重组人Notch1蛋白在制备神经干细胞及皮层神经元中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种神经干细胞的制备方法及应用，本发明专利技术通过加入Notch信号通路受体Notch1的方法解决神经干细胞高效扩增的问题，可以获得功能稳定且活性高的神经干细胞，可进一步分化为数量大的皮层功能神经元，为皮层功能神经元的获得奠定了基础，可以满足同时筛选多种药物的目的。

【技术实现步骤摘要】
重组人Notch1蛋白在制备神经干细胞及皮层神经元中的应用
本专利技术属于生物医学
，具体涉及重组人Notch1蛋白在制备神经干细胞及皮层神经元中的应用。
技术介绍
脑卒中是由于脑血管阻塞或是破裂导致脑组织损伤的一组疾病，包括缺血性脑卒中和出血性脑卒中，其死亡率位居全球第二位，也是中国成年人残疾的首要原因。其中，缺血性脑卒中的发病率较高，占脑卒中总数的60-70％。目前，缺血性脑卒中的急性期治疗为应用溶栓药物重组人组织型纤溶酶原激活物(rt-PA)，但该药的应用有严格的时间限制，为发病4.5小时之内，而且其引起的继发性颅内出血的副作用也限制了它的应用，所以，找寻新的神经保护药物成为当务之急。近20年，科学家在不停的研发新的药物，但在动物实验中有效的药物而临床试验却失败了，究其原因，实验动物和人类对药物的反应还是有很大区别。随着人诱导性多能干细胞(iPSCs)的建立，新的疾病模型也随之产生，由于来源于正常人或病人，iPSCs建立的模型更接近于人本身的特性，利用人iPSCs诱导来的皮层神经元进行药物筛选既避免了伦理问题又大大提高了药物转化效率本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组人Notch1蛋白在制备神经干细胞中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.重组人Notch1蛋白在制备神经干细胞中的应用。


2.如权利要求1所述的的应用，其特征在于，所述神经干细胞为能够分化为具有产生动作电位功能的皮层神经元的神经干细胞。


3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，具体涉及所述神经干细胞的制备方法，包括如下步骤：
(1)当人源iPSCs细胞汇合度达到100％以上时开始利用神经干细胞诱导培养基进行神经干细胞诱导分化培养4-6天，停止诱导，然后进行消化，收集细胞；
(2)步骤(1)中收集的细胞，用神经干细胞维持培养基重悬细胞继续培养4-7天后进行消化传代；获得神经干细胞，所述神经干细胞维持培养基组分中包括重组人Notch1蛋白。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(1)中神经干细胞诱导培养基为：Neurobasal培养基+1×N2+1×B27+1×GlutaMAX-I+500ng/ml人重组Noggin+20μMSB431542+4ng/mlFGF-2；
优选的，步骤(1)中的诱导分化培养过程中，每3天进行半量换液；
优选的，步骤(1)中用胰酶进行消化，收集细胞；
优选的，步骤(1)中用0.25％Trpsin-EDTA进行消化。


5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(2)中神经干细胞维持培养基组分中重组人Notch1蛋白的质量浓度为90-110ng/ml；
优先的，步骤(2)中神经干细胞维持培养基为：Neurobasal培养基+1×N2+1×B27+10ng/mlEGF+10ng/mlFGF-2+20ng/mlBDNF+100ng/ml重组人Notch1蛋白；
优选的，步骤(2)中继续培养过程中，每3天进行半量换液；
优选的，步骤(2...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨潘，朱玮，王琳娜，李慧，
申请(专利权)人：青岛海尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37