本发明专利技术公开了一种使用高效毛细管电泳(HPCE)建立秦皮药材或其提取物指纹图谱的方法，其包括以下步骤：(a)供试品溶液的制备：取秦皮药材或其提取物，加有机溶剂提取，定容，即为供试品溶液；(b)参照物溶液的制备：配制黄豆苷元溶液作为内标；(c)电泳分析条件：以磷酸二氢盐-硼砂为缓冲贮备液，其pH值介于7.8-9.2之间，优选为8.6；以乙腈为有机改性剂；检测波长介于200-400nm之间，优选为210nm；工作电压介于5-30kV之间，优选为20kV；(d)测定方法：取待分析样品溶液适量，依次装入样品瓶并上HPCE测定，记录电泳谱图；(e)数据分析：以内标物的保留时间为1，计算各谱峰的相对迁移时间，以内标物的峰面积为1，计算各谱峰的相对峰面积。本发明专利技术为更快速有效的鉴别市场上秦皮或其提取物的假冒伪劣品和区分不同产区商品药材提供新的方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药指纹图谱的建立方法，具体来说，涉及秦皮药材或其提取物 HPCE指纹图谱的建立方法和应用。
技术介绍
秦皮因地变异，品种来源有所不同，但均属于木犀科(Oleaceae)涔属(Fraxinus) 植物，其形态特征和气味与本草所载类似。《中华人民共和国药典》2010年版一部规定秦 1 ^ IsJMiiiItl^Iffi S^hW Fraxinusrhynchophylla Hance> S^hW Fraxinus chinensis Roxb.、尖叶白赌树 Fraxinus szabaona Lingelsh.或宿柱白赌树 Fraxinus stylosa Lingelsh.的干燥枝皮或干皮。其中苦枥白蜡树分布于吉林、辽宁、河北、河南等地。白蜡树分布于华北、西北、华东、中南、西南及辽宁。尖叶白蜡树分布于河北、陕西、山西、甘肃、湖南。宿柱白蜡树分布于陕西。商品药材主要包括东北秦皮或辽宁秦皮(苦枥白蜡树)、四川秦皮(白蜡树)、陕西白点秦皮(宿柱白蜡树)、河南秦皮等。秦皮具有清热解毒、清肝明目的功效，用于热痢、泄泻、赤白带下、目赤肿痛、目生翳膜等症。现代药理研究表明，秦皮具有抗病原微生物、抗炎、利尿、抗凝和抗过敏、止咳祛痰平喘、中枢抑制、抗肿瘤等多种作用，临床可用治菌痢、慢性气管炎、结膜炎等。秦皮主要含秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素等香豆素化合物，中国药典规定秦皮药材的基源包括4种木犀科涔属植物。由于秦皮为多基源品种，加上原植物分布的地理环境不同，导致不同产地、来源的商品药材质量差异较大，同时秦皮及混伪药材种类亦较复杂，亟待澄清。因此，建立一种客观、全面、快速评价其内在质量的方法极为重要。目前为止，秦皮内在质量控制大多采用秦皮甲素和秦皮乙素的含量测定方法，仅一篇文献涉及了更能揭示内在质量的秦皮指纹图谱研究，但该研究采用HPLC法，存在分析时间长(75min)， 有机溶剂消耗多，对环境污染大等诸多不足。为此，本专利技术提供以HPCE为分析手段的秦皮药材或其提取物的指纹图谱构建方法，为秦皮内在质量的全面控制提供新的分析手段，以达到更快速有效的鉴别市场上秦皮或其提取物的假冒伪劣品和区分不同产区商品药材的目的。
技术实现思路
本专利技术一方面涉及一种使用HPCE建立秦皮药材或其提取物指纹图谱的方法，其特征在于包括以下步骤(a)供试品溶液的制备取秦皮药材或其提取物，加有机溶剂提取，定容，即为供试品溶液；(b)参照物溶液的制备配制黄豆苷元溶液作为内标；(c)电泳分析条件以磷酸二氢盐-硼砂为缓冲贮备液，其pH值介于7. 8-9. 2之间，优选为8. 6 ；以乙腈为有机改性剂；检测波长介于200-400nm之间，优选为210nm ；工作电压介于5-30kV之间，优选为20kV ；(d)测定方法取待分析样品溶液适量，依次装入样品瓶并上HPCE进行测定，记录电泳谱图；(e)数据分析以内标物的保留时间为1，计算各谱峰的相对迁移时间，以内标物的峰面积为1，计算各谱峰的相对峰面积。在本专利技术的一个实施方式中，步骤(a)中的有机溶剂是C1-C6的低级醇，优选为甲醇，进一步优选为回流提取或超声提取。在本专利技术的一个实施方式中，其中制备缓冲贮备液时使用的磷酸二氢盐的浓度为 80-120mmol/L，优选为100mmol/L，硼砂溶液浓度为30-70mmol/L，优选为50mmol/L，两种溶液的体积配比为2 1-1 4，优选为1.02 1.98。在本专利技术的一个实施方式中，色谱运行时缓冲贮备液水有机改性剂的体积配比为 1.5 1 0. 2-4 1 1，优选为 3 1 0.8。另一方面，本专利技术还涉及秦皮指纹图谱在秦皮药材或其提取物质量检测中的应用，其特征在于以黄豆苷元内标物为参比峰，其中包括4个特征峰，分别为7号峰，相对迁移时间0. 