一种基于稳定性同位素指纹图谱鉴别道地中药材的方法技术

一种基于稳定性同位素指纹图谱鉴别道地中药材的方法，具体方法步骤如是：１．首先测定道地中药材稳定性氮同位素组成和比值；２．其次测定道地中药材稳定性氢同位素组成和比值；３．稳定性同位素指纹图谱构建；４．道地中药材的甄别。通过该方法对鉴别道地中药材的质量、产地和搀假现象具有快速、准确、有效等优点，有很好的推广实用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种鉴别道地中药材的方法，具体地讲涉及一种利用 稳定性同位素指纹图谱鉴别道地中药材的方法。
技术介绍
中药材是我国医药宝库中的重要资源， 一些名贵的中药材由于其 独特的道地性而备受人们的青睐。然而，近几年随着国家政策对中药 材生产和深加工的倾斜， 一些道地中药材的生产受到冲击，道地中药 材搀假现象严重，直接影响我国的中医药生产和出口贸易。如何准确 和及时地检测道地中药材的质量、产地和搀假现象是我国中医药产业 化过程中急需解决的关键问题之一。目前我国鉴别中药材真假、产地 主要依据人们多年的经验，这种方法既不十分准确，又费时费力，为 此开发一种能准确鉴别中药材真假、产地的方法，成为一种现实的社 会需要。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术目的是提供一种利用氮和氢稳 定性同位素指纹图谱鉴别道地中药材的方法，主要解决目前主要依据 人们多年的经验鉴别中药材真假、产地的不十分准确问题。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案，具体方法 步骤如下一、首先测定道地中药材稳定性氮同位素组成和比值，具体步骤是①、取样将道地中药材每个样地每个种先要从5—10个单株上 分别取样，然后合而为一，形成该种的一个样品，所取样品为道地中药材的主要要用器官或组织(如充分展开的叶片、成熟枝茎或根状 茎)。② 、样品的制备(1)将所取样品烘干、粉碎与称量待测样品放入通风干燥器内，在70°C以下烘干48h，然后将叶片不包括叶柄， 叶轴用粉碎机粉碎过0.5mm的筛，装入密闭容器(小塑料瓶或密封 塑料袋)备用。(2)将样品转化为气态N2:将所测样品装入材料管， 加入CuO (短细线状)和铜(细颗粒状)各lg，以及一小片银作催 化剂，密封材料管，放入炉内燃烧， 一般在52(TC下燃烧34h，燃烧 后管内的材料被分解成N2。③ 、质谱仪测定产生的纯气体N2最终收集在测试管中，便可 在质谱仪上进行同位素测定。通常，质谱仪在计算机辅助下直接给出 同位素比值。二、 其次测定道地中药材稳定性氢同位素组成和比值，具体步骤是① 、取样将道地中药材的植物组织，尽快冷冻并冻干，或在中等温度下快速干燥，然后研磨至通过40目筛。在分析D/H比率之前， 有机物的样品需经过硝化处理，去除可能与环境交换的氢原子。② 、样品的气化、纯化和分离将测量材料装入材料管，加入催化剂1 g氧化铜、1g铜和一小片银。将材料管与真空系统连接， 抽到真空后封管，然后放入炉内燃烧。燃烧后的材料管内混杂有各种 气体，须在特制的系统中分离，使所需的气体纯化，然后收集入测试 管。③ 、质谱仪测定分析产生的纯气体H2最终收集在测试管中， 便可在质谱仪上进行同位素测定。通常，质谱仪在计算机辅助下也直 接给出同位素比值。三、 稳定性同位素指纹图谱构建-通过所测道地中药材稳定性氮和氢同位素的比值，即可在二维坐 标上构建其特征性的坐标点，进而为道地中药材建立稳定同位素的指 纹图谱，为准确和及时地检测道地中药材的质量、产地和搀假现象提 供一种新型的技术方法和手段。 