一种靶向敲除RPSA基因的sgRNA及RPSA基因敲除细胞系的构建方法技术

本发明专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种靶向敲除RPSA基因的sgRNA及RPSA基因敲除细胞系的构建方法。本发明专利技术设计了一种特异性靶向RPSA基因的sgRNA；所述的sgRNA能够特异性靶向RPSA基因，应用CRISPR‑Cas9技术实现了对宿主细胞中RPSA基因的完全敲除，敲除效率高；本发明专利技术还提供了一种通过CRISPR‑Cas9技术将所述sgRNA转染于宿主细胞，构建RPSA基因敲除细胞系的方法；敲除宿主细胞中RPSA基因不仅能够促进FMDV病毒的复制，可用于提高FMDV疫苗的生产量和抗原表达量；而且还意外的发现，敲除宿主细胞中RPSA基因能够显著抑制塞内卡谷病毒在细胞内的复制；为进一步研究RPSA基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制提供研究工具和材料。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向敲除RPSA基因的sgRNA及RPSA基因敲除细胞系的构建方法
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种靶向敲除RPSA基因的sgRNA、RPSA基因敲除细胞系的构建方法。
技术介绍
基因组操作技术是基于基因组和基因信息技术发展起来的通过人工设计实现对特定基因或基因组靶位点进行精确编辑的前沿技术，目前已经成为生物医学、农业动物育种和模式动物等领域的研究热点。通过人为操作引起基因组特定碱基插入、缺失或替换等，对基因组进行精确修饰和定向编辑的基因组编辑(Genomeediting)技术的出现使得生命科学的各大领域有了新的进步，并且被广泛应用于基础研究和临床治疗等方面。最初的基因编辑技术是将外源DNA，利用注射或者电转的方法导入细胞中，通过发生同源重组把导入的DNA片段插入到细胞基因组，但是此类技术对细胞活性和外源DNA损伤较大，致使其插入效率较低，导致其应用以及推广上受到一定程度上的限制。CRISPR-Cas9(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats/Cas9)基因编本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.使RPSA基因编码蛋白的功能丧失制备具有抑制塞内卡谷病毒(Seneca valleyvirus)复制细胞的应用。/n

【技术特征摘要】
1.使RPSA基因编码蛋白的功能丧失制备具有抑制塞内卡谷病毒(Senecavalleyvirus)复制细胞的应用。


2.使RPSA基因编码蛋白的功能丧失构建具有塞内卡谷病毒(Senecavalleyvirus)抗性细胞系的应用。


3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述使RPSA基因编码蛋白的功能丧失的方法包括基因敲除技术、基因突变技术、基因插入技术。


4.一种特异性靶向RPSA基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA包括RPSA-sgRNA1、RPSA-sgRNA2、RPSA-sgRNA3、RPSA-sgRNA4中的任一种，所述sgRNA的核苷酸序列为：
RPSA-sgRNA1-F：5’-GCTCAATAGCAACGATGGCCC-3’；
RPSA-sgRNA1-R：5’-GGGCCATCGTTGCTATTGAGC-3’；
RPSA-sgRNA2-F：5’-GCATCGTTGCTATTGAGAACC-3’；
RPSA-sgRNA2-R：5’-GGTTCTCAATAGCAACGATGC-3’；
RPSA-sgRNA3-F：5’-GTCTCAATAGCAACGATGGCC-3’；
RPSA-sgRNA3-R：5’-TCGTTGCTATTGAGAACCCGC-3’；
RPSA-sgRNA4-F：5’-GTCTCAATAGCAACGATGGCC-3’；
RPSA-sgRNA4-R：5’-GGCCATCGTTGCTATTGAGAC-3’。


5.如权利要求4所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA为RPSA-sgRNA2、所述sgRNA的核苷酸序列为：
RPSA-sgRNA2-F：5’-GCATCGTTGCTATTGAGAACC-3’；
RPSA-sgRNA2-R：5’-GGTTCTCAATAGCAACGATGC-3’。


6.如权利要求4或5所述的sgRNA在敲除RPSA基因中的应用。


7.如权利要求4或5所述的sgRNA在制备RPSA基因编码蛋白功能丧失细胞系中的应用。


8.一种用于敲除RPSA基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求4或5所述的sgRNA或靶向敲除RPSA基因的打靶载体，所述靶向敲除RPSA基因的打靶载体包括权利要求4或5所述的sgRNA和Cas9蛋白基因的编码序列。


9.一种RPSA基因编码蛋白功能丧失细胞系的构建方法，其特征在于，所述方法为：通过基因打靶技术使宿主细胞中RPSA基因编码蛋白功能丧失。


10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法为CRISPR-Cas9技术。


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【专利技术属性】
技术研发人员：郑海学，朱紫祥，张向乐，高利利，杨帆，曹伟军，王聪聪，刘湘涛，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62