一种新的多肽——人锌指蛋白51和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人锌指蛋白５１，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如各种肿瘤、神经系统疾病、发育紊乱症、血液性恶性疾病，某些遗传性疾病，内分泌系统疾病如内分泌腺瘤，免疫系统疾病、ＨＩＶ感染和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人锌指蛋白５１的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人锌指蛋白51，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。锌指蛋白在生物活细胞中起着各种重要的作用，其中最重要的是作为转录调节因子发挥作用。真核基因的转录调控对于基因的正常表达是十分重要的，通常由转录调控因子来完成这一调控过程。转录调控因子在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录。编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。锌指蛋白对基因表达的调控主要通过与特定的DNA序列结合来完成，现在发现也有一些锌指蛋白可与RNA结合以参与调控生物体内一些重要的信号转导过程。锌指蛋白在生物体内的分别非常广泛，按其组成结构上的特征又可分为各种不同的亚家族，不同亚家族的成员在生物体内协同作用，以正确地调节不同基因的转录表达及生物体内一些重要的信号转导途径的完成。锌指蛋白为编码锌离子介导的核苷酸结合蛋白多基因家族中的成员，按锌指蛋白所含锌指结构的不同，又可将其分为不同的类型，C2H2型锌指蛋白即为分布最广的一类，该蛋白家族成员的蛋白序列中均含有28-30个氨基酸长的保守的指重复序列(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸残基位点为高度保守的。这一序列在很多不同的锌指蛋白中均含有多个拷贝，其拷贝数不同则功能也不同。锌指蛋白与不同长度的DNA的结合依赖于指结构的数量，多指结构可能与复合物的结合稳定性有关，而复合物是RNA聚合酶转录的作用位点。锌指蛋白家族的成员在生物体内的分布非常广泛，按其结构特征还可分成各种亚家族。C2H2型Kruppel锌指蛋白在生物体内即形成了独立的亚家族，该亚家族的成员均含有如上所述的C2H2型锌指蛋白家族保守的锌指基序，且各基序间由保守的H/C连接区域连接在一起，该区域含有保守的氨基酸序列TGEKPY/F。此外，Bellefroid等人于1991年就指出，该亚家族中约有三分之一的成员在其N末端还含有一由75个氨基酸组成的保守基序，并将此基序命名为KRAB(Kruppel-associated box)结构域。该结构域为锌指蛋白N末端与DNA结合的结构域，在进化上高度保守。该结构域被分为A、B两个盒结构，其中富含变化的氨基酸残基，形成两个亲水性螺旋。锌指蛋白KRAB亚家族中的成员有些同时含有KRABA-盒及KRAB B-盒，而有些仅含KRAB A-盒。研究发现，KRAB结构域为一潜在的转录抑制结构域，其中由45个氨基酸组成的亲水性螺旋片段为转录抑制所必须的，螺旋结构中氨基酸的替换将减弱蛋白对转录的抑制功能，从而导致基因转录表达的失调及引发各种发育及恶性紊乱相关的疾病。同时，KRAB结构域与第一个锌指结构间也含有一保守的连接区域，该区域至少含有一个核酸定位信号，该信号与蛋白的正确定位及发挥功能有关。人们已从酵母、果蝇、鼠及人等多种生物体中分离得到了各种不同的锌指蛋白。1991年，Bellegroid等人从鼠及爪蟾体内克隆得到了两个KRAB型锌指蛋白；1993年，Bellegroid等人又从人体内克隆得到KRAB型锌指蛋白亚家族的另一个成员ZNF91，该蛋白在人的各种组织中均有表达，而在人的T淋巴细胞中表达量显著增加。上述这些蛋白在体内各种组织中参与调控多种基因的转录与表达，其突变或表达异常通常与生物体内各种相关组织的肿瘤及癌症、血液系统疾病、发育紊乱性疾病等疾病的发生均密切相关。另外，它们在在脊髓发育、分化等过程中亦起着重要的调节作用。本专利技术的人的基因与已知人锌指蛋白ZFP91在蛋白水平上有52％的同一性和66％的相似性，且与其具有相似的结构特征，在其氨基酸序列的N末端含有锌指蛋白KRAB亚家族的特征性结构域---KRAB结构域；C末端则含有锌指蛋白家族的特征性结构域---锌指结构。基于以上各点，故认为本专利技术的新基因为人锌指蛋白KRAB亚家族中的新成员，命名为人锌指蛋白51。并以此推断其与ZFP91相似，同为锌指蛋白KRAB亚家族中的成员，并具有相似的生物学功能。该蛋白在生物体各种组织中均有表达，其通常与各种发育紊乱性疾病、血液系统疾病、相关组织的肿瘤及癌症等疾病的发生密切相关，其还可能在脊髓发育过程中起重要的调节作用。该蛋白还可用于诊断及治疗上述各种相关的疾病。由于如上所述人锌指蛋白51蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白51蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白51蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人锌指蛋白51以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白51的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白51的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人锌指蛋白51的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人锌指蛋白51的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人锌指蛋白51的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人锌指蛋白51异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中22-1428位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1983位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人锌指蛋白51蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人锌指蛋白51蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人锌指蛋白51表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人锌指蛋白５１，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]