肺结核快速检验试剂制造技术

本发明专利技术涉及一种肺结核快速检验试剂，其特征在于该试剂包含：（Ⅰ）一种已精确确定最低及最高阳性临界值的显示载体，该显示载体是平均粒径为０．１μｍ～０．９μｍ选自塑胶、碳黑、金属、纤维质有颜色的颗粒，在该颗粒表面上固定一种受体或多种受体复合体，用连续稀释的已知抗体浓度的液体样品经检测精确确定半定量值；（Ⅱ）一种已精确确定相对配体浓度的溶液。用该试剂检测抗结核杆菌抗体以检验肺结核灵敏度高，且快速省时。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种肺结核快速检验试剂，更确切地说，本专利技术涉及一种包含已精确确定最低及最高阳性临界值的显示载体的肺结核快速检验试剂。传统的肺结核检验方法包括细菌培养法和痰抹片检查法，前者将痰样品置于Lowenstein Jensen Slants试管中培养，历时八周才能获得最后结果，检验极为费时；而后者检验灵敏度低。目前最新的肺结核检验方法是血清检验法，例如，R.Maes(Clin Wochenschr.1991；69696-709)使用抗原-60，并利用免疫连结酶法来测定血清中抗原-60的抗体并进行定量；Benjamin RG等(Am.Rev.Respir.Dis.1982；1261013-6)使用抗原-5，并利用免疫连结酶法来测定血清中抗原-5的抗体；英国Omega公司利用38KD抗原制成免疫连结酶试剂盒；Kreatech公司利用KP-90抗原制成免疫连结酶试剂盒。虽然免疫连结酶法灵敏度高，但实验耗时至少三小时以上，而且需用仪器判读，不仅成本高，而且具有局限性。为克服现有技术之不足，本专利技术提供一种肺结核快速检验试剂，该试剂包含一种已精确确定最低及最高阳性临界值的显示载体，用该试剂检验肺结核灵敏度高，且快速省时。本专利技术的一种肺结核快速检验试剂，其特征在于该试剂包含(I)一种已精确确定最低及最高阳性临界值的显示载体，该显示载体是平均粒径为0.1μm～0.9μm选自塑胶、碳黑、金属、纤维质有颜色的颗粒，在该颗粒表面上固定一种受体或多种受体复合体，该颗粒的空白处固定或占满一种阻断蛋白质，采用连续稀释的已知抗体浓度的液体样品经检测精确确定半定量值；(II)一种已精确确定相对配体浓度的溶液。本专利技术中所用的显示载体为平均粒径0.376μm和0.5μm的聚乙烯苯颗粒。本专利技术中所述的受体是一种抗原或半抗原，在显示载体表面上固定一种抗原或多种抗原复合体，例如，抗原-5、抗原-60、38KD抗原等。在显示载体的空白处固定或占满一种阻断蛋白质，例如gelatin、glycerol、Triton X-100、Tween-20或一种血清蛋白质(牛血清蛋白质、兔血清蛋白质等)，优选为牛血清蛋白质。在本专利技术中，精确确定出显示载体的最低及最高阳性临界值，其意义在于检测出一种精确的半定量值。例如，将已知抗体浓度的液体样品(血清样品)连续稀释成1X，1∶1，1∶2，1∶3，1∶4，1∶8，再将显示载体与每一样品单独反应，3～5分钟后出现肉眼可见的测定指标，从而可确定是否为阳性反应，并确定最高阳性稀释段，例如1∶4阳性。由于显示载体已经精确定出最高及最低阳性临界值，因此，可很容易推算出最高阳性稀释段的半定量值。当然，若想获得更精确的半定量值，可在最高阳性稀释段作进一步稀释后，再与显示载体反应，即可获得最精确的半定量值。本专利技术中所述的相对配体是一种抗结核杆菌抗体。此相对配体可与显示载体上的多种肺结核杆菌抗原复合体形成结合反应。而上述的液体样品中的被测物也会与显示载体上的一种抗原或多种抗原复合体形成结合反应。因此当相对配体、液体样品和显示载体依顺序同时反应时，此相对配体将与液体样品中的被测物一起竞争去与显示载体上的一种抗原或多种抗原复合体结合，使之成为肉眼可见的测定指标。本专利技术中，一种已精确确定相对配体浓度的溶液可与液体样品中的被测物一起竞争去与显示载体上的一种抗原或多种抗原复合体结合而形成所谓的竞争法反应，并呈现肉眼可见的直接判读的测定指标。因此，当将欲测样品置于检测元件上，再加入一种已固定有一种抗原或多种抗原复合体，并已确定最高及最低阳性临界值的显示载体，使其混合反应，然后马上加入一种已精确确定相对配体(即抗结核杆菌抗体)浓度的溶液，从而形成所谓的竞争法反应，此时，若欲测样品不存在被测物，如入抗结核杆菌抗体，或被测物低于所确定的最低阳性临界值，则将形成肉眼可见的阴性凝集反应结果；反之，若欲测样品中的被测物高于最低阳性临界值，则形成不凝集的阳性反应结果。