评估流式细胞仪中样品行为的方法和系统技术方案

公开了在流式细胞仪样品中产生夹带因子的方法以及系统。所述方法包括使含有一系列颗粒的样品流经流式细胞仪；检测事件，并且基于分布，例如泊松分布，计算那些事件的预期频率；和测量颗粒事件的观察频率。可以由观察事件频率与预期事件频率的比值产生夹带因子。可以基于显示的夹带因子进一步调节流式细胞仪，例如调节分选偏差。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】评估流式细胞仪中样品行为的方法和系统 相关申请的引用 本申请要求2013年2月1日提交的题为"评估流式细胞术中样品行为的方法和系 统"的美国临时申请第61/759, 878号的优先权，在此通过引用的方式将其内容整体并入本 文。[000引
技术介绍
领域 本内容设及通常设及流式细胞术领域，更具体设及样品分析方法。[000引背景 颗粒分析仪，例如流式细胞仪和扫描细胞仪，是能够基于光学参数（例如光散射 W及巧光）分析颗粒特性的分析工具。例如，在流式细胞仪中，在流体悬浮的颗粒（例如分 子、分析物结合珠或者单个细胞）通过检测区域时被暴露于通常来自一种或者多种激光器 的激发光，并且测量颗粒的光散射W及巧光特性。通常用巧光染料标记颗粒或其组分W帮 助检测。通过使用不同光谱的巧光染料标记不同的颗粒或者组分，可W同时检测多种不同 的颗粒或者组分。在一些实施中，分析器包括多种光电探测器，每种用于每一待测量的散射 参数，每种用于每一待检测的不同染料。获得的数据包括每一光散射参数W及巧光发射的 测量信号。 细胞仪可W还包括记录测量数据W及分析数据的手段。例如可W通过与检测用电 子产品相连的计算机实施数据的存储W及分析。例如，数据可表格的形式存储，每行对 应于一个颗粒的数据，列对应于每项测量参数。使用标准文件格式，例如"FCS"文件格式， 存储来自流式细胞仪的数据促进了使用单独的程序和/或机器分析数据。使用现有分析方 法，通常将数据W2维（2D)平面图的形式展示W方便显示，但是可W使用其它方法来显示 多维数据。[000引使用流式细胞仪测量的参数通常包括颗粒沿主要为向前方向散射的激发光（被 称为前向散射（FSC))，颗粒沿主要为侧向方向散射的激发光（被称为侧向散射（SSC))，W 及由在光谱的一个或者多个通道（频率范围）中的巧光分子发出的光（被称为化1、化2 等），或者在该通道中初始检测到的巧光染料发出的光。可W通过染料标记抗体标记的不同 细胞蛋白的散射参数W及巧光发射来鉴定不同的细胞类型。 流式细胞仪W及扫描细胞仪都是可市购的，例如，从抓Biosciences(San Jose,化lif.)。流式细胞仪描述于，例如，Landyetal. (eds.),ClinicalFlow Cytometry,AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciencesVolume677(1993)； Baueretal. (eds. ),ClinicalFlowCytometry:PrinciplesandApplications,Will iams&Wilkins(1993)他merod(ed. ),FlowCytometry:APracticalApproach,Oxford Univ.Press(1997)；Jaroszeskietal. (eds. ),FlowCytometryProtocols,Methods inMolecularBiologyNo. 91,HumanaPress(1997) ；W及PracticalShapiro,Flow 切tometry,4thed.,Wil巧-Liss(2003);通过引用的方式全部并入本文。巧光成像显 微镜描述于，例如，Pawley(ed.),HanclbookofBiologicalConfocalMicroscopy,化d Edition,PlenumPress(1989)，通过引用的方式并入本文。 巧光激活的细胞分选或者颗粒分选是流式细胞仪的具体类型。它提供将异质性颗 粒混合物分选进两个或者更多的容器的方法，所述方法基于每个细胞特殊的光散射W及巧 光特性，一次一个细胞。