本发明专利技术涉及一种中药附子或其提取物中生物碱指纹图谱的建立方法。该方法采用反相高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以有机相－缓冲液为流动相，所述的有机相－缓冲液的ｐＨ值为３．０～８．０，检测波长２３０～２４０ｎｍ，有机相占流动相体积百分比的２０～７０％，其中，有机相为乙腈或甲醇；所述的缓冲液为醋酸铵－醋酸缓冲液、三乙胺－醋酸缓冲液、三乙胺－醋酸铵－醋酸缓冲液、三乙胺－乙酸铵－醋酸缓冲液中的一种；用适量乌头碱、新乌头碱或次乌头碱配制对照品溶液；配制供试品溶液；精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，制定中药附子及其提取物中生物碱指纹图谱。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药及其提取物的分析方法，特别是一种采用高 效液相色谱法进行中药附子及其提取物中生物碱指纹图谱的建立方 法。
技术介绍
生物碱为中药附子的主要有效成分，在附子药材及其提取物中， 生物碱主要为双酯型、单酯型乌头碱类生物碱，其中主要的九种乌头 碱类生物碱的具体结构如下<formula>formula see original document page 4</formula>现有技术中记载乌头碱类生物碱具有镇痛强心等作用，用于回阳 救逆，补火助阳，逐风除湿等。本专利技术指纹图谱实验方法按2005版中国药典一部附录VID规定 的高效液相色谱法和《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》 进行实验。但药典高效液相色谱法及《技术要求》只是一个通则和准 则，并未描述具体中药品种的分析方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种中药附子或其提取物 中生物碱指纹图谱的建立方法，具有简便、快速、可靠、信息全面的 特点，能较全面的反映附子及其提取物的质量，对中药附子质量研究 控制研究具有积极意义。本专利技术解决上述技术问题所采取的技术方案是 一种中药附子及 其提取物中生物碱指纹图谱的建立方法，采用反相高效液相色谱法， 以十八烷基硅垸键合硅胶(C18)或八垸基硅烷键合硅胶(C8)为填 充剂，以有机相-缓冲液为流动相，所述的有机相-缓冲液用醋酸调节 pH值为3.0 8.0，检测波长230 240nm，有机相占流动相体积百分 比的20 70%，其中，有机相为乙腈或甲醇；所述的缓冲液为醋酸铵-醋酸缓冲液、三乙胺-醋酸缓冲液、三乙 胺-醋酸铵-醋酸缓冲液、三乙胺-乙酸铵-醋酸缓冲液中的一种；配制对照品溶液将适量乌头碱、新乌头碱或次乌头碱用流动相 溶解，制成含乌头碱、新乌头碱或次乌头碱40 80Pg/ml的对照品溶 液,优选用新乌头碱作为对照品，新乌头碱的理论塔板数不低于2000;配制供试品溶液将附子粉末用浓氨浸润30 60分钟，加入氨水饱和过的乙醚，超声震荡5 20分钟，3 8。C冷藏过夜，过滤，残 渣用氨水饱和过的乙醚洗涤多次，过滤，合并滤液，挥干乙醚，以甲 醇溶解，用流动相稀释制成供试品溶液，过0.22Mm微孔膜；或者， 将附子提取物用盐酸溶解，无水乙醚萃取，水层用氨液调pH至9 10，用无水乙醚萃取多次，合并乙醚萃取液，挥干乙醚，用流动相配 成供试品溶液，过0.22Mm微孔膜；测定精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液 相色谱仪，制定中药附子及其提取物中生物碱指纹图谱。本专利技术的反相高效液相色谱法采用C18或C8作为填充剂(固定 相)；有机相-缓冲溶液作为流动相，流动相经过滤脱气处理；检测波 长为230 240nm;调整流动相比例，使色谱峰分离良好，在60min 内使所有色谱峰出峰。本专利技术供试品中的主要成分为单酯或双酯型生物碱，而新乌头碱 峰型良好，保留时间稳定，且有对照品标示，故选用新乌头碱色谱峰 作为参照色谱峰。在上述方案的基础上，所述醋酸铵或乙酸铵的摩尔浓度为10 40mmol/L，所述三乙胺体积浓度为0. 05 0. 2%。在上述方案的基础上，所述有机相-缓冲液的pH值为5. 0 7. 0。在上述方案的基础上，所述的有机相占流动相体积百分比为30 60%，进一步优选在36 52%。利用上述指纹图谱的建立方法测定中药附子及其提取物中的生 物碱，获得21个共有峰，其中，超过或接近总峰面积10%的色谱峰 有4个，为8号峰，其平均相对保留时间RT为0.391，平均相对峰 面积为24. 109; IO号峰，其平均相对保留时间RT为0.460，平均相 对峰面积为4. 691; 12号峰，其平均相对保留时间RT为0. 546，平均相对峰面积为7. 010; 17号峰，其平均相对保留时间RT为0.900， 平均相对峰面积为7. 395。 本专利技术的有益效果是以所选定的有机相-缓冲溶液作流动相，能很好分离附子中的各 生物碱，且分离出的色谱峰数目是现有技术中最多的，能全面反映附 子及其提取物的质量。