FG-4592或其盐在神经干细胞扩增方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了FG‑4592或其盐在神经干细胞扩增方面的应用。在分离的神经干细胞培养基中添加FG‑4592或其盐，可促进神经干细胞的增殖，同时诱导HIF‑1α高表达与自噬的发生。本发明专利技术在常氧条件下，在体外用FG‑4592处理神经干细胞24小时能显著促进神经干细胞的增殖，同时诱导HIF‑1α高表达与自噬的发生，完全模拟出了低氧对神经干细胞的促增殖作用、诱导HIF‑1α高表达与增强自噬作用。

【技术实现步骤摘要】
FG-4592或其盐在神经干细胞扩增方面的应用
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及FG-4592或其盐在神经干细胞扩增方面的应用。
技术介绍
神经干细胞数量减少是神经退行性疾病或神经损伤难以自我修复的主要原因。成体中神经干细胞数量有限，并且难以从静息状态被激活扩增进而行使功能。神经干细胞体外扩增后移植治疗为患者提供了一种可行的候选方案，另外在体内如果能够有效促进神经干细胞增殖对于治疗该类疾病将带来光明前景。神经干细胞自我更新、增殖和多向分化潜能的维持需要一定的微环境，在干细胞研究领域称之为干细胞微环境“stemcellniche”，这种微环境包括支持干细胞的细胞组分和非细胞组分。不同干细胞有着不同的微环境，然而低氧却是诸多干细胞微环境的共有组分。研究发现，在中枢神经系统中，神经干细胞所处环境中的氧浓度约为1-8％，亦即，神经干细胞生存于相对低氧的微环境中。据报道，2.5-5％O2的低氧环境能显著促进神经干细胞的体外增殖活性。但问题是，低氧作为一种环境因素其影响广泛，难以对患者进行实施，因此亟需一种能模拟低氧效果的药物来靶向诱导神经干细胞的体内外增殖。FG-4592又名Roxadustat，分子式为C19H16N2Os，化学名为N-[(4-羟基-1-甲基-7-苯氧基-3-异喹啉基)羰基]甘氨酸，CAS号808118-40-3，其结构式为如下所示：FG-4592由美国FibroGen公司原研，目前与阿斯利康公司合作开发的口服缺氧诱导因子(HIF)脯氨酰羟化酶(PHDs)抑制剂，本品可用于治疗慢性肾损伤等引起的贫血，目前在美国FDA处于3期临床研究阶段。专利技术专利CN106187888公开了FG-4592单晶及其制备方法，该专利说明书中阐述了FG-4592是一种口服缺氧诱导因子(HIF)脯氨酰羟化酶抑制剂，在临床上用于治疗贫血，FG-4592是潜在贫血治疗药物临床开发中走的最远的候选药物。该专利文件也仅公开了FG-4592可用于治疗贫血的用途。但是，到目前为止，FG-4592是否能够通过激活HIF信号通路、具有神经干细胞扩增的作用尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术旨在解决上述问题，提供FG-4592或其盐在神经干细胞扩增方面的应用。FG-4592或其盐在神经干细胞扩增方面的应用。具体的，在分离的神经干细胞培养基中添加FG-4592或其盐，可促进神经干细胞的增殖，同时诱导HIF-1α高表达与自噬的发生。FG-4592或其盐作为活性成分在用于制备神经干细胞体内外扩增药物中的应用。一种使神经干细胞体内外扩增的药用组合物，包括FG-4592或其药学上可接受的盐。优选的，还包括一种或多种药学上可接受的辅料或载体。一种使神经干细胞体内外扩增的保健品，包括FG-4592或其药学上可接受的盐。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术在常氧条件下，在体外用FG-4592处理神经干细胞24小时能显著促进神经干细胞的增殖，同时诱导HIF-1α高表达与自噬的发生，完全模拟出了低氧对神经干细胞的促增殖作用、诱导HIF-1α高表达与增强自噬作用，其中，后两者(HIF-1α与自噬)是促进神经干细胞增殖的作用途径。附图说明图1为采用Westernblot方法检测体外培养的神经干细胞经FG-4592(A)或低氧(B)处理后对增殖、HIF-1α表达及自噬活性的影响。图2为采用Westernblot方法检测敲低HIF-1α表达后神经干细胞自噬及增殖情况。