它记录来自单个细胞的巧光信号，并且物理性地分离具体目标细 胞。首字母缩略词FACS是商标，并且属于BectonDickinson。 将颗粒悬液置于狭窄、快速流动的液体流的中屯、。安排流动W使一般而言（泊松 分布）颗粒之间相对于它们的直径有大的间隔。振动机制引起颗粒流变为单个液滴。调节 系统W使在液滴中有多于一个颗粒的可能性较低。在流变为液滴之前，流动流经一个或者 更多激光交点，在该里测量每一颗粒的目标巧光特性。如果颗粒将要被收集，在一个或者多 个液滴形成并从流中中断的时间阶段，使流动的细胞带电。该些带电的液滴然后经过静电 偏转系统落下，基于液滴所带的电荷将其转移至目标容器。 样品可W包含没有百万个细胞也有上千个细胞。可W分选细胞W将样品纯化至目 标细胞。分选方法通常可W识别=种不同的细胞：目标细胞、非目标细胞W及不能被识别的 细胞。为了高纯度地分选细胞（例如，目标细胞浓度较高），产生液滴的细胞分选器通常放 弃与另一非目标细胞电子上太接近的细胞，W此减少分选的群体的污染。高度区别分选可 W导致用于分析的细胞数量减少。此外，实施详细分选所需的时间可能高于较不严格的分 选。 此外，贴壁细胞样品或者抗原递呈细胞（例如单核细胞W及树突细胞）样品或者 那些W增加细胞间相互作用的方式处理过的细胞样品，经常导致低回收。在分布较好的样 品中，细胞分布是随机的并符合泊松分布的统计。Lindmo指出（1981)通过测量事件之间的 时间间隔，评估与理想分布的误差是可能的。因而，有需要评价"实时"样品行为W测定样 品分布是否较好。 概述 本公开的每一系统、方法W及装置中都有一些创新的方面，没有一项为本文公开 的期望属性单独负责。 在一创新性方面，提供了用于产生流式细胞仪样品夹带因子的方法。所述方法包 括使含有一系列颗粒的样品流经流式细胞仪，其中每一颗粒与信号关联。所述方法包括，在 第一时间间隔内利用检测系统检测来自从流式细胞仪形成的流的一系列事件。所述方法还 包括，基于特征分布例如同质泊松分布，计算在第一时间间隔内事件的预期频率。所述方法 也包括测量第二时间间隔内事件的观察频率，其中所述第二时间间隔在所述第一时间间隔 内。所述方法包括至少部分基于观察频率与预期频率的比值产生夹带因子。 在另一创新性方面，提供了产生流式细胞仪样品的行为信息的方法。所述方法包 括使含有一系列颗粒的样品流经流式细胞仪，其中每一颗粒与事件关联，并且颗粒分布于 液体流中。所述方法包括检测一系列事件W及每一事件的相应到达时间。所述方法包括测 定相对于系列中先前事件的一系列到达间时间，W及相对于指定时间间隔的长度，到达间 时间发生的关联可能性。所述方法也包括在一部分液体流的具有与指定时间间隔等同长度 的计算事件的预期频率，所述计算基于预先确定的分布，例如泊松分布。所述方法包括测量 所述一部分液流的一系列到达间时间事件的观察频率。所述方法也包括至少一部分基于液 流部分的一系列到达间时间事件的观察频率与预期频率的比值，产生样品行为信息。[001引在所述创新性方法的任一种中，所述流可W包括规律间隔的液滴。在一些方法的 实施中，方法可W包括将夹带因子与预先确定的值进行比较（例如，大于1)，并且基于比较 的结果，驱动与流式细胞仪操作上相连的控制系统中的校正动作。校正动作的实例包括停 止流式细胞仪中样品的流动。 方法中的一些实施可W包括分选流中的颗粒。在此种实施中，校正动作可W包括 基于夹带因子调节分选。 当样品在流式细胞仪中流动时，创本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于产生流式细胞仪样品的夹带因子的方法，所述方法包括：使含有一系列颗粒的样品流经流式细胞仪，其中每一颗粒与信号关联；在第一时间间隔，使用检测系统检测流式细胞仪形成的流中的一系列事件；基于特征分布，计算第一时间间隔中事件的预期频率；测量在第二时间间隔内事件的观察频率，其中所述第二时间间隔在所述第一时间间隔内；和至少部分基于所述观察频率与所述预期频率的比值产生夹带因子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：约瑟夫·特罗特，苏吉达·伊耶，
申请(专利权)人：贝克顿迪金森公司，
类型：发明
国别省市：美国;US