一种能提高金龟子绿僵菌防治白蚁效果的IDH基因dsRNA制造技术

本发明专利技术涉及一种能提高金龟子绿僵菌防治白蚁效果的IDH基因dsRNA。本发明专利技术中dsRNA的序列设计来源于黑胸散白蚁和黑翅土白蚁体内一种关键代谢酶基因，即异柠檬酸脱氢酶（

【技术实现步骤摘要】
一种能提高金龟子绿僵菌防治白蚁效果的IDH基因dsRNA
本专利技术涉及一种能提高金龟子绿僵菌防治白蚁效果的IDH基因dsRNA。
技术介绍
白蚁是一种古老的社会性有害昆虫，能够危害我国农林作物、园林树木、房屋建筑和水利工程等，具有“无牙老虎”之称，严重威胁人民的生命和财产安全。在我国，除新疆、青海、宁夏、内蒙古和黑龙江等少数省（区）外，其余各省（区）均有白蚁分布。我国每年因白蚁危害造成的经济损失达100亿人民币，因此白蚁防治工作受到高度重视。目前，防治白蚁的方法有物理防治、化学防治、生物防治等方法，其中化学防治是白蚁防治的主要手段。目前，许多高毒高污染化学药剂已被禁用，如氯丹和灭蚁灵。因此，研究和开发无毒、无污染、对环境友好的生物防治药剂成为白蚁防治领域的迫切需求之一。金龟子绿僵菌（Metarhiziumanisopliae）是应用最为广泛的昆虫致病真菌之一，其生防药剂对蝗虫、蛴螬、天牛、象甲等害虫致病力强，具有一定专一性、对人畜无害、不污染环境、无残留、害虫不会产生抗药性等优点，因此备受推崇。我国白蚁防治工作者在利用金龟子绿僵菌防治本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种能提高金龟子绿僵菌防治白蚁效果的IDH基因dsRNA，其特征在于：由如 SEQ IDNO: 1所示的核苷酸序列或SEQ ID NO: 2所示的核苷酸序列组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种能提高金龟子绿僵菌防治白蚁效果的IDH基因dsRNA，其特征在于：由如SEQIDNO:1所示的核苷酸序列或SEQIDNO:2所示的核苷酸序列组成。


2.一种能提高金龟子绿僵菌防治白蚁效果的IDH基因dsRNA的制备方法，其特征在于，
（1）分别提取黑胸散白蚁和黑翅土白蚁体内总RNA，通过反转录获得白蚁cDNA库；
（2）以白蚁cDNA为模板，利用IDH特异性引物，通过PCR扩增IDH基因片段，随后通过琼脂糖凝胶电泳分离、纯化IDH基因片段；
（3）通过T-A克隆将IDH基因片段导入pMD18-T质粒，通过摇菌检测获得含目的基因IDH的IDH质粒；
（4）以上述IDH质粒为模板，利用含T7启动子的IDH特异性引物，通过PCR扩增得到IDH基因dsRNA模板，随后通过酚/氯仿/异戊醇混合溶剂对模板进行纯化和浓缩；
（5）利用上述IDH基因dsRNA模板和通过T7体外转录系统转录生成IDH基因dsRNA。


3.根据权利要求2所述的能提高金龟子绿僵菌防治白蚁效果的IDH基因dsRNA的制备方法，其特征在于，IDH特异性引物：黑胸散白蚁的上游引物5’-AGGCTGCGATTGAGTCTG-3’，下游引物5’-ACCAGCACACATATCAGAC-3’。


4.根据权利要求2所述的能提高金龟子绿僵菌防治白蚁效果的IDH基因dsRNA的制备方法，其特征在于，IDH特异性引物还可以为：黑翅土白蚁的上游引物5’-ACCCTGTCGATCACTGGAAG-3’，下游引物5’-TTGCTTTATCTTGGCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄求应，刘龙，徐焕，雷朝亮，赵星颖，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42