液包括如下终浓度的组分：8mMTris-HCl；0.5mMEDTA。进一步地，所述硅胶滤膜吸附柱为上海莱枫生物公司DNA吸附柱C15。进一步地，所述蛋白酶K的浓度为20～60mg/ml。进一步地，所述异丙醇的浓度为200～400ul/ml。本专利技术还提供了所述试剂盒提取基因组的方法，所述方法包括：将待检测的样品加入裂解液混匀，后加入蛋白酶K混匀，再加入异丙醇，获得混合液；将所述混合液加入吸附柱中，离心后倒掉上清液，获得第一吸附柱；将所述第一吸附柱加入洗涤液A液，离心后倒掉上清液，后加入B液，离心后倒掉上清液，获得第二吸附柱；将所述洗涤后的吸附柱离心，后倒掉上清液，室温放置，获得第三吸附柱；将所述第三吸附柱转入新离心管中，滴加洗脱缓冲液，室温放置或者离心，获得基因组。进一步地，所述离心的转速均为12000rpm或者13,400×g，所述离心的时间均为0.5min～2min。进一步地，所述加入裂解液混匀采用上下颠倒混匀的方式。进一步地，所述加入蛋白酶K混匀，具体包括：加入蛋白酶K溶液，涡旋10s混匀，室温放置10min，其间每5min涡旋一次。本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：本专利技术提供的一种基因组柱提取试剂盒和提取方法提取的核酸浓度更高，并且核酸琼脂糖凝胶电泳，无杂带，拖带现象，说明提取核酸纯度较好；柱提取裂解过程和洗脱过程不需要加热，裂解时间与天根试剂盒相比缩短10min；安全无污染，无氯仿苯酚等有毒试剂，既可以手工操作也可以用于自动化平台；本专利技术整个提取过程都在常温下进行，提取出浓度更高，纯度更好的核酸，为后续分子诊断，目的基因检测等提供了便利。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。图1为本专利技术实验例1中的目的基因检测和核酸琼脂糖凝胶电泳图；其中1至6号分别代表对比例1-对比例6，7号代表实施例1，8号至11号分别代表对比例7-对比例10；图2为本专利技术实验例2中的目的基因检测和核酸琼脂糖凝胶电泳图；其中1至7号分别代表对比例11-对比例17，8号代表实施例1，天根代表采用天根的检测试剂盒，NC代表阴性对照组；图3为本专利技术实验例3中的目的基因检测和核酸琼脂糖凝胶电泳图；其中，(A)图为不加热结果，(B)图不加热和加热对比的结果；1-2号分别代表对比例18-对比例19，3号代表实施例1，4-5号分别代表对比例20-21；图4为本专利技术实验例4中的目的基因检测和核酸琼脂糖凝胶电泳图。具体实施方式下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本专利技术，本专利技术的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本专利技术，而非限制本专利技术。在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。除非另有特别说明，本专利技术中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得。本专利技术中的“第一”、“第二”等词不代表顺序，可以理解为名词。本申请实施例的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：根据本专利技术一种典型的实施方式，提供一种基因组柱提取试剂盒，所述试剂盒包括：裂解液、蛋白酶K、异丙醇、洗涤液、洗脱液和硅胶滤膜吸附柱；所述裂解液包括如下终浓度的组分：4～6m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因组柱提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：裂解液、蛋白酶K、异丙醇、洗涤液、洗脱液和硅胶滤膜吸附柱；/n所述裂解液包括如下终浓度的组分：4～6mol/L异硫氰酸胍、体积浓度为0.6～1％/nTritonX-100、35～45mmol/LTris-HCl和35～45mmol/L尿素，pH值为4～5；/n所述洗涤液包括A液和B液，所述A液为：120～130mmol/l NaCl，体积浓度80～90％无水乙醇；所述B液为：25～35mmol/l Tris，体积浓度80～90％无水乙醇；/n所述洗脱液包括如下终浓度的组分：7～9mM Tris-HCl；0.4～0.6mM EDTA。/n

【技术特征摘要】
1.一种基因组柱提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：裂解液、蛋白酶K、异丙醇、洗涤液、洗脱液和硅胶滤膜吸附柱；
所述裂解液包括如下终浓度的组分：4～6mol/L异硫氰酸胍、体积浓度为0.6～1％
TritonX-100、35～45mmol/LTris-HCl和35～45mmol/L尿素，pH值为4～5；
所述洗涤液包括A液和B液，所述A液为：120～130mmol/lNaCl，体积浓度80～90％无水乙醇；所述B液为：25～35mmol/lTris，体积浓度80～90％无水乙醇；
所述洗脱液包括如下终浓度的组分：7～9mMTris-HCl；0.4～0.6mMEDTA。


2.根据权利要求1所述的一种基因组柱提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液包括如下终浓度的组分：5mol/L异硫氰酸胍、体积浓度为0.8％TritonX-100、40mmol/LTris-HCl和40mmol/L尿素，pH值为4.4。


3.根据权利要求1所述的一种基因组柱提取试剂盒，其特征在于，所述洗涤液包括A液和B液，所述A液为：125mmol/lNaCl，体积浓度85％无水乙醇；所述B液为：30mmol/lTris，体积浓度85％无水乙醇。


4.根据权利要求1所述的一种基因组柱提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包括如下终浓度的组分：8mMTris-HCl；0.5m...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨思雨，郭静，董思远，舒芹，张雪娇，赵愿安，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42