一种神经干细胞的取材培养方法技术

本发明专利技术公开了一种神经干细胞的取材培养方法，包括以下步骤：a.选取合格的人工流产胚胎组织；b.无菌条件下分离胚胎组织：分离胚胎组织，再找到并分离外胚层形成的神经板或者神经管；c.获得符合接种浓度的单细胞悬液：无菌条件下取出室管膜层组织并缓冲液清洗后，再用机械分离或酶消化分离法分离神经管上皮细胞，以1×10

【技术实现步骤摘要】
一种神经干细胞的取材培养方法
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种神经干细胞的取材培养方法。
技术介绍
干细胞研究是当前生命科学研究的热点，神经干细胞则是目前研究最多、应用最多的干细胞种类之一。自从神经组织不可以再生的论断被打破后，神经干细胞进入了广大科研工作者的视野，许多的临床医生也做了很多尝试。一些相关的理论也渐渐被大家熟知：90年代中期的许多研究表明人类新生的神经元、胶质细胞来自于神经干细胞，它们大多集中在嗅球、侧脑室的脑室区脑室下区、海马、脊髓，他们在体内可以分化为神经元和角质细胞，体外培养则可以生成神经球。而这些神经球的许多性状已经被证实可以加以利用，在许多疾病的细胞移植中起作用，这也使得许多的神经科医生围绕着他开展了丰富多样的临床实验。伴随着神经干细胞基础理论的进展，临床实验已经如火如荼的开展，许多医院已经在诸如脑出血后遗症、脑梗塞后遗症、视神经损伤、持续植物状态、癫痫、脑瘫、脊髓损伤、脑胶质瘤等方面取得了很大的进展。这些缺乏特效治疗手段而又严重危害人类健康的疾病，许多年来一直的困扰也许在不久的将来借助神经干细胞的力量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种神经干细胞的取材培养方法，其特征在于：包括以下步骤：/na. 选取合格的人工流产胚胎组织/n选择年龄20-35岁的妇女，妊娠 2周以上、8周以内，经常规手术前检查无禁忌症；经负压吸引出的胚胎组织离体不超过4小时，柔软、粉红的绒毛组织和类纽扣形的胚胎组织完好；/nb. 无菌条件下分离胚胎组织/n在无菌条件下剥除血管、筋膜组织，冲洗去血液，分离胚胎组织，再找到并分离外胚层形成的神经板或者神经管；/nc. 获得符合接种浓度的单细胞悬液/n无菌条件下取出室管膜层组织并缓冲液清洗后，再用机械分离或酶消化分离法分离神经管上皮细胞，以1×10

【技术特征摘要】
1.一种神经干细胞的取材培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
a.选取合格的人工流产胚胎组织
选择年龄20-35岁的妇女，妊娠2周以上、8周以内，经常规手术前检查无禁忌症；经负压吸引出的胚胎组织离体不超过4小时，柔软、粉红的绒毛组织和类纽扣形的胚胎组织完好；
b.无菌条件下分离胚胎组织
在无菌条件下剥除血管、筋膜组织，冲洗去血液，分离胚胎组织，再找到并分离外胚层形成的神经板或者神经管；
c.获得符合接种浓度的单细胞悬液
无菌条件下取出室管膜层组织并缓冲液清洗后，再用机械分离或酶消化分离法分离神经管上皮细胞，以1×105个/毫升的密度接种于DMEM/F12无血清培养基中，同时添加N2、NGF、b-FGF或EGF促有丝分裂诱导因子，在湿度100%、温度37℃、5%CO2条件下培养细胞；
d.传代培养
每隔3天换液传代一次，传代时使用机械分离法和酶消化分离法中的一种或两种方式分散细胞；
e.每天倒置显微镜观察细胞生长情况，根据生长情况判断是否有神经干细胞产生，待生长总数量级达106-107时，稳定传代3代以上时，鉴定神经干细胞。


2.根据权利要求1所述的一种神经干细胞的取材培养方法，其特征在于：步骤c中，细胞悬液用消毒的筛网过滤杂质。


3.根据权利要求2所述的一种神经干细胞的取材培养方法，其特征在于：筛网的孔径为200目。
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【专利技术属性】
技术研发人员：姜源，梅强，王双全，黄辰，金成，
申请(专利权)人：西安同袍企业管理集团有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61