本专利技术采用的有机相-缓冲盐溶液流动相对附 子中生物碱具有很好的分离作用，且峰型良好，保留时间稳定，符合 指纹图谱要求。附图说明图1为本专利技术的附子生物碱指纹图谱。 具体实施例方式以下将进一步结合实例来详细描述具体实施方案，以下的实施例 并非限定本专利技术方案。一种，采用反 相高效液相色谱法，用十八垸基硅垸键合硅胶或八垸基硅垸键合硅胶 为固定相，以有机相-缓冲液为流动相，所述的有机相-缓冲液的PH 值为3.0 8.0，检测波长230 240nm，所述的有机相占流动相体积 百分比的20 70%，其中，有机相为乙腈或甲醇；所述的缓冲液为醋酸铵-醋酸缓冲液、三乙胺-醋酸缓冲液、三乙 胺-醋酸铵-醋酸缓冲液、三乙胺-乙酸铵-醋酸缓冲液中的一种；配制对照品溶液将适量新乌头碱用流动相溶解，制成含新乌头 碱70l^g/ml的对照品溶液，新乌头碱的理论塔板数不低于2000。配制供试品溶液A、 附子称取不同产地各批号的附子粗粉各10g，置具塞锥形瓶中，以5ml 浓氨浸润l小时左右，加入100ml氨水饱和的乙醚，超声震荡10分 钟，4'C冷藏过夜，过滤，残渣以氨水饱和的乙醚洗涤3次，过滤， 合并滤液，挥干乙醚，以甲醇溶解，过滤至10ml量瓶中，少量多次 用甲醇荡洗转移至量瓶中，稀释至刻度，反相高效液相色谱分析前用 0.22ym微孔滤膜过滤，备用。B、 附子提取物称取不同产地各批号的附子粗粉进行水提，提取物50mg，精密 称定，20mL0.01mo1盐酸溶解，50mL无水乙醚萃取，水层用氨试液调 pH至9 10，分别用50mL、 30mL、 20mL无水乙醚萃取三次，合并乙 醚层，35'C挥干乙醚，用流动相溶解配制成不同浓度的供试品溶液， 反相高效液相色谱分析前用过0. 22 u m滤膜，备用。 测定仪器Waters高效液相色谱仪包括Waters 1525双色谱泵，Waters2487 Dual X Absorbance紫外检测器，Waters 717 plus自动进样器， Waters in-line脱气机，Waters Breeze色谱工作站。 测定方法分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液20 uL注入高效液 相色谱仪，记录60分钟的色谱图。 实施例1采用本专利技术的方法对样品A进行测定时，以C18为填料 (Phe隱enexC18 (250mmX4. 6mm， 5um))，甲醇-缓冲液为流动相， 缓冲液为20mmol/L醋酸铵-醋酸缓冲液，以醋酸调节pH值为5. 3，甲醇与缓冲液的体积比为48: 52，检测波长234nm。新乌头碱色谱峰 保留时间为48. 12 48. 25min，新乌头碱的理论塔板数不低于2000。 实施例2采用本专利技术的方法对样品B进行测定时，以C18为填料(Kromasil C18 (250mmX4.6mm，5um))，甲醇-缓冲液为流动相，缓冲液为0. 2% 三乙胺-醋酸缓冲液，以醋酸调节pH值为5.5，甲醇与缓冲液的体积 比为38: 62，检测波长235nm。新乌头碱色谱峰保留时间为48. 93 49.01min，理论塔板数不低于2000。 实施例3采用本专利技术的方法对样品C本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种中药附子及其提取物中生物碱指纹图谱的建立方法，采用反相高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以有机相－缓冲液为流动相，其特征在于：所述的有机相－缓冲液的ｐＨ值为３．０～８．０，检测波长２３０～２４０ｎｍ，有机相占流动相体积百分比的２０～７０％，其中， 有机相为乙腈或甲醇； 所述的缓冲液为醋酸铵－醋酸缓冲液、三乙胺－醋酸缓冲液、三乙胺－醋酸铵－醋酸缓冲液、三乙胺－乙酸铵－醋酸缓冲液中的一种； 配制对照品溶液：将适量乌头碱、新乌 头碱或次乌头碱用流动相溶解，制成含乌头碱、新乌头碱或次乌头碱４０～８０μｇ／ｍｌ的对照品溶液； 配制供试品溶液：将附子粉末用浓氨浸润３０～６０分钟，加入氨水饱和过的乙醚，超声震荡５～２０分钟，３～８℃冷藏过夜，过滤，残渣用氨水饱和过的 乙醚洗涤多次，过滤，合并滤液，挥干乙醚，以甲醇溶解，用流动相稀释制成供试品溶液，过０．２２μｍ微孔膜；或者，将附子提取物用盐酸溶解，无水乙醚萃取，水层用氨液调ｐＨ至９～１０，用无水乙醚萃取多次，合并乙醚萃取液，挥干乙醚，用流动相配成供试品溶液，过０．２２μｍ微孔膜； 测定：取上述对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，制定中药附子及其提取物中生物碱指纹图谱。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨春艳，林彬，刘跃跃，王成，乔德水，高雪芹，
申请(专利权)人：江苏万邦生化医药股份有限公司，上海复星医药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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