一种急性心肌梗塞检测试剂合制造技术

一种急性心肌梗塞检测试剂合。是利用一固定有多种高特异性、高效价的抗体的微标盘以吸附受检体中的血液生化标志物。以及利用一组具有相同测定参数的试剂，故能在单次操作中快速取得急性心肌梗塞相关血液生化标志物在血液中浓度的定量数字。可供同时检测肌酸激酸ＭＢ／总肌酸激酶化值，乳酸脱氢酶Ⅰ／总乳酸脱氢酶比值，醣原磷酸化酶ＢＢ／总醣原磷酸化酶总活性比值，肌红蛋白／碳酸酐酶Ⅲ型比值，脂肪酸结合蛋白／碳酸酐酶Ⅲ型比值，肌红蛋白血清浓度以及谷氨酸－草酰乙酸转氨酶的血清浓度。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是关于一种急性心肌梗塞检测试剂合，尤其是利用一种酶的免疫测定方法及一组能使产物具有同一测定参数的试剂组，由此所得各种心肌梗塞标志蛋白异构酶及酶的检测数据，可以换为各种急性心肌梗塞血液生化标志物比值，据此，以改善单一急性心肌梗塞标志物测量所伴生的临床病理专一性(Specificity)及灵敏度(Sensitivity)不足的问题。心脏血管疾病是国内癌症以外的最主要死亡原因，其中心肌梗塞是心脏血管疾病中的单项最大死因。从病人感到胸痛开始到溶血栓药物治疗，只有约四至六小时的宝贵时间可做处理，病人的救治是分秒必争的，不容时间上的耽搁。此病症的诊断主要是由心电图及一些血液生化标志物的测定来帮助医生做判断，以采取适当的紧急措施。然而，愈来愈多的数据显示有半数以上的急性心肌梗塞病患为心电图仪无法诊断的(Electrocardiogram Non-diagnostic)。因此，近年来多采用血液生化标志物来测定急性心肌梗塞。这些用于诊断急性心肌梗塞的血液生化标志物包括肌酸激酶MB(CreatineKinase MB；CKMB)，乳酸脱氢酶I型(Lactate Dehydrogenase I；LDHI)，肌红蛋白(Myoglobin)，肌浆球蛋白轻链(Myosin LightChain)，肌钙蛋白I(Troponin I)，肌钙蛋白T(Troponin T)，谷氨酸一草酰乙酸转氨酶(Glutamic-Oxaloacetic Transaminase；GOT)，总肌酸激酶，总乳酸脱氢酶，醣原磷酸化酶BB(Glycogen Phospho-rylase BB)，碳酸酐酶III型(Carbonic Anhydrase III)，烯醇化酶(Enolase)及心肌专一性脂肪酸结合蛋白(Cardial Fatty AcidBinding Protein)……等等。其中肌酸激酶MB在发生心肌梗塞后约3～8小时开始增加，36～48小时恢复常值，为早期的血液生化标志物；乳酸脱氢酶I型则在8～12小时开始增加，持续高活性至一周以上；为后期的生化标志物。血液中肌红蛋白量的变化，除被认为是非专一性的最早期血液生化标志物外，并已被认为验证急性心肌梗塞病人，接受药物灌注治疗效果的非侵入式(Non-invasive)的重要依据。针对这些血液生化标志物，测定的方法很多，如(一)免疫电泳法。将受检体加入特定分析项目的免疫电泳片中，通电电泳后染色，再利用特殊的扫描设备计算其数据，此方法可求得异构酶比值，但需要特殊的设备，时间较长，准确性亦差。近来有毛细管电泳技术，可短时间获得结果，但设备昂贵，又需特别操作技术，不适于日常检测用途。另外一常用的测定血液生化标志物的方法为(二)免疫分析法(Immunoassay)，其中又可分为酶免疫分析法(Enzyme Immuno-assay；EIA)、放射免疫分析法(Radio lmmunoassay；RIA)、萤光免疫分析法(Fluorescence Immunoassay；RIA)、冷光免疫分析法(Luminescence Immunoassay；LIA)。这些免疫分析方法的原理如附附图说明图1A至1C所列以酶免疫分析法为例所示，为传统的使用两种抗体的酶连接免疫吸附分析法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay；ELISA)该酶免疫分析方法实施时如图1A，是将受检体加入固定有一第一抗体11的固体载体10，待一血液生化标志物12与第一抗体11结合后。