一种新的多肽——人钙结合蛋白42号和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人钙结合蛋白４２，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人钙结合蛋白４２的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽－－人钙结合蛋白42，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。钙在许多细胞内生理活性过程中起着细胞内中介物的作用。这些生理学活性过程包括基因调控、细胞循环调控、信号转导、脑神经递质释放及肌肉收缩糖原分解等。这些作用在细胞外信号刺激钙离子释放时被激活。钙离子与多种钙结合蛋白结合，进一步通过介导一些激活其它分子的信号来发挥一些特殊的生理学功能。钙结合蛋白家族是一很大的蛋白超级家族，含有一钙结合基序，被称为“EF-手型”结构域。许多钙结合蛋白含有多个EF-手型基序，该基序是蛋白与钙的结合位点。已有250个这样的钙结合蛋白被确定。钙调蛋白是分布最广的一种钙作用介导物。钙调蛋白含有四个EF-手型结构域，当这些蛋白与钙离子结合后，会发生相应的构象变化。钙调蛋白的激活可促使其与其它目标蛋白结合，从而改变这些蛋白的活性。钙调蛋白的主要目标蛋白是钙调蛋白依赖的蛋白激酶，该酶参与平滑肌收缩、糖原降解、神经递质释放等过程的调节；而钙神经素在生物体内涉及脑中的突触转运。因而，钙调蛋白在这些生理过程中也有着重要的作用，其表达异常通常会影响这些生理过程的正常进行，从而引发相关的疾病，如各种神经递质释放异常相关的疾病，如神经系统发育紊乱性疾病、神经系统推行性疾病、神经肌肉疾病及神经皮肤综合症等。钙磷蛋白是另一种钙结合蛋白，由钙结合及蛋白磷酸化来共同调节。狗的钙磷蛋白P24是一含有三个EF-手型结构域的钙结合蛋白，其由环腺苷酸依赖的蛋白激酶进行磷酸化。P24在各种不同的分泌组织如唾液腺、肺及脑中均有表达，这表明其在离子转运过程中起重要的作用。1993年，Nemoto Y.等人又从野兔体内分离得到了相似的钙结合磷酸化蛋白R2D2，该蛋白在嗅觉神经细胞中调节着信号的转导。R2D2含有三个EF-手型结构域，其也是由环腺苷酸依赖的蛋白激酶及CaM激酶来完成磷酸化过程。同年，Yasuo Nemoto等人从野兔中克隆得到了R2D2抗原蛋白，该蛋白由189个氨基酸组成，且亦含有三个钙结合的EF-手型结构域、Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点及cAMP依赖的蛋白激酶的磷酸化位点。该蛋白为第一个在嗅觉感受器神经元中发现的钙结合蛋白，其在生物体内调节着嗅觉信号的传导。其在生物体内，与生物的嗅觉功能相关，其表达异常通常会引发一些嗅觉器官的疾病。本专利技术的新的人钙结合蛋白42与野兔的R2D2抗原蛋白在蛋白水平上有32％的同一性和55％的相似性，且两者具有相似的结构特征，均含有钙结合的EF-手型结构域、Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点及cAMP依赖的蛋白激酶的磷酸化位点，因而两者同为钙结合蛋白，且具有相似的结构特征。由于如上所述人钙结合蛋白42蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人钙结合蛋白42蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人钙结合蛋白42蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽－－人钙结合蛋白42以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人钙结合蛋白42的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人钙结合蛋白42的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人钙结合蛋白42的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽－－人钙结合蛋白42的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽－－人钙结合蛋白42的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人钙结合蛋白42异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中1022-2170位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-3829位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人钙结合蛋白42蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人钙结合蛋白42蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人钙结合蛋白42表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与人钙结合蛋白42结合时，一种可引起该蛋白质改变从而调节该蛋白质本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人钙结合蛋白４２，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博容基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]