905，RSD 0. 52% ；8号峰，相对迁移时间0. 926，RSD 0. 41% ；11号峰，相对迁移时间1. 077，RSD 1. 21% ；15号峰，相对迁移时间1. 168，RSD 1. 51% ；在本专利技术的一个实施方式中，所述的秦皮指纹图谱还包括一个或多个特征峰，所述的特征峰选自1号峰，相对迁移时间0. 600，RSD 3. 24% ；2号峰，相对迁移时间0. 764，RSD 1. 41% ；3号峰，相对迁移时间0. 773，RSD 1. 38% ；4号峰，相对迁移时间0. 800，RSD 1. 14% ；5号峰，相对迁移时间0. 809，RSD 1. 04% ；6号峰，相对迁移时间0. 879，RSD 0. 73% ；10号峰，相对迁移时间1. 024，RSD 0. 85% ；12号峰，相对迁移时间1. 096，RSD 1. 08% ；13号峰，相对迁移时间1. 121，RSD 1. 51% ；14号峰，相对迁移时间1. 145，RSD 1. 66% ；16号峰，相对迁移时间1. 187，RSD 1. 61%。本专利技术还涉及所述的秦皮指纹图谱在秦皮药材或其提取物质量检测中的应用。在本专利技术的一个实施方式中，所述的质量检测是指用本专利技术方法获得的待检测秦皮药材或其提取物HPCE指纹图谱与对照药材或其提取物的对照HPCE指纹图谱相似度在 90%以上，优选在95%以上。所述的相似度是指其各自的电泳谱图以AIA文件形式导入国家药典委员会2004A版中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算得到。附图说明图1秦皮药材指纹图谱，其中9号峰为内标峰；图220批秦皮导出的对照指纹图谱，其中9号峰为内标峰；图3秦皮3D色谱图。 具体实施例方式样品于2005年3月 2007年3月之间收集，除四川犍为样品为产地收集外，其余样品均购于各城市不同药店和药材市场不同经营点。同一零售大药房间隔半年购买一次， 药材批发市场每季度购买一次，每次在5个不同商家购买，其产地由商家提供。秦皮药材详细信息见下表。表1样品来源本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种使用ＨＰＣＥ建立秦皮药材或其提取物指纹图谱的方法，其特征在于包括以下步骤：（ａ）供试品溶液的制备：取秦皮药材或其提取物，加有机溶剂提取，定容，即为供试品溶液；（ｂ）参照物溶液的制备：配制黄豆苷元溶液作为内标；（ｃ）电泳分析条件：以磷酸二氢盐－硼砂为缓冲贮备液，其ｐＨ值介于７．８－９．２之间，优选为８．６；以乙腈为有机改性剂；检测波长介于２００－４００ｎｍ之间，优选为２１０ｎｍ；工作电压介于５－３０ｋＶ之间，优选为２０ｋＶ；（ｄ）测定方法：取待分析样品溶液适量，依次装入样品瓶并上ＨＰＣＥ测定，记录电泳谱图；（ｅ）数据分析：以内标物的保留时间为１，计算各谱峰的相对迁移时间，以内标物的峰面积为１，计算各谱峰的相对峰面积。
【技术特征摘要】
1.一种使用HPCE建立秦皮药材或其提取物指纹图谱的方法，其特征在于包括以下步骤(a)供试品溶液的制备取秦皮药材或其提取物，加有机溶剂提取，定容，即为供试品溶液；(b)参照物溶液的制备配制黄豆苷元溶液作为内标；(c)电泳分析条件以磷酸二氢盐-硼砂为缓冲贮备液，其pH值介于7.8-9. 2之间，优选为8. 6 ；以乙腈为有机改性剂；检测波长介于200-400nm之间，优选为210nm ；工作电压介于5-30kV之间，优选为20kV ；(d)测定方法取待分析样品溶液适量，依次装入样品瓶并上HPCE测定，记录电泳谱图；(e)数据分析以内标物的保留时间为1，计算各谱峰的相对迁移时间，以内标物的峰面积为1，计算各谱峰的相对峰面积。2.根据权利要求1所述的建立指纹图谱的方法，其中步骤(a)中的有机溶剂是C1-C6 的低级醇，优选为甲醇，进一步优选为回流提取或超声提取。3.根据权利要求1所述的建立指纹图谱的方法，其中制备缓冲贮备液时使用的磷酸二氢盐的浓度为80-120mmol/L，优选为lOOmmol/L，硼砂溶液浓度为30-70mmol/L，优选为 50mmol/L，两种溶液的体积配比为2 1-1 4，优选为1.02 1.98。4.根据权利要求3所述的建立指纹图谱的方法，HPCE运行时缓冲贮备液水有机改性剂的体积配比为1.5 1 0. 2-4 1 1，优选为3 1 0. 8。5.秦皮指纹图谱在秦皮药材或其提取物质量检测中的应用，其特征在于以黄豆苷元内标物为参比峰，其中包括4个特征峰，分别为7号峰，相对...
【专利技术属性】
技术研发人员：张琦，
申请(专利权)人：西南民族大学，
类型：发明
国别省市：90
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