一种髓核祖细胞培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种髓核祖细胞培养基及其制备方法和应用，由DMEM培养基、F12培养基、脯氨酸、丙酮酸钠、维生素C、胰岛素生长因子、FGF2、转铁蛋白、ROCK抑制剂、p38抑制剂和转化生长因子β信号通路抑制剂组成。通过混合各组分，再调节混合物pH和渗透压后灭菌处理制得。本发明专利技术培养基未使用动物源成分，可保持NPPCs的未分化、多能状态，培养基中动物血清的去除极大避免动物成分对髓核祖细胞培养的干扰及污染，能在细胞治疗的过程中完全避免诱发免疫反应发生，简化培养过程，增加实验结果的可信度，基本解决了持久培养NPPCs这一关键难题。制备方法简单、原料易得，适合髓核祖细胞在无饲养层细胞条件下的培养与扩增。

A culture medium for myelonuclear progenitor cells and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种髓核祖细胞培养基及其制备方法和应用
本专利技术涉及培养基领域，具体地，涉及髓核祖细胞培养基及其制备方法和应用。
技术介绍
在胚胎发育中，髓核细胞起源于胚胎期的脊索。脊索被椎体包围的部分将完全退化消失，但在椎体间的部分却保留下来形成髓核，因此胚胎来源的髓核祖细胞(Nucleuspulposusprogenitorcells,NPPCs)的纯度会明显高于成体来源的NPPCs。但是由于NPPCs可以稳定存在的时间非常短暂，很快就会继续向成体细胞分化下去，无法获得稳定传代的祖细胞系。因此在获取祖细胞的同时需要提供与胚胎期祖细胞所处的相同或相似的微环境，使其能够长期稳定地自我更新。Belmonte等人创新性地专利技术了能够使肾祖细胞稳定传代的3D培养体系，从小鼠和人胚胎中分别获得了长期稳定传代的鼠和人肾祖细胞系，并利用其开展了多向分化，体内移植，药物毒性筛选和疾病模型构建等广泛的应用。该研究为胚胎来源NPPCs的提取和培养提供了一种可靠有效的研究思路，申请人通过与Belmonte课题组合作，已开展了关于培养NPPCs的基础性工作。NPPCs作本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种髓核祖细胞培养基，其特征在于，由DMEM培养基、F12培养基、脯氨酸、丙酮酸钠、维生素C、胰岛素生长因子、碱性成纤维细胞生长因子2、转铁蛋白、ROCK抑制剂、p38抑制剂和转化生长因子β信号通路抑制剂组成，其中，所述DMEM培养基与F12培养基的含量体积比为1：0.5-2。/n

【技术特征摘要】
1.一种髓核祖细胞培养基，其特征在于，由DMEM培养基、F12培养基、脯氨酸、丙酮酸钠、维生素C、胰岛素生长因子、碱性成纤维细胞生长因子2、转铁蛋白、ROCK抑制剂、p38抑制剂和转化生长因子β信号通路抑制剂组成，其中，所述DMEM培养基与F12培养基的含量体积比为1：0.5-2。


2.根据权利要求1所述的一种髓核祖细胞培养基，其特征在于，以所述培养基的总体积为基准，所述维生素C的浓度为50-200μg/mL，所述胰岛素生长因子的浓度为1-150ng/mL，所述碱性成纤维细胞生长因子2的浓度为1-150ng/mL，所述转化生长因子β信号通路抑制剂的浓度为1-30uM，所述转铁蛋白的浓度为5-100μg/mL，所述ROCK抑制剂的浓度为1-50uM，所述p38抑制剂的浓度为1-20uM，所述脯氨酸的浓度为0-10mM，所述丙酮酸钠的浓度为1-15mM。


3.根据权利要求1或2所述的一种髓核祖细胞培养基的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
(1)将DMEM培养基、F12培养基、脯氨酸、丙酮酸钠、维生素C、胰岛素生长因子、碱性成纤维细胞生长因子2、转铁蛋白、ROC...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁成振，夏楷顺，章裕昂，李方财，陈其昕，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33