一种sgRNA及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体公开了一种sgRNA及其应用。本发明专利技术的sgRNA的靶基因为蛋白编码基因或miRNA，含有PAM位点NGG，N为任意碱基；当靶基因为蛋白编码基因时，sgRNA的靶序列为不同转录本的CDS的交集序列；若不同转录本的CDS没有交集，则为最长的转录本；当靶基因为miRNA时，sgRNA的靶序列为miRNA前体序列或成熟序列；sgRNA还具有以下结构：(1)其包含X‑NGG结构，其中，X包含与靶序列互补的核苷酸序列，长度为20bp；(2)G和C的总含量为45‑70％；(3)不含有4个以上连续排列的T。以该sgRNA构建的文库有效性高，可实现高通量筛选猪的功能基因。

【技术实现步骤摘要】
一种sgRNA及其应用
本专利技术涉及生物
，具体地说，涉及一种sgRNA及其应用。
技术介绍
快速寻找控制表型的重要或关键基因的方法往往是通过功能缺失型或功能获得型高通量筛选。在基因敲除文库之前，多采用RNA干扰文库或shRNA文库方法进行筛选。然而其存在脱靶效应明显的缺点，且并非基因敲除文库，只能使基因部分沉默表达。原核生物第二类适应性免疫系统CRISPR/Cas9系统的工作原理在于，Cas9核酸内切酶在sgRNA的引导下切割双链DNA，造成双链的断裂，利用基因组修复的不稳定性产生修复错误(碱基的缺失或插入)，从而造成移码突变，实现基因敲除的目的。目前在人类、小鼠以及斑马鱼等生物中，此技术已得到广泛应用并取得成功，证明其是一个基因编辑的有效工具。CRISPR/Cas9-sgRNA系统中的sgRNA决定了基因编辑的位点和基因编辑的效率。研究已经表明，不同的sgRNA有不同的编辑效率和有效性。故如何获得基因敲除效果更好的sgRNA是一个值得研究的技术方向。
技术实现思路
本专利技术针对猪全基因组蛋白编码基因以及本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种sgRNA，其能够识别猪全基因组的靶基因之一，所述靶基因为蛋白编码基因或miRNA；所述靶基因含有PAM位点，所述PAM位点为NGG，N为任意碱基；/n当所述靶基因为蛋白编码基因时，所述sgRNA的靶序列为所述靶基因的不同转录本的CDS的交集序列；若所述靶基因的不同转录本的CDS没有交集，所述sgRNA的靶序列为所述靶基因的核苷酸序列最长的转录本；/n当所述靶基因为miRNA时，所述sgRNA的靶序列为miRNA前体序列或成熟序列；/n所述sgRNA还具有以下结构：/n(1)所述sgRNA的核苷酸序列包含X-NGG结构，其中，X包含与所述靶序列互补的核苷酸序列，X的长度为20bp；所述...

【技术特征摘要】
1.一种sgRNA，其能够识别猪全基因组的靶基因之一，所述靶基因为蛋白编码基因或miRNA；所述靶基因含有PAM位点，所述PAM位点为NGG，N为任意碱基；
当所述靶基因为蛋白编码基因时，所述sgRNA的靶序列为所述靶基因的不同转录本的CDS的交集序列；若所述靶基因的不同转录本的CDS没有交集，所述sgRNA的靶序列为所述靶基因的核苷酸序列最长的转录本；
当所述靶基因为miRNA时，所述sgRNA的靶序列为miRNA前体序列或成熟序列；
所述sgRNA还具有以下结构：
(1)所述sgRNA的核苷酸序列包含X-NGG结构，其中，X包含与所述靶序列互补的核苷酸序列，X的长度为20bp；所述sgRNA的核苷酸序列中的NGG与所述靶基因的PAM位点一致；
(2)所述sgRNA的核苷酸序列中，G和C的总含量为45-70％；
(3)所述sgRNA的核苷酸序列中不含有4个以上连续排列的T。


2.一种表达载体，其包括与至少一个表达控制序列可操作地连接的编码权利要求1所述的sgRNA的DNA片段。


3.根据权利要求2所述的表达载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘剑锋，胡蒸蒸，余健，杜恒，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11