由此可见，本专利技术是利用免疫分析法，利用抗原、抗体间的专一性反应，将抗原或抗体固定在有颜色的显示载体上，通过欲测样品抗体、检测试剂抗体与抗原的竞争性反应进行显示以检测抗结核杆菌抗体，在3～5分钟内即可得到精确的检测结果。本专利技术的另一种实施方案，即是利用一种或多种配体直接测定肺结核杆菌菌体。将一种或多种配体各固定于第三显示载体及第四显示载体上。因此，本专利技术的一种肺结核快速检验试剂，其特征还在于该试剂包含(I)一种第三显示载体，在其表面上固定一种或多种配体；(II)一种第四显示载体，在其表面上固定一种或多种配体；该第三显示载体及第四显示载体是平均粒径为0.1μm～0.9μm选自塑胶、碳黑、金属、纤维质有颜色的颗粒，该颗粒空白处固定或占满一种阻断蛋白质，例如gelatin、glycerol、Tri-ton X-100、Tween-20或一种牛血清蛋白质等。上述固定在第三显示载体上的配体为单克隆抗体或多克隆抗体，例如，兔抗结核杆菌抗体。上述固定在第四显示载体上的配体为单克隆抗体，例如一种抗肺结核杆菌单克隆抗体或不同亚型的抗结核杆菌单克隆抗体。当欲测的液体样品经适当处理(例如加入适量Trypsin，使结核杆菌破裂，然后中和)，再置于检测元件上，加入第三和第四显示载体后充分混合，此时若存在有结核杆菌，则第三和第四显示载体将同时与结核杆菌结合形成肉眼可见的阳性凝集反应；反之，若欲测液体样品中不存在结核杆菌菌体，则形成不凝集反应的阴性结果。在本专利技术中，也可单独使用上述(I)的第三显示载体或上述(II)的第四显示载体与欲检测样品反应，这足以达到预期的测定结果。但同时使用第三显示载体与第四显示载体进行检测，将会提高其灵敏度。附附图说明图1为本专利技术的经连续稀释的血清样品与显示载体反应结果示意图；附图2为本专利技术的阳、阴性血清与显示载体和相对配体反应结果示意图。下面的实施例仅为了进一步说明本专利技术，而不是对其加以限制。实施例(一)A.显示载体的制备(A-1)显示载体的前处理将已经用磷覆盖的0.376μm和0.5μm的聚乙烯苯颗粒(Magsphere、Polymer Labs)，分别置于不同漏斗内，每个漏斗连接一真空马达，漏斗底部内有一个膜孔径为0.2μm的过滤膜用来过滤微粒，加入500mL2N盐酸溶液于漏斗内，搅拌2小时以洗掉磷覆盖物，接着用真空马达抽掉2N的盐酸溶液，再加入500mL去离子水于漏斗内搅拌20分钟，再用真空马达抽掉漏斗内的去离子水，重复此步骤直到加入的去离子水的PH值与被真空马达抽掉的去离子水的PH值达到平衡为止。(A-2)洗涤缓冲液的配制取分析纯NaH2PO4·H2O 1.56克分析纯Na3PO49.00克加入800mL去离子水，使其完全溶解，用1M氢氧化钠调节PH值为7.8，加入去离子水直至1000mL。(A-3)抗体或抗原缓冲液的配制(a)取分析纯Na2HPO4·12H2O27.6g，置于1000mL的去离子水中，使其完全溶解；(b)取分析纯NaH2PO4·2H2O28.4g，置于1000mL的去离子水中，使其完全溶解；其中，取(a)液30mL与(b)液70mL互相混合，并调节PH值为5.5，可利用0.5N的盐酸或0.5N的氢氧化钠来调节PH值，最后补加去离子水使其为1000m本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肺结核快速检验试剂，其特征在于该试剂包含：（Ⅰ）一种已精确确定最低及最高阳性临界值的显示载体，该显示载体是平均粒径为０．１μｍ～０．９μｍ选自塑胶、碳黑、金属、纤维质有颜色的颗粒，在该颗粒表面上固定一种受体或多种受体复合体，该颗粒的 空白处固定或占满一种阻断蛋白质，采用连续稀释的已知抗体浓度的液体样品经检测精确确定半定量值；（Ⅱ）一种已精确确定相对配体浓度的溶液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘永详，陈咏仪，
申请(专利权)人：刘永详，陈咏仪，
类型：发明
国别省市：71[中国|台湾]