鉴定正常细胞样品中致病标记的方法技术

本发明专利技术涉及一种以前鉴定过的作为细胞转化的标记的蛋白质ＳＣＰ－１的识别，并教导了这种蛋白质和有关分子的诊断及治疗用途；还揭示了用一种正常细胞作原材料来鉴定免疫活性物质和病理状态指示物的方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及转化细胞，如癌细胞的分子或标记的鉴定。还涉及鉴定与病理状况，如癌相关分子的方法。背景和现有技术现已确信，很多病理状况，如感染、癌症、自体免失调等，其特征在于某些分子不恰当地表达。因此这些分子可以作为特定病理或者异常状态的标记。除了用作诊断“靶”外，即鉴定为诊断这些异常状态的标记物外，这些分子还可用于产生诊断和/或治疗剂的试剂。一个非限制性的这种实例是癌标记用于生产一种对特定标记特异性的抗体。而另一个非限制性的实例是一种与主要组织相容性复合体分子(MHC)复合的肽，用于产生抗异常细胞的溶细胞性的T细胞。当然，制备这些物质必须先有用于产生这些物质的试剂资源。从细胞中纯化是一种费力而很不可靠的方法。另一种优选的方法是分离编码一种特异标记的核酸分子，然后用这种分离的编码核酸分子来表达目的蛋白质分子。到目前为止，已采用了二种策略来检测这种抗原，如在人类肿瘤中的抗原。这些将会涉及到遗传方法和生化方法。遗传方法的例子可见作为参考文献引用的dePlaen等人的在Proc.Natl.Sci.USA852275(1988)中的描述。这种方法中，从一个肿瘤中得到的一个cDNA文库的几百个质粒库已被转染到受体细胞，例如COS细胞，或者转染到肿瘤细胞系的抗原阴性变异株。由抗肿瘤的溶细胞性T细胞克隆通过其刺激反应的能力来筛选表达肿瘤抗原的转染子。生化方法的实例可见作为参考文献引用的Mandelboim等人在Nature 36969(1994)中的描述，它以酸性洗脱结合到肿瘤细胞I型MHC分子上的肽，然后用反相高效液相层析(HPLC)分离为基础。抗原肽经过与抗原加工缺陷型的突变细胞系的空载I-型MHC分子结合并诱导与细胞毒T淋巴细胞的特异反应后而被鉴定。这些反应包括诱导溶细胞性T细胞系(CTL)增生肿瘤坏死因子(TNF)的释放和靶细胞的溶解，可以用MTT检测法或51Cr释放测定法进行检测。这二种研究抗原分子的方法有以下缺点首先，这些方法极不方便，既费时又昂贵；第二，这些方法依赖于建立预先确定其特异性的溶细胞的T细胞系(CTL)；第三，由于根据其T细胞的所有组成类型，各CTLs既可从具有不同疾病的病人中得到，也能从健康人体得到，因此它们与体内该疾病的病理过程的相关性尚没能得到证实。这二种已知的抗原鉴定和分子定义的方法的内在问题由下面事实来说明，迄今这二种方法只是对非常少的人肿瘤新抗原的限定方法获得了成功。可参见下列文献，van der Bruggen等人，Science 2541643-1647(1991)；Richard等人，J.Exp.Med.178489-195(1993)；Coulie等人，J.Exp.Med.18035-42(1994)；Kawakam；等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 913515-3519(1994)。此外，上述方法还依赖于所需肿瘤类型的已建立的永久细胞系的可得性。从某种肿瘤类型建立细胞系非常困难，参见Oettgen等人，Immunol.Allerg.Clin.North.Am.10607-637(1990)。我们也知道，有些上皮细胞类肿瘤在体外对CTLs不太敏感，因此不能用常规的分析方法。这样一些问题促进本领域中发展其它方法来鉴定肿瘤相关抗原。一个主要的方法参见作为参考文献引用的Sahin等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9211810-11913(1995)中的描述。也可参见作为参考文献引用的美国专利申请系列号08/580,980，现已授权的美国专利号5,698,396和系列号为08/479,328的专利申请，其申请日期分别是1995年6月7日和1996年1月3日。