ORF016基因缺失型山羊痘病毒株及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种gRNA，所述gRNA序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示，本发明专利技术还公开了重组质粒、ORF016基因缺失型山羊痘病毒株及其制备方法和应用。本发明专利技术首次通过基因敲除方法获得了ORF016基因缺失型山羊痘病毒株，该方法是首次将CRISPR技术在山羊痘病毒中进行应用，同时本发明专利技术采用了反向转染方法对ORF016基因进行了敲除，该方法的敲除效率达到了31.6%，远远高于现有技术中的敲除效率。同时，本发明专利技术所获得的SDLVDUORF016毒株是一株仅缺失ORF016的毒株，基因的缺失对其生长特性没有影响，该毒株可用于山羊痘疫苗、检测试剂、山羊痘病毒鉴定等用途。

【技术实现步骤摘要】
ORF016基因缺失型山羊痘病毒株及其制备方法和应用
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及ORF016基因缺失型山羊痘病毒株及其制备方法和应用。
技术介绍
山羊痘病毒是一种急性的高度接触性传染病，近年来在我国多个地区流行。该病发病率和死亡率高，病羊发热，全身皮肤，特别是身体无毛部分或粘膜出现典型痘疮。山羊痘病毒可以感染所有品种、性别和年龄的山羊，羔羊最为易感，感染率可达100％，死亡率可达100％。该病的暴发给我国养羊产业和皮毛业的发展造成了巨大的经济损失，还严重影响了国家畜牧业的发展和国际贸易。自2002年以来，人们陆续开展了山羊痘病毒和绵羊痘病毒的基因组序列研究，获得了多株病毒流行株、疫苗株的全基因序列，为深入开展羊痘病毒分子机制研究提供了重要的信息资源。值得注意的是，山羊痘病毒的流行毒株和疫苗毒株之间的差异很小，使弱毒疫苗具有潜在的致病性和毒力返强的危险性，事实上近来越来越多的报道显示，在我国应用很广的山羊痘疫苗能够引起危险的并发症，包括引起皮肤结节、孕羊的流产等，为有效防控羊痘带来了隐患，不利于彻底消灭羊痘。因此，有必要进一步探本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种gRNA，其特征在于，所述gRNA序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种gRNA，其特征在于，所述gRNA序列如SEQIDNO：1或SEQIDNO：2所示。


2.含有权利要求1所述的gRNA的重组质粒。


3.采用权利要求1的gRNA获得的ORF016缺失型基因，其核苷酸序列如SEQIDNO：9所示。


4.采用权利要求1的gRNA获得的ORF016基因缺失型蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO：10所示。


5.权利要求1所述的gRNA、权利要求2所述的重组质粒在基因敲除方面的应用。


6.含有权利要求3所述的ORF016缺失型基因的山羊痘病毒株，其特征在于，所述病毒株采用含有权利要求2所述的重组质粒转染后得到。


7.根据权利要求6所述的ORF016缺失型基因的山羊痘病毒株，其特征在于，所述转染方法包括常规脂质体转染感染法、反向转染法或先感染后转染法中的一种。


8.一种ORF016基因缺失型的山羊...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐娜，沈志强，张倩，苑文娴，王金良，魏凤，任艳玲，
申请(专利权)人：山东省滨州畜牧兽医研究院，山东绿都生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37