植物基因组DNA的提取方法和测序方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种植物基因组DNA的提取方法和测序方法及应用。该提取方法包括：(1)将所述植物样本进行液氮研磨，利用含有CTAB的裂解液对研磨获得的粉末进行裂解处理，得到第一上清液；(2)利用醋酸钾和无水乙醇对所述第一上清液进行孵育处理，去除蛋白质和多糖，从而获得第二上清液；(3)将所述第二上清液和含有氯仿和异戊醇的混合物混匀，得到第三上清液，并进行沉淀处理，获得DNA沉淀物；(4)基于所述DNA沉淀物获得DNA溶液，利用阴离子交换树脂对所述DNA溶液进行纯化处理，从而获得所述植物的基因组DNA。应用该方法获得的植物基因组DNA纯度高，可用于三代测序。

【技术实现步骤摘要】
植物基因组DNA的提取方法和测序方法及应用
本专利技术涉及生物
，具体地，涉及一种植物基因组DNA的提取方法和测序方法及应用，尤其涉及一种适于三代测序的藻类植物基因组DNA的提取方法。
技术介绍
藻类是一类具有高度生物多样性的群体。有硅藻、褐藻、蓝藻等11门24000个品种。藻类分布范围极广，在整个生态系统中起到重要作用。藻类在水体中通过光合作用产生氧气，吸收二氧化碳，为最初的地球大气形成的中坚力量。为陆地以及水体的动物植物提供氧气，同时藻类在生长代谢过程中，吸收水体的N、P元素以及重金属元素，保证了水体质量以及水体中的物质循环。在藻类基因组学研究方面，藻类是地球上最古老的生命类群之一，与陆地高等植物相比，藻类构造十分简单，具有特殊进化地位，因此藻类的进化关系研究一直是业界中的研究重点。近些年，随着基因组学的迅速发展，藻类基因组的测序、解析，对藻类的种质鉴定和良种选育、遗传、起源以及与其他物种的进化关系的研究非常关键。三代测序技术因其良好的组装效果和技术优势成为测序界的新宠，但其对初始样品质量(DNA)要求极高。因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植物基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括：/n(1)将所述植物样本进行液氮研磨，利用含有CTAB的裂解液对研磨获得的粉末进行裂解处理，得到第一上清液；/n(2)利用醋酸钾和无水乙醇对所述第一上清液进行孵育处理，去除蛋白质和多糖，从而获得第二上清液；/n(3)将所述第二上清液和含有氯仿和异戊醇的混合物混匀，得到第三上清液，并进行沉淀处理，获得DNA沉淀物；/n(4)基于所述DNA沉淀物获得DNA溶液，利用阴离子交换树脂对所述DNA溶液进行纯化处理，从而获得所述植物的基因组DNA。/n

【技术特征摘要】
1.一种植物基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括：
(1)将所述植物样本进行液氮研磨，利用含有CTAB的裂解液对研磨获得的粉末进行裂解处理，得到第一上清液；
(2)利用醋酸钾和无水乙醇对所述第一上清液进行孵育处理，去除蛋白质和多糖，从而获得第二上清液；
(3)将所述第二上清液和含有氯仿和异戊醇的混合物混匀，得到第三上清液，并进行沉淀处理，获得DNA沉淀物；
(4)基于所述DNA沉淀物获得DNA溶液，利用阴离子交换树脂对所述DNA溶液进行纯化处理，从而获得所述植物的基因组DNA。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述植物样本进行液氮研磨，在研磨过程中加入PVP粉末，得到所述研磨获得的粉末；
任选地，所述含有CTAB的裂解液包括：质量分数为3～5％的CTAB、1～3M的氯化钠、20～50mM的EDTA、50～100mM的Tris-HCl、质量分数为1～3％的β-巯基乙醇和体积分数为1～3％的PEG8000；
任选地，所述含有CTAB的裂解液包括：质量分数为3％的CTAB、1.4M的氯化钠、20mM的EDTA、100mM的Tris-HCl、质量分数为1％的β-巯基乙醇和体积分数为1％的PEG8000；
任选地，所述β-巯基乙醇和所述PEG8000在使用之前与所述CTAB、所述氯化钠、所述EDTA、所述Tris-HCl混合。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述含有CTAB的裂解液在60～70摄氏度，优选在65摄氏度下预热后，进行所述裂解处理；
任选地，利用含有CTAB的裂解液对所述粉末在60～70摄氏度，优选在65摄氏度下裂解处理30分钟～1小时。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有氯仿和异戊醇的混合物中所述氯仿和所述异戊醇的体积比为20～25:1；
任选地，所述含有氯仿和异戊醇的混合物进一步包括酚类有机物，所述酚类有机物与所述异戊醇的体积比为20～25:1；
任选地，所述酚类有机物...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜爱钧，刘姗姗，苏小珊，徐帅帅，姬倩悦，张楠楠，张现东，张莹莹，
申请(专利权)人：青岛华大基因研究院，
类型：发明
国别省市：山东;37