一种粪便样品总DNA提取方法技术

本发明专利技术公开了一种粪便样品总DNA提取方法，涉及DNA提取技术领域。该方法包括步骤：S1，对粪便样品预处理，收集样品中的菌体；S2，对菌体进行物理破碎；S3，将破碎后的样品反复冻融2‑5次之后，进行酶解处理；S4，将酶解后的样品离心，取上清液，向其中加入0.6‑1.5倍上清液体积的异丙醇进行沉淀处理；S5，将沉淀后的样品离心，收集沉淀，对沉淀溶解之后进行DNA过柱纯化，即得到粪便样品总DNA。本发明专利技术提供的粪便样品总DNA提取方法，有良好的通用性，可对不同类型的粪便样品有效进行DNA提取，且可有效去除粪便中各种影响下游实验的抑制因子，并能高效地回收粪便中的基因组DNA。

【技术实现步骤摘要】
一种粪便样品总DNA提取方法
本专利技术涉及DNA提取
，尤其涉及一种粪便样品总DNA提取方法。
技术介绍
肠道是哺乳动物体内最大的消化器官，其中含有数量巨大的细菌菌群，形成了极其复杂的细菌微生态系统。肠道微生态系统包括多种多样的细菌微生物，其中包含大量人体有益菌群，亦有对人体有害的菌。已有研究表明，动物肠道每天将产生2×10^11个脱落细胞，每克人的新鲜粪便中含有10^5个肠上皮细胞。对粪便中肠道微生物DNA、食品残留样品DNA，以及消化道肠道脱落细胞DNA的检测可得到大量肠道微生物信息，间接地反映肠道微生物的变化情况。粪便的成分复杂，其中含有的多聚糖、植物多糖、胆酸、胆盐、胆色素、消化液、粘液等物质对Taq酶的活性有抑制作用，导致下游检测失活；另外，含有的一些有机物如脂类、多酚等在DNA提取过程中很难去除，这些杂质不但易导致目标DNA的降解，还直接影响到后续研究的准确性。因此改进样品保存方法及选择合适的提取方法以得到优质的DNA是粪便DNA成功进行下游检测的关键。至今为止，国内外研究者发展了多种粪便DNA提取方法，如预处理-酚本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1，对粪便样品预处理，收集样品中的菌体；/nS2，对菌体进行物理破碎；/nS3，将破碎后的样品反复冻融2-5次之后，进行酶解处理；/nS4，将酶解后的样品离心，取上清液，向其中加入0.6-1.5倍上清液体积的异丙醇进行沉淀处理；/nS5，将沉淀后的样品离心，收集沉淀，对沉淀溶解之后进行DNA过柱纯化，即得到粪便样品总DNA。/n

【技术特征摘要】
1.一种粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，对粪便样品预处理，收集样品中的菌体；
S2，对菌体进行物理破碎；
S3，将破碎后的样品反复冻融2-5次之后，进行酶解处理；
S4，将酶解后的样品离心，取上清液，向其中加入0.6-1.5倍上清液体积的异丙醇进行沉淀处理；
S5，将沉淀后的样品离心，收集沉淀，对沉淀溶解之后进行DNA过柱纯化，即得到粪便样品总DNA。


2.如权利要求1所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，所述步骤S1的具体操作为，
取180～200mg的粪便样品于离心管中，加入1000ulbufferPM，混匀成悬浮液，离心分离，去上清，收集到样品中的菌体。


3.如权利要求1所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，所述步骤S2的具体操作为，
向菌体中加入玻璃珠、900ulLysisbufferI，混匀后用组织破碎仪破碎处理。


4.如权利要求1所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，所述步骤S3中，冻融的具体操作为：
将装有样品的离心管置于浮漂中，将浮漂用液氮冻5min后于室温下放3-4s，再放入65℃水浴5min，重复2-5次。


5.如权利要求1所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，所述步骤S3中，进行酶解处理的具体操作为，
向冻融结束后的样品中加入20ulLysisEnzymeI，37℃温育20min；
再加入225ul20％SDS及10ulLysisEnzymeII，56℃温育30min，再65℃温育30min。

【专利技术属性】
技术研发人员：覃俊杰，
申请(专利权)人：深圳谱元科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44