四、道地中药材的甄别-由于道地中药材的稳定性同位素组成具有特异性，通过对待测 道地中药材样品的稳定性氮和氢同位素的测定，在己知稳定性同位素 标准指纹图谱上进行比对，若测定指标落入对应道地中药材的坐标点 范围内，则可认定其为道地中药材。反之，若测定的坐标点逃逸出上 图道地中药材的坐标范围，则认定其为非道地中药材，或进行了搀假。 依次原理，可进行其他道地中药材的鉴别和标准制定。本专利技术是利用稳定性氮和氢双同位素技术实现快速和有效地鉴 别中药材道地性。稳定性同位素技术是基于生物体天然存在的不具有 放射性同位素组成的一门分析方法。由于道地中药材体内合成和储存、蛋白质、氨基酸以及所有含有N元素的化合物均来自于植物对土 壤中各种N元素的吸收，而植物体本身所含的水分则主要来自于道地 中药材对地表水、灌溉水和径流水的吸收。土壤当中N元素的组成和 水分特点与中药材的道地性关系十分密切，而这又最终反应到道地中 药材本身的稳定性氮和氢同位素组成。非道地和搀假的中药材与道地 中药材的稳定性同位素组成上具有明显差别，通过稳定性同位素的测 定即可轻松鉴别中药材的道地性。 本专利技术的主要优点是-本专利技术对检测道地中药材的质量、产地和搀假现象具有快速、准 确、有效等优点。附图说明图1是道地怀山药和搀假怀山药的稳定性氮和氢同位素的标准 指纹图谱。具体实施例方式下面结合附图和实施例对本专利技术做进一步描述 实施例1:下面对部分河南道地中药材怀山药的稳定性氮和氢同位素 指纹图谱的构建，对该方法加以说明，具体方法步骤如下一、稳定性氮同位素测定程序1、 样品采集由于植物样品具有其特殊性，取样的每一个细节都必须确保最终 测定结果的误差最小。植物取样时须注意以下问题(1) 取样时，为使所取道地中药材样品更有代表性，每个样地每个 种先要从5—10个单株上分别取样，然后合而为一，形成该种的一 个样品。(2) 由于幼小植物和未成熟组织内N同化过程的同位素分馏尚未完 成，15N自然丰度还没有最后稳定。因此，取样时要注意选取己充分 展开及成熟的叶片和成熟枝茎。2、 样品的制备(1) 烘干、粉碎与称量待测样品放入通风干燥器内，在7(TC以 下烘干48h，然后将叶片(不包括叶柄，叶轴)用粉碎机粉碎过0. 5mm 的筛，装入密闭容器(小塑料瓶或密封塑料袋)备用。测稳定性氮同 位素可直接从烘干粉碎后的材料中称取样品， 一次需要的纯氮量是 60ug，所以需要你提供的样品量视样品的含氮(或蛋白质)量而定。(2) 将样品转化为气态N2将所测样品装入材料管，加入Cu0(短细线状)和铜(细颗粒 状)各lg，以及一小片银作催化剂，密封材料管，放入炉内燃烧， 一般在52(TC下燃烧34h，燃烧后管内的材料被分解成N2。3、 质谱仪测定产生的纯气体N2最终收集在测试管中，便可在质谱仪上进行同 位素测定。一、稳定性氢同位素测定程序 1、取样为避免有机物损失，所取到底中药材待测组织需尽快冷冻并冻 干，或在中等温度下快速干燥，然后研磨至通过40目筛。 一般情况 下，测量D/H只需不到3mg干有机物。在分析D/H比率之前，有机 物的样品需经过硝化处理，去除可能与环境交换的氢原子。2、 样品的气化、纯化和分离将测量材料装入材料管，加入催化剂(1 g氧化铜、1 g铜和一 小片银)。将材料管与真空系统连接，抽到真空后封管，然后放入炉 内燃烧。燃烧后的材料管内混杂有各种气体，须在特制的系统中分离， 使所需的气体纯化，然后收集入测试管。