【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新的RNA-可编程的内切核酸酶系统及其在基因组编辑和其他应用中的用途与相关申请的相互参照本申请要求于2017年12月14日提交的欧洲专利申请No.17207294.4的优先权,其内容整体引入本文作为参考,包括任何附图。领域本公开内容总的来说涉及分子生物学领域,包括组合物和方法,其涉及包括RNA-可编程的内切核酸酶、相关的指导RNAs和/或靶序列的新的系统,以及在各种应用中生产和使用其的方法,包括调节转录的方法,以及在细胞中靶向、编辑和/或操纵DNA的方法。背景内切核酸酶如锌指内切核酸酶(ZFNs)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)和核糖核酸酶已被作为位点特异性核酸酶用于基因组靶向、基因组编辑、基因沉默、转录调节、促进重组和其他分子生物学技术。CRISPR-Cas系统提供了新的核酸酶和内切核酸酶的来源,包括CRISPR-Cas9。已在过去几年中广泛利用使用CRISPR(成簇的规律间隔的短回文重复序列(ClusteredRegularlylnterspacedShortPalindromicRepeats))-Cas((CRISPR相关蛋白)的RNA-指导的DNA靶向原理编辑基因组,如WO2013/176722中所述的。以前已经描述了三种类型的CRISPR-Cas系统(类型I、类型II和IIb以及类型III),且最近鉴定了第四种(类型V)。CRISPR-Cas用于基因组编辑的大多数用途以前借助类型II系统。由细菌类型IICRISPR-Cas系统提供的主要优点在于对可编程的DNA干扰的最小限 ...
【技术保护点】
1.组合物,其包含/n(a)根据SEQ ID NO:2的SluCas9多肽或其以下变体:/n(I)在其全长或从SEQ ID NO:2的位置789到位置1053上与根据SEQ ID NO:2的序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少99%或100%氨基酸同一性的变体;/n(II)根据(I)的变体,其含有额外的组分,如例如,核定位信号,以获取包含SluCas9多肽的SluCas9 CRISPR系统在无细胞反应或在原核细胞中以及在真核细胞环境中例如在活的植物或动物中的活性,例如根据SEQ ID NO:3的多核苷酸序列;/n(III)编码SluCas9以及根据(I)和(II)的变体的相应多核苷酸序列的密码子优化的变体,例如SEQ ID NO:3从位置61至位置3225的多核苷酸序列和根据SEQ ID NO:44和45的多核苷酸序列;或/n(IV)根据(I)至(III)中任一项的变体,其进一步包含/ni.导致具有与不具有一种或多种修饰或突变的相应SluCas9(例如,包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的SluCas9)相比显著降低的核酸酶活性或不可检测的核酸酶 ...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171214 EP 17207294.41.组合物,其包含
(a)根据SEQIDNO:2的SluCas9多肽或其以下变体:
(I)在其全长或从SEQIDNO:2的位置789到位置1053上与根据SEQIDNO:2的序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少99%或100%氨基酸同一性的变体;
(II)根据(I)的变体,其含有额外的组分,如例如,核定位信号,以获取包含SluCas9多肽的SluCas9CRISPR系统在无细胞反应或在原核细胞中以及在真核细胞环境中例如在活的植物或动物中的活性,例如根据SEQIDNO:3的多核苷酸序列;
(III)编码SluCas9以及根据(I)和(II)的变体的相应多核苷酸序列的密码子优化的变体,例如SEQIDNO:3从位置61至位置3225的多核苷酸序列和根据SEQIDNO:44和45的多核苷酸序列;或
(IV)根据(I)至(III)中任一项的变体,其进一步包含
i.导致具有与不具有一种或多种修饰或突变的相应SluCas9(例如,包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的SluCas9)相比显著降低的核酸酶活性或不可检测的核酸酶活性的SluCas9的一种或多种修饰或突变,例如一种或多种氨基酸取代(例如,丙氨酸取代),其中相对于SEQIDNO:2,取代是在位置10(例如,D10A)、位置559(例如,H559A)和/或位置582(例如N582A);和/或
ii.具有核碱基编辑活性或脱氨酶活性的C-或N-末端附着的多肽,例如,经由接头肽序列附着的;和
(b)一种或多种单一异源指导RNA(sgRNA)或编码所述一种或多种sgRNA的核酸(例如,DNA),每种sgRNA包含:
(I)包含RNA并且能够与多核苷酸基因座中的靶序列杂交的DNA-靶向区段,
(II)包含RNA的tracr配对物序列,和
(III)包含RNA的tracrRNA序列,其中所述tracr配对物序列能够与所述tracr序列杂交,且其中(I)、(II)和(III)以5'至3'的取向排列。
2.权利要求1的组合物,其中(a)的SluCas9多肽包含与SEQIDNO:2的从位置789到位置1053连端点在内的氨基酸序列具有至少75%氨基酸同一性的氨基酸的邻接序列(例如,265个氨基酸的邻接序列)。
3.权利要求1的组合物,其中(a)的SluCas9多肽包含与SEQIDNO:2的从位置789到位置1053连端点在内的氨基酸序列具有至少90%氨基酸同一性的氨基酸的邻接序列(例如,265个氨基酸的邻接序列)。
4.权利要求1-3任一项的组合物,其中所述DNA-靶向区段的长度为18个核苷酸至22个核苷酸,并且其中在多核苷酸基因座中且与靶序列互补的原间隔区序列在其3'末端正好与对于(a)的SluCas9多肽合适的PAM序列相邻,或这种PAM序列是DNA-靶向区段的3'部分的一部分。
5.权利要求1-4任一项的组合物,其中在多核苷酸基因座中且与靶序列互补的原间隔区序列在其3'末端正好与PAM序列“NNGG”相邻,或这种PAM...
【专利技术属性】
技术研发人员:A·科宁,M·施米德特,W·科科,A·古普塔,J·特贝,C·舒伦伯格,C·皮茨勒,M·B·贾马林达,S·贾赫,F·里希特,A·阿鲁穆罕,C·萨尔维希特,
申请(专利权)人:克里斯珀医疗股份公司,拜尔健康护理有限责任公司,
类型:发明
国别省市:瑞士;CH
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。