一种丹参药材的鉴别方法技术

本发明专利技术涉及中药丹参水溶性提取物ＨＰＬＣ指纹图谱建立的方法及其标准指纹图谱。首先制备供试品溶液，取丹参药材粉末（过３０目筛）４．００ｇ，加水５０ｍｌ，精密称重，回流提取２小时，放冷至室温，补足失水，取２ｍｌ置２５ｍｌ量瓶，甲醇定容至刻度，离心，取上清液作为供试品溶液。再配制对照品溶液，取丹参素钠、原儿茶醛对照品适量，用流动相稀释，制成每１ｍｌ中含丹参素钠２０μｇ，原儿茶醛５．０μｇ，作为对照品溶液。测定法是分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各２０μｌ、１０μｌ，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，计算，即得。建立丹参标准指纹图谱。将待测丹参样品指纹图谱与标准指纹图谱对比，比较其异同。本发明专利技术的优点是方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握，能从色谱的整体特征面貌上把握丹参的品种和质量情况，可将其作为丹参质量控制及真伪鉴别的指标之一。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及中药的指纹图谱的建立方法，具体地说是丹参水溶性提取物HPLC指纹图谱的建立方法，本专利技术还涉及由此方法所得到的丹参药材标准指纹图谱。丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。全国大部分地区均产。由于丹参因品种、产地、采收期不同而造成质量参差不齐，因而其制成品质量的稳定性也难以保证。目前，对丹参及其复方制剂的鉴定，往往是选取丹参的一、二个活性成分或指标成分进行含量测定，并以其含量多少来判定质量。例如，以丹参酮ⅡA含量(中国药典2000年版一部58页)或丹参素含量(张友芹等，中医药学报，2000,28(3):68)等来鉴别丹参药材的质量；以丹参酮来判定丹参品种和产地情况(裘飞君，中国现代应用药学，1998,15(5):16；胡世林等，中国中药杂志，1999,24(12):721)；用丹参素含量(严常开等，中国医院药学杂志，2000,20(10):600)、原儿茶醛含量(郑末晶等，中国药事，2000,14(4):254)或丹参酮ⅡA含量(林伟忠等，中成药，2000,22(11):766)等判别复方丹参制剂的质量，用丹参酮ⅡA含量鉴别不同厂家生产的复方丹参片的质量(邵水娟，中国药业，2000,9(7):27)等。已知的丹参的化学成分有几十种，其脂溶性成分大多为醌型红黄色物质，如丹参酮Ⅰ、ⅡA、ⅡB，丹参醌A、B、C，丹参酸钾脂，异丹参酮Ⅰ、Ⅱ，隐丹参酮等。其水溶性成分大多为酚性醛、酚性酸、二萜酸，如丁二酸、丹酚酸A、B、C,3,4-二羟基苯甲酸等。此外，还分离出β-谷甾醇、维生素E等(王伯祥主编，中医肝胆病学，第一版，中国医药科技出版社，1993年，96页)。如果用一、二种丹参的活性成分来说明丹参及其成方制剂的内在质量，具有一定的片面性，更不用说无药效的指标成分了。要控制丹参及其成方制剂的功效，就不能只针对其一、二个化学成分，必须对它的物质群整体予以控制。所以，除了“微观分析”外，还应用某种“宏观分析”方法，从整体上有效地表征中药质量。中药指纹图谱是指某种中药材或中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，对于有效控制中药材或中成药的质量，具有重要的意义。日本汉方药主要生产企业在20世纪80年代就已经在企业内部采用高效液相指纹图谱控制质量。德国、法国在对银杏叶提取物联合开发的过程中，发现银杏叶提取物的医疗作用是提取物所得物质群的整体作用结果，而对这样一个整体的质量控制，亦采用高效液相指纹图谱方法。美国FDA最近几年制定的植物草药指南中已经明确把指纹图谱作为混合物质群的质量控制方法(FDA.Guidance of Industry:Botanical Drug(Draft).2000 August)。指纹图谱作为中草药及其提取物质量控制方法，目前已经成为国际共识。现在，对丹参中活性成分如丹参酮、丹参素等的测定方法较多，但对丹参指纹图谱的建立方法却未见报道。为解决丹参质量不稳的问题，本申请人对不同产地丹参进行了考察比较，于1997年在商洛建成天士力商洛丹参基地，并对基地实施GAP管理。为建立丹参药材质量的综合控制方法，特以国家药品监督局2000颁发的关于中药材指纹图谱技术要求，对天士力商洛丹参基地的丹参10批药材进行了测定，建立起丹参指纹图谱测定方法。本专利技术的目的是通过对丹参水溶性提取物HPLC指纹图谱的研究，摸索出一种丹参质量控制的方法，确立建立丹参的标准指纹图谱的方法，借此可将丹参指纹谱作为质量控制及真伪鉴别的指标之一。本专利技术还同时提供了丹参的标准指纹图谱。本专利技术通过下列步骤实施。