基于PLIN1基因的sgRNA、质粒载体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种基于PLIN1基因的sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示。本发明专利技术还公开了扩增该sgRNA序列的引物对、基于PLIN1基因的CRISPR/Cas9敲除质粒载体及其应用。本发明专利技术的构建了控制猪PLIN1基因表达的载体及验证其相应的敲除效率。本发明专利技术还提供三种用于控制猪PLIN1表达的载体并验证其敲除效率并选出一种最优敲除载体，通过所述载体能够控制猪细胞中的PLIN1表达量，进而控制猪的肌肉的纤维组成，调节瘦肉率的变化。本发明专利技术还验证了该PLIN1基因敲除后的线粒体活性氧含量有所升高、线粒体膜电位检测升高、ATP含量降低、细胞周期发生阻滞，而细胞凋亡率大大降低。

SgRNA and plasmid vectors based on plin1 gene and their construction methods and Applications

【技术实现步骤摘要】
基于PLIN1基因的sgRNA、质粒载体及其构建方法和应用
本专利技术涉及生物
，涉及基于PLIN1基因的sgRNA、质粒载体及其构建方法和应用。
技术介绍
PLIN属于结构蛋白家族，最早由Greenberg等发现于小鼠的附睾脂肪细胞中有表达。围脂滴蛋白(Perilipin1，PLIN1)是PLIN家族中唯一一个通过与脂肪酶的相互作用在调节脂肪分解方面发挥特定作用的成员，这一分子仅在脂肪组织中表达，如棕色脂肪组织、白色脂肪组织和胆固醇等。PLIN1专门定位于脂肪细胞脂滴表面，调节脂肪甘油三酯的储存和水解。也有研究发现，在机体基础状态下PLIN1对脂滴存有屏障作用，可有效降低甘油三酯的解，当其含量降低或者发生磷酸化时，就可以加快甘油三酯的分解，是脂质代谢的一个重要环节。越来越多研究表明，PLIN1基因对肌肉生长发育、能量代谢及线粒体功能有调控作用。目前的研究中，PLIN1基因均是和其他基因联合作用，例如PLIN1可以同线粒体融合蛋白Mfn2进行直接相互作用，线粒体融合蛋白2(mitofusin2，Mfn2)的表达和骨骼肌线粒体分裂的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于PLIN1基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或 SEQ ID NO：3所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于PLIN1基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQIDNO：1或SEQIDNO：2或SEQIDNO：3所示。


2.一种扩增权利要求1所述的基于PLIN1基因的sgRNA的引物对，其特征在于，所述引物对序列分别如SEQIDNO：4和SEQIDNO：5；或SEQIDNO：6和SEQIDNO：7所示；或SEQIDNO：8或SEQIDNO：9所示。


3.一种基于PLIN1基因的CRISPR/Cas9敲除质粒载体，其特征在于，所述载体包括权利要求1所述的sgRNA。


4.根据权利要求3所述的猪PLIN1基因的CRISPR/Cas9敲除质粒载体，其特征在于，所述载体为pYSY-CMV-Cas9-U6--EFla...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭玥晗，鞠辉明，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32