一种新的多肽——人锌指蛋白FPM315-17和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－－人锌指蛋白ＦＲＭ３１５－１７，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如各种肿瘤，神经系统疾病，血液性恶性疾病，发育紊乱症，ＨＩＶ感染等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人锌指蛋白ＦＰＭ３１５－１７的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人锌指蛋白FPM315-17，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。C2H2型锌指结构是由两对恒定的Cys和His残基及一个锌离子相互作用构成的(A.D.Frankel，J.M.Berg，C.O.Pabo，1987)。这种锌指结构能够在许多转录因子中找到，而这些转录因子在控制细胞生长、细胞分化或发育中产生影响(T.El-Baradi，T.Pieler，1991)。锌指蛋白FPM315属于C2H2型锌指蛋白。锌指蛋白FPM315含有683个氨基酸，在翻译起始位点之前有一个框内TGA终止密码子，在核苷酸序列的第3232—3237处存在一个AATAAA多聚腺苷酸信号。蛋白的羧基末端含有9个C2H2型锌指结构域，这些结构域被分为三个单位第一个单位(380—400)包含1个C2H2结构域；第二个单位(436—540)包含4个C2H2结构域；第三个单位(577—681)也包含4个C2H2结构域。在锌指结构域中，Cys和His残基是高度保守的，每个锌指结构域都有如下的一致性序列C-X2-C-X3-F-X5-L-X2-H-X3-H。第二和第三个单位之间由高度保守的H/C相互连接，其一致性序列为T-G-E-K-P-Y-X(R.Schuh，W.Aicher et al.，1986)。锌指蛋白FPM315的N末端部位含有一个富含Leu的区域LeR(G.Pengue，V.Calabro et al.，1994)，在许多锌指蛋白中非常保守。LeR富含Leu和Glu，证明它能够形成一个在一般转录因子中都能找到的带有负电荷的区域。并且还包含了两个α螺旋结构，表明它可能介导蛋白与转录机制相关组分的相互作用。KRAB区域在大约三分之一的C2H2型锌指蛋白中存在并且高度保守(E.J.，Bellefroid，D.A.Poncelet et al.，1991；M.Rosati，M.Marino et al.，l991)，包括KRAB-A和KRAB-B两种。FPM315只含有KRAB-A区域，作为转录遏制区域发挥作用(G.Pengue，V.Calabro et al.，1994；R.Witzgall，E.Olearyet al.，1993)。锌指蛋白FPM315的mRNA在许多婴儿和成人组织中表达，包括人类的肿瘤细胞系和淋巴细胞系等等，这种广泛的表达证明，FPM315在基础细胞事件中起着非常重要的作用，包括蛋白的合成、细胞的新陈代谢(P.J.Mitchell，R.Tjian，1989)。本专利技术的多肽与上述的锌指蛋白FPM315有58％的相同性，75％的相似性，并且包含锌指蛋白家族特征性的保守序列，因此认为此蛋白是一种新C2H2型锌指蛋白，具有与锌指蛋白FPM315相似的生物学功能，并命名为人锌指蛋白FPM315-17。由于如上所述人锌指蛋白FPM315-17蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白FPM315-17蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白FPM315-17蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人锌指蛋白FPM315-17以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白FPM315-17的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白FPM315-17的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人锌指蛋白FPM315-17的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人锌指蛋白FPM315-17的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人锌指蛋白FPM315-17的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人锌指蛋白FPM315-17异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中224-685位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1284位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人锌指蛋白FPM315-17蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人锌指蛋白FPM315-17蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人锌指蛋白FPM315-17表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人锌指蛋白ＦＰＭ３１５－１７，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]