3、 质谱仪测定分析产生的纯气体H2最终收集在测试管中，在质谱仪上进行同位素 测定，得到同位素比值。 三、稳定性同位素指纹图谱构建通过所测到底中药材稳定性氮和氢同位素的比值，即可在二维坐 标上坐标点的构建，可为道地中药材建立稳定同位素的指纹图谱，为 准确和及时地检测道地中药材的质量、产地和搀假现象提供一种新型 的技术方法和手段。四、道地中药材的甄别由于道地中药材的稳定性同位素组成具有特异性，通过对待测 道地中药材样品的稳定性氮和氢同位素的测定，在已知稳定性同位素 标准指纹图谱上进行比对，若测定指标落入对应道地中药材的坐标点 范围内(图1左侧的圆圈内)，则可认定其为道地中药材。反之，若 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于稳定性同位素指纹图谱鉴别道地中药材的方法，其特征是，具体方法步骤如下：　一、首先测定道地中药材稳定性氮同位素组成和比值，具体步骤是：　①、取样：将道地中药材每个样地每个种先要从５－１０个单株上分别取样，然后合而为一，形成该种的一个样品，所取样品为道地中药材的主要要用器官或组织（如充分展开的叶片、成熟枝茎或根状茎）。　②、样品的制备：（１）将所取样品烘干、粉碎与称量待测样品放入通风干燥器内，在７０℃以下烘干４８ｈ，然后将叶片不包括叶柄，叶轴用粉碎机粉碎过０．５ｍｍ的筛，装入密闭容器（小塑料瓶或密封塑料袋）备用。（２）将样品转化为气态Ｎ↓［２］：将所测样品装入材料管，加入ＣｕＯ（短细线状）和铜（细颗粒状）各１ｇ，以及一小片银作催化剂，密封材料管，放入炉内燃烧，一般在５２０℃下燃烧３４ｈ，燃烧后管内的材料被分解成Ｎ↓［２］。　③、质谱仪测定：产生的纯气体Ｎ↓［２］最终收集在测试管中，便可在质谱仪上进行同位素测定。通常，质谱仪在计算机辅助下直接给出同位素比值。　二、其次测定道地中药材稳定性氢同位素组成和比值，具体步骤是：　①、取样：将道地中药材的植物组织，尽快冷冻并冻干，或在中等温度下快速干燥，然后研磨至通过４０目筛。在分析Ｄ／Ｈ比率之前，有机物的样品需经过硝化处理，去除可能与环境交换的氢原子。　②、样品的气化、纯化和分离：将测量材料装入材料管，加入催化剂１ｇ氧化铜、１ｇ铜和一小片银。将材料管与真空系统连接，抽到真空后封管，然后放入炉内燃烧。燃烧后的材料管内混杂有各种气体，须在特制的系统中分离，使所需的气体纯化，然后收集入测试管。　③、质谱仪测定分析：产生的纯气体Ｈ↓［２］最终收集在测试管中，便可在质谱仪上进行同位素测定。通常，质谱仪在计算机辅助下也直接给出同位素比值。　三、稳定性同位素指纹图谱构建：　通过所测道地中药材稳定性氮和氢同位素的比值，即可在二维坐标上构建其特征性的坐标点，进而为道地中药材建立稳定同位素的指纹图谱，为准确和及时地检测道地中药材的质量、产地和搀假现象提供一种新型的技术方法和手段。　四、道地中药材的甄别：　由于道地中药材的稳定性同位素组成具有特异性，通过对待测道地中药材样品的稳定性氮和氢同位素的测定，在已知稳定性同位素标准指纹图谱上进行比对，若测定指标落入对应道地中药材的坐标点范围内，则可认定其为道地中药材。反之，若测定的坐标点逃逸出上图道地中药材的坐标范围，则认定其为非道地中药材，或进行...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：易现峰，杨月琴，
申请(专利权)人：易现峰，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]