靶向抗CD19嵌合抗原受体的抗独特型抗体制造技术

提供了一种能够与抗CD19抗体FMC63的单链可变片段(scFv)结合的高亲和力抗体，该单链可变片段是例如作为嵌合抗原受体(CAR)的一部分在细胞表面表达的scFv。本文还提供了用于产生这样的抗scFv抗体的方法和使用本文披露的抗体检测例如表达抗CD19CAR的T细胞的方法，该抗CD19CAR包含该scFv作为细胞外结构域。CD19CAR包含该scFv作为细胞外结构域。CD19CAR包含该scFv作为细胞外结构域。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向抗CD19嵌合抗原受体的抗独特型抗体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年2月11日提交的美国临时申请号62/972,750的提交日期的权益，其全部内容通过援引并入本文。

技术介绍

[0003]嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法已经在癌症治疗中显示出有前景的治疗效果。典型地，CAR
‑
T细胞通过患者免疫细胞(自体)或来自人类供体的免疫细胞(同种异体)的基因工程而产生。高质量、临床级CAR
‑
T细胞的制备是该技术广泛应用的先决条件。因此，非常感兴趣的是开发用于检测表达CAR的T细胞。

技术实现思路

[0004]本披露内容至少部分基于对小鼠抗人CD19抗体FMC63(SEQ ID NO:1)的单链可变片段(scFv)，特别是对在细胞表面表达的scFv具有高结合亲和力和特异性的抗体29E4B5的开发。例如，本文披露的抗体29E4B5(又名29E4B5
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1)对表达抗CD19嵌合受体(抗CD19 CAR)的T细胞展示出高结合亲和力和特异性，该抗CD19嵌合受体具有SEQ ID NO:1的scFv作为细胞外结构域。与能够结合相同抗CD19 CAR T细胞的参考抗体(rec_mab3)相比，抗体29E4B5对抗CD19 CAR T细胞也展示出优异的结合亲和力。
[0005]因此，在一些方面，本披露内容提供了一种分离的抗体，该分离的抗体结合由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的单链可变片段(scFv)(抗scFv抗体)。在一些情况下，抗scFv抗体与抗体29E4B5结合scFv的相同表位或与抗体29E4B5竞争结合scFv。在一些实施例中，分离的抗体与在细胞表面表达的scFv(例如，作为嵌合抗原受体的细胞外结构域)结合。
[0006]在一些实施例中，分离的抗体包含与示例性抗体29E4B5相同的重链互补决定区和相同的轻链互补决定区。例如，分离的抗体可以包含与抗体29E4B5相同的V
H
和相同的V
L
。
[0007]本文披露的任何抗scFv抗体可以是全长抗体。可替代地，抗scFv抗体可以是抗原结合片段。
[0008]另外，本披露内容的特征在于核酸或核酸组(两个单独的核酸分子)，该核酸或核酸组共同编码本文所述的任何抗scFv抗体。在一些实施例中，核酸或核酸组是载体或载体组，例如一种或多种表达载体。
[0009]本文还提供了包含编码本文披露的任何抗scFv抗体的核酸或核酸组的宿主细胞。在一些实施例中，宿主细胞是哺乳动物细胞。
[0010]在其他方面，本披露内容的特征在于一种用于检测或定量由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的单链可变片段(scFv)的方法。这样的方法可包括：(i)使如本文披露的抗scFv抗体(例如，具有与示例性抗体29E4B5相同的重链和轻链CDR或相同的V
H
和V
L
链的抗体)与怀疑含有SEQ ID NO:1的scFv的样品接触，以及(ii)检测该抗体与该scFv的结合。在一些实施例中，scFv是在细胞表面表达的抗CD19嵌合抗原受体(CAR)的细胞外结构域。在一些实施例中，抗scFv抗体可以缀合至可检测标记。
[0011]在一些实施例中，样品可包含多个T细胞，这些T细胞被基因工程化以表达包含SEQ ID NO:1的scFv作为细胞外结构域的抗CD19 CAR。在一些实施例中，多个T细胞可以进一步包含被破坏的TRAC基因、被破坏的β2M基因或者两者。在一些实例中，多个T细胞由获得自一个或多个供体的T细胞制备。
[0012]在一些情况下，样品衍生自用于生产多个T细胞的制造工艺，这些T细胞被基因工程化以表达抗CD19 CAR。
[0013]在一些实例中，样品是从施用多个T细胞的受试者获得的生物样品，这些T细胞被基因工程化以表达抗CD19 CAR。在一些实施例中，样品是血液样品。受试者可以是人类癌症患者，例如患有复发性或难治性B细胞恶性肿瘤的人类癌症患者。示例性B细胞恶性肿瘤包括但不限于非霍奇金淋巴瘤或B细胞淋巴瘤。
[0014]此外，本披露内容提供了产生本文披露的任何抗scFv抗体的方法。该方法可以包括：(i)在允许与scFv结合的抗体表达的条件下培养本文所述的包含编码抗scFv抗体的一种或多种核酸的任何宿主细胞；以及(ii)收获由此从细胞培养物中产生的抗体。在一些实施例中，该方法可以进一步包括(iii)在步骤(ii)之后纯化抗体。
