一种新的多肽——人锌指蛋白15和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人锌指蛋白１５，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人锌指蛋白１５的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--人锌指蛋白15，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。蛋白质含有锌指特征已知道参与多种有机体(酵母、果蝇、爪蟾、小鼠、人)的发育和正常细胞的生长和分化以及肿瘤的增殖。锌指模式的核酸束缚特性是由于它的第三位折叠和锌离子的四面体同等，折叠结构通过一些亲水的残基互相作用于核酸。在植物中，大约有30个蛋白被报道含有或者一个、二个、三个或四个锌指。植物锌指蛋白特征是相邻的锌指之间有不同的间距和一个高度保守的序列。每个指定位一个假定的DNA接触表面，它们特异性识别目标DNA。一些真核和病毒蛋白含有保存的40-60残基半胱氨酸富集区，结合2个原子的锌，可能参与协调蛋白-蛋白互相作用，锌络合物系统的3D结构对环形区域来说是唯一的，在这样一个区域内半胱氨酸的间距是C3HC4排列。许多锌指蛋白基因在不同物种中被视作生物重要性的基本特征，同源基因有共同的祖先和折叠，这是锌指蛋白特别的证据。我们从人胎脑组织中克隆到的新基因，基因号0398H01，它包含的多核苷酸序列全长为3792bp，阅读框起始点121，中止位置813，编码了230个氨基酸，是一个锌指结构蛋白，它包含C3HC4区域，推测其可能是一个转录因子，通过一系列不同特异性的DNA识别和结合，参与调节基因的表达。研究思路是用这个基因的锌指区域作为探针去筛选一个人类真核基因库，鉴定其cDNA克隆，然后用RT-PCR方法去检测所属的细胞系，从而揭示它的功能。我们的这一个新基因所编码的锌指蛋白，具有结合2个锌原子的半胱氨酸富集区，从细胞生物学的角度来看，基本营养物象半胱氨酸、锌、铜和维他命C和E是维持最佳(免疫)细胞功能必不可少的，在进化发展中可利用的这些营养物的最佳分配一般可防止疾病，当然最根本还是依靠遗传和环境因素。正确数量的半胱氨酸、铜和锌离子在正确的地方在适当的时候以适当的方式被利用可防止AIDS病毒的繁殖，锌和铜离子抑制/阻碍激活基本蛋白分裂酶，象HIV蛋白酶，另一方面，通过锌指分子结构，锌离子直接或间接调控T细胞抗病毒活动，锌离子和铜离子通过半胱氨酸和谷胱甘肽保存有充足的数量是有效的AIDS病毒天然抑制物，因此能防止慢性病毒疾病的发展及最终导致艾滋病、自身免疫疾病、过敏或肿瘤。一种安全的相当便宜和可广泛使用的内服药象N-乙酰半胱氨酸能帮助补充额外的半胱氨酸，而抗HIV多肽T22，能作为半胱氨酸和锌支持或携带分子来阻碍HIV通过CD4受体进入细胞。综上所述，通过和包含C3HC4锌指蛋白家族的分析比较以及对我们这一个新基因的功能推测，认为这一个新基因在防止艾滋病、人类自身免疫疾病、过敏和抗肿瘤的药物开发方面具有极大的应用前景。通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本专利技术的多肽的表达谱与人锌指蛋白25的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人锌指蛋白15。由于如上所述人锌指蛋白15蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白15蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白15蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--人锌指蛋白15以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白15的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白15的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人锌指蛋白15的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--人锌指蛋白15的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--人锌指蛋白15的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人锌指蛋白15异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中749-1150位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2712位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人锌指蛋白15蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人锌指蛋白15蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人锌指蛋白15表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人锌指蛋白１５，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]