一种丹参药材指纹图谱建立的方法，它是采取如下步骤步骤一供试品溶液的制备取过30目筛的丹参药材粉末加水，精密称重；回流提取1-3小时，放冷至室温，补足失水；取提取液少量置量瓶中，甲醇定容至刻度，离心，取上清液作为供试品溶液；步骤二对照品溶液的制备取对照品适量，用流动相稀释，制成对照品溶液；步骤三测定分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，以对照品的色谱峰的相对保留时间和峰面积为1计算相对保留时间和相对峰面积，即得到丹参标准指纹图谱。本专利技术的优选实施方案如下(1)色谱条件与系统适用性试验色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相为甲醇-水-冰醋酸(8∶92∶1)；检测波长254±1nm；理论塔板数以丹参素峰计算，应不低于2500；(2)供试品溶液制备取丹参药材粉末(过30目筛)4.00g，加水50ml，精密称重，回流提取2小时，放冷至室温，补足失水，取提取液2ml置25ml量瓶，甲醇定容至刻度，离心，取上清液作为供试品溶液；(3)对照品溶液的制备取丹参素钠，原儿茶醛对照品适量，用流动相稀释，制成每1ml中含丹参素钠20μg，原儿茶醛5.0μg，作为对照品溶液；(4)测定法分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20μl、10μl，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，记录80分钟的色谱图，即得。以原儿茶醛的色谱峰(S峰)的相对保留时间和峰面积为1计算相对保留时间和相对峰面积；(5)建立丹参标准指纹图谱，待测丹参样品指纹图谱与标准指纹图谱对比，区别其异同。本专利技术的原理是根据丹参水溶性成分为其主要活性成分，建立起丹参水溶性提取物HPLC指纹图谱，从色谱的整体面貌特征上把握丹参的品种和质量情况。本专利技术的优点如下(1)以丹参水溶性提取物建立起来的HPLC指纹图谱，代表着丹参大部分药理活性，能有效地表征丹参药材的质量。对丹参的全部化学成分进行检测，既不可能也没有必要。大量的药理和临床研究结果表明丹参的水溶性成分的活性强于脂溶性成分，故用丹参的水溶性成分作为监控指标就更具有代表性。(2)以丹参整个指纹图形作为一个整体看待，注重各个构成指纹特征峰的前后顺序和相互关系，注重整体面貌特征，既避免了因只测定一、二个化学成分而判定丹参整体质量的片面性，又减少了为质量达标而人为处理的可能性。本专利技术为完整、准确评价丹参的质量提供了新的对照标准，将为提高丹参及其成方制剂的质量及疗效做出贡献。(3)本专利技术具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的特点。文献中用于测定丹参素或原儿茶醛的检测波长一般为281±1nm(张友芹等，中医药学报，2000,28(3):68；郑末晶等，中国药事，2000,14(4):254)，但指纹图谱不是为了测定某个成分的精确含量，而是要充分反映化学成分的信息。与检测波长281±1nm相比，用254nm进行测定，出峰较多，反应的信息较完全，故采用254nm为检测波长，这也是与现有方法的不同之处。另外，为测定丹参中某种化学成分的含量，文献方法往往要对样品进行较复杂的处理，如水提醇沉、过吸附树脂等(李文春等，黑龙江医药，1999,12(24):193)，而本专利技术只需用水热提，样品处理大为简便，节约了检验的成本和时间。本专利技术的实施例如下。1仪器与试药1.1仪器惠普1100高效液相色谱仪；惠普VWD紫外可变波长检测器；美国奥泰色谱之星工作站。1.2试药丹参素钠对照品，自制，纯度大于99％；原儿茶醛对照品，市售分析纯精制，纯度大于99％；甲醇，色谱纯；冰醋酸，分析纯；蒸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种丹参药材指纹图谱建立的方法，其特征是它是采取如下步骤： 步骤一供试品溶液的制备：取过３０目筛的丹参药材粉末加水，精密称重；回流提取１－３小时，放冷至室温，补足失水；取提取液少量置量瓶中，甲醇定容至刻度，离心，取上清液作为供试品溶液； 步骤二对照品溶液的制备：取对照品适量，用流动相稀释，制成对照品溶液； 步骤三测定：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，以对照品的色谱峰的相对保留时间和峰面积为１计算相对保留时间和相对峰面积，即得到丹参标准指纹图谱。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：叶正良，张文生，岳洪水，李旭，宋晓涛，
申请(专利权)人：天津市金士力药物研究开发有限公司，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]