[0015]本专利技术的一个或多个实施例的细节在以下说明书中阐述。根据以下附图和对若干实施例的详细描述，并且还根据所附权利要求，本专利技术的其他特征或优点将变得清楚。
附图说明
[0016]以下附图构成本说明书的一部分，并且被包括在内以进一步证明本披露内容的某些方面，该某些方面通过参考附图并结合本文给出的具体实施例的详细描述可以更好地被理解。
[0017]图1A
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1B是显示通过SDS
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PAGE(图1A)和蛋白质印迹分析(图1B)分析的重组FMC63
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ScFv蛋白的照片。泳道M1：蛋白标志物(宝生物工程美国公司(Takara Bio USA)，加利福尼亚州山景城市，目录号3452)。泳道M2：蛋白标志物(金斯瑞生物科技公司(GenScript Biotech)，皮斯卡塔韦市，新泽西州，目录号M00521)。泳道1：还原条件。泳道2：非还原条件。泳道P：人IgG1，κ(西格玛奥德里奇公司(Sigma
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Aldrich)，圣路易斯，密苏里州，目录号I5154)作为阳性对照。一抗：小鼠抗His mAb(金斯瑞生物科技公司，皮斯卡塔韦市，新泽西州，目录号A00186)。
[0018]图2是显示抗体克隆29E4B5与抗CD19 CAR T细胞(表达含有抗FMC63
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scFv的CAR的CAR T细胞)而不是抗BCMA CAR T细胞或抗CD70 CAR T细胞特异性结合的图。
具体实施方式
[0019]本文提供了能够与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的单链可变片段(scFv)结合的抗体(衍生自小鼠抗人CD19抗体FMC63)，例如能够与作为抗CD19嵌合抗原受体(CAR)的细胞外结构域的、在细胞表面表达的scFv结合的抗体。因此，本文披露的抗体可用于检测样品(例如，从用于生产抗CD19 CAR
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T细胞的制造工艺中获得的样品或从施用抗CD19 CAR
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T细胞的患者获得的样品)中是否存在表达这样的抗CD19 CAR的细胞(例如，T细胞)。
[0020]I.与抗CD19单链可变片段(scFv)结合的抗体
[0021]本披露内容提供了与具有SEQ ID NO:1(下文提供)的氨基酸序列的单链可变片段
(scFv)结合的抗体(例如，抗体29E4B5)，这些抗体包含衍生自小鼠抗人CD19抗体FM本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的抗体，该分离的抗体结合由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的单链可变片段(scFv)，其中该抗体与抗体29E4B5结合该scFv的相同表位或与抗体29E4B5竞争结合该scFv。2.如权利要求1所述的分离的抗体，其中该抗体与在细胞表面表达的该scFv结合。3.如权利要求1或2所述的分离的抗体，该分离的抗体包含与抗体29E4B5相同的重链互补决定区和相同的轻链互补决定区。4.如权利要求3所述的分离的抗体，该分离的抗体包含与抗体29E4B5相同的V
H
和相同的V
L
。5.如权利要求1
‑
4中任一项所述的分离的抗体，其中该抗体是全长抗体或其抗原结合片段。6.一种核酸或核酸组，该核酸或核酸组共同编码如权利要求1
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5中任一项所述的抗体。7.如权利要求6所述的核酸或核酸组，该核酸或核酸组为载体或载体组。8.如权利要求7所述的核酸或核酸组，其中该一种或多种载体是一种或多种表达载体。9.一种宿主细胞，该宿主细胞包含如权利要求6
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8中任一项所述的核酸或核酸组。10.如权利要求9所述的宿主细胞，其中该宿主细胞是哺乳动物细胞。11.一种用于检测或定量样品中由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的单链可变片段(scFv)的方法，该方法包括：(i)使如权利要求1
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5中任一项所述的抗体与怀疑含有该scFv的样品接触，以及(ii)检测该抗体与该scFv的结合。12.如权利要求11所述的方法，其中该抗体与可检测标记缀合。13.如权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：L库马尔，
申请(专利权)人：克里斯珀医疗股份公司，
类型：发明
国别省市：