图3为在常氧和低氧下用自噬抑制剂3-MA处理不同时间(12h,24h,48h,72h)后用光学显微镜拍摄的神经干细胞生长情况。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作详细描述，但本专利技术的实施不仅限于此。实施例1FG-4592对神经干细胞体外扩增的作用1.FG-4592药品(1)FG-4592药品的处理：FG-4592购自Selleck公司，CAS号：808118-40-3，分子量为352.34。取100mgFG-4592粉末，加入4ml二甲基亚砜(DMSO)，震荡使其充分溶解后，补充DMSO至终体积为5.676ml，混匀，此储液终浓度为50mM。分装后保存于-20℃。(2)神经干细胞的处理：实验采用分离培养的大鼠胚胎期神经干细胞。取第三代神经干细胞调整密度为1×106/ml，接种6后h将配制的FG-4592添加到培养液中，使终浓度为10μM，轻轻混匀，置于37℃，5％CO2细胞培养箱中继续培养24h。(3)对照组：对照组分为阴性对照组和阳性对照组，阴性对照组神经干细胞不给与FG-4592的药物处理，而是给予相同体积的DMSO并转染空质粒(Vec)；阳性对照组分为药物阳性对照组和转染阳性对照组，药物阳性对照组使用100μMCoCl2(铁离子拮抗剂，可抑制PHDs活性从而模拟低氧效果，但毒副作用大)处理神经干细胞24h；转染阳性对照组采用HIF-1α表达质粒转染神经干细胞24h。2.神经干细胞的培养取孕14.5天大鼠用2％的戊巴比妥钠麻醉，完全麻醉后置于75％酒精中消毒，用无菌外科剪刀依次剪开孕鼠皮肤、皮下组织、肌肉，打开盆腔，暴露子宫，打开子宫后小心取出胎鼠，置100mm培养皿中洗涤残留血液，在解剖显微镜下剥掉脑组织表面的血管膜，分离胎鼠前脑和中脑，置于35mm培养皿中，待所有胎鼠分离完毕，加入1ml0.25％胰蛋白酶消化分离出来的脑组织，终止消化后用40μm滤网过筛，收集滤液于15ml离心管中，1200rpm离心5min。然后弃掉上清，用神经干细胞完全培养液(含2％B27，1％N2，20μg/mlbFGF，20μg/mlEGF，1％Glutamine，1％青霉素-链霉素)重悬细胞沉淀，用细胞计数器计数细胞密度，按1×106/ml密度接种于25cm2细胞培养瓶中，置37℃培养箱内培养。3.WesternBlot实验实验中，按照常规方法收集并裂解神经干细胞，提取蛋白后进行蛋白免疫印迹分析，检测增殖细胞核抗原PCNA(proliferatingcellnuclearantigen)、低氧诱导因子-1α(hypoxiainduciblefactor-1α)及自噬标记分子LC3(microtubule-associatedprotein1lightchain3)的表达变化。4.实验结果如图1A所示，当神经干细胞经过FG-4592，CoCl2处理，或者转染HIF-1α后采用WesternBlot进行检测。结果显示：与阴性对照组相比，FG-4592明显增加了PCNA表达，同时诱导了HIF-1α表达与自噬活性(LC3II表达)，FG-4592诱导HIF-1α表达的能力甚至超过了经典的阳性对照药CoCl2，与此同时，我们看到转染HIF-1α使其高表达后自噬和增殖活性(PCNA表达)都得到了增强，而FG-4592提高自噬和增殖活性的作用更强，这或许与FG-4592促进了更高水平的HI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.FG-4592或其盐在神经干细胞扩增方面的应用。/n

【技术特征摘要】
1.FG-4592或其盐在神经干细胞扩增方面的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在分离的神经干细胞培养基中添加FG-4592或其盐，可促进神经干细胞的增殖，同时诱导HIF-1α高表达与自噬的发生。


3.FG-4592或其盐作为活性成分在用于制备神经干细胞体内外扩增药物中的应用。

【专利技术属性】
技术研发人员：吴丽颖，朱玲玲，巩生辉，何云凌，赵名，成祥，韩莹，赵彤，范明，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11