接著如图1B，加入一第二抗体-酶共轭物15，包括能与血液生化标志物12结合的第二抗体端13以及酶端14。然后如图1C所示，待第二抗体-酶共轭物15与血液生化标志物12结合后，加入一生化反应试剂16与第二抗体-酶共轭物15的酶端14反应，通过测定产物17的产率可推算血液生化标志物12的浓度。此方法已经广泛为人使用，但所需的步骤多，花费的时间长，不符合急性心肌梗塞检测需求。放射免疫分析法，萤光免疫分析法及冷光免疫分析法除了同样耗时较长外，还需要特殊的设备，而放射免疫分析法试剂及废物的处置又具有危险性。(三)同功酶抑制法(Isozyme Inhibition)也常用于测定血液生化标志物。在此，以测定肌酸激酶MB为例来说明该方法。肌酸激酶包括三个异构酶，肌酸激酶MB，肌酸激酶MM，以及肌酸激酶BB，其主要原理是将M亚单位(Subunit)的活性用适当的抗体或化学物予以抑制。求得肌酸激酶活性，但该法特异性不足，结果不太准确。(四)比浊法及折射度法(Turbidometry&Nephelometry)。本法使用多克隆抗体(Polyclonal Antibody)吸附于乳胶粒上，以抗原出现所诱发抗体/抗原凝集反应，所造成反应液浊度或折射度的变化，作为标的物抗原定量的依据。本法使用全自动分析仪，简易可行，但易受各种自身免疫疾病(Autoimmune Diseases)血液中产生的免疫球蛋白M(lgM)干扰。并且，营养过多的高脂血症，亦因血中有乳糜物出现而较有假阳性的判断。以急性心肌梗塞相关异构酶等血液生化标志物为例，综观现有的分析方法，仍有下列几点需要加以改进(一)检测费时不符合急救需求，如需要两种抗体的各种免疫分析法。(二)操作步骤繁杂易生误差，如免疫电泳法等。(三)需要特殊仪器设备而不普及化，如毛细管电泳技术、萤光免疫分析法、冷光免疫分析法等。(四)仪器本身无随时待命供急诊需要的设计功能，如全自动生化分析仪比浊度法。急性心肌梗塞病人的救治是分秒必争的，因此开发一快速、准确、方便的血液生化标志物的检测试剂合是为当务之急。本专利技术是针对发生心肌梗塞时，心肌坏死所释放出的血液生化标志物为对象，并且利用血液生化标志物自身为酶的特性，开发出反应步骤减少一半的分析试剂合，利用医院非日常操作的ELISA读数仪做动力学测定，较传统的三明治免疫测定法省时几倍以上。由于肌酸激酶MB以及乳酸脱氢酶I型的实测值并不能绝对反映急性心肌梗塞发生的现象，因此传统上以免疫电泳法测得肌酸激酶MB/总肌酸激酶比值及乳酸脱氢酶I型/总乳酸脱氢酶比值，进一步证实急性心肌梗塞的发生。但是，由于免疫电泳法耗时、费事，不符合急性病症的诊断。本专利技术能同时完成分析多种血液生化标志物的优点。在同一微标盘中测得肌酸激酶MB，乳酸脱氢酶I型，醣原磷酸化酶BB，碳酸酐酶III型，肌酸激酶MB/总肌酸激酶比值，乳酸脱氢酶I型/总乳酸脱氢酶比值，醣原磷酸化酶BB/总醣原磷酸化酶比值，肌红蛋白/碳酸酐酶III型比值，脂肪酸结合蛋白/碳酸酐酶III型，谷氨酸-草酰乙酸转氨酶，以及肌红蛋白等数据。由于本试剂合一次同时用一种生化试剂，所测定异构酶/总酶活性比例有其不变的真实性，增加本方法的可参考性，而且测定不同酶的各种试剂，具有同一测定参数如测定波长动力学读取时间......等，简化了测定过程。另外，急性心肌梗塞血液生化标志物的同时测定，不仅有助于改善急性心绞痛(Angina)、充血性心脏衰竭(Congestive HeartFailure)、骨骼肌创伤(Skeletal Muscle Trauma)及急性心肌梗塞的分类(Triage)，同时，可方便做系列测定(Serial Deter本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种急性心肌梗塞检测试剂合，包括： 多种抗体； 一具有多个微标盘孔的微标盘，其中，每一微标盘孔至多固定该些抗体中的一种；以及 多种试剂用以测定多种血液生化标志物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈美华，姚文法，王蔼君，熊光滨，彭兆昌，
申请(专利权)人：财团法人工业技术研究院，
类型：发明
国别省市：71[中国|台湾]