总之，该方法包括，在原核宿主中表达cDNA文库(这些文库是从肿瘤样品中获得的)。然后，通过吸附和稀释血清以进行免疫筛选所表达的文库，从而检测能引起高效价体液应答的抗原。这种方法称为SEREX方法(用重组表达克隆进行抗原的血清学鉴定)。该方法已用来证实已鉴定过的肿瘤相关抗原的表达，也用于检测新抗原。可参考上述的专利申请和Sahin等人的，出处同上，以及Crew等人在EMBO J1442333-2340(1995)中的描述。SEREX方法在食道癌样品中已得到应用，现在已鉴定出一种食道癌相关抗原，并分离和克隆了其编码核酸分子，可参考本文作为参考文献引用的申请日为1996年10月3日的系列号为08/725,182的美国专利申请。一些肿瘤相关基因与基因三联体，即称为SSX基因之间的关系正在研究之中。参见Sahin等人，出处同上；和Tureci等人，CancerRes.564766-4772(1996)。已鉴定出一个这样的SSX基因，称为SSX2，起初作为在70％滑液肉瘤中存在的涉及染色体易位事件(t(X；18)(p11.2；q11.2)的二个基因中的一个被鉴定。参见Clark等，NtureGenetics 7502-508(1994)；和Crew等，EMBO J 142333-2340(1995)。后来发现这种基因在很多肿瘤细胞中都有表达，现在认为是由Tureci等出处同上所述的称为HOM-MEL-40的肿瘤相关抗原。迄今为止，发现其只在肿瘤细胞和正常睾丸中表达。由于它们只在肿瘤细胞和睾丸细胞中表达，因此它与肿瘤抗原“CT”家族中其它成员平行。Crew等人也分离并克隆了与SSX2具有89％核苷酸序列同源性的SSX1基因，参见Crew等，出入同上。针对鉴定SSX基因的其它工作又已鉴定出SSX3，可参考Deleeuw等人在Cytogenet.Genet 73179-183(1996)中的描述。鉴于SSX的出现平行于其它CT抗原的事实，本专利技术人相信其它的SSX基因也可分离出来。对上述的SEREX技术经改良，并结合其它技术，现已用来克隆了二种其它的SSX基因，称为SSX4和SSX5，以及SSX4基因的一种可变剪接变体。该工作在作为参考文献引用的1997年5月5日申请的美国专利号为08/851,138以及在也作为参考文献引用的Chen等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA 941914-1918(1997)中都有描述。许多标记只在正常睾丸和肿瘤细胞中发现，而在其它正常细胞中没有发现的事实表明，在这方面进行进一步的研究将会找到其它的相关分子。但是，至今发现的这些分子的多样性并不能对可能会发现的其它分子的特征提供任何指导。本文公开的本专利技术前的大多数工作，所用的都是来自癌细胞的cDNA文库。正如本文所开发的，现在已表明也可用非转化的，或正常细胞来源的而以前来源于癌细胞的cDNA文库来检测这种分子。令人惊奇的是，过去完全假定肿瘤标记只在癌细胞中表达，现在表明情况并不完全如此。对各种血清样品，如自体血清所筛选出的睾丸细胞文库是一个有用的正常细胞文库的例子。上述的SEREX方法已被证实在鉴定感兴趣的分子方面非常有用。然而本专利技术人发现，当小的cDNA分子是一个给定文库中感光趣的分子时，这种鉴定方法并不理想。鉴定小cDNA分子的方法是本文所述的本专利技术的一个方面，这些小cDNA分子与本文所讨论类型的病理学相联系是令人感兴趣的。联会丝复合蛋白1(下文称为“SCP1”)是一种与精母细胞减数分裂前期相本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定转化细胞存在的方法，包括分析取自除睾丸外的其它组织的细胞样品中ＳＣＰ基因家族成员的表达，其中其表达是该样品中存在转化的细胞的指标。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：厄兹莱姆图雷茨，乌尔沙欣，米夏埃尔普夫翁德舒，
申请(专利权)人：路德维格癌症研究所，
类型：发明
国别省市：US[美国]