一种新的多肽——人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人脂蛋白前提蛋白信号肽９．１３，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人脂蛋白前提蛋白信号肽９．１３的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。脂蛋白是一类由蛋白和各种脂肪酸和类固醇构成的结合蛋白。蛋白和类固醇靠弱的非共价键结合在一起的，而另一些脂蛋白则是由蛋白与脂类靠共价键结合。脂蛋白可以根据其蛋白质组成分为三类，核蛋白类(如凝血酶至活酶)、磷蛋白类(如卵黄中的脂磷蛋白)和单纯蛋白类(如血浆脂蛋白和脑蛋白脂)。脂蛋白在机体的作用十分重要。例如，在血液中的脂类有一部分就是由血浆脂蛋白传送的。在细胞中，对膜蛋白进行脂类的共价修饰是一个普遍的现象。事实上，细胞膜的蛋白都是脂蛋白。它们与细胞膜的磷脂层相互作用形成膜结构。膜脂蛋白的合成与修饰的过程在原核生物中研究的较清楚。在原核生物中，膜脂蛋白首先作为一个蛋白前体被合成出来。这个前体蛋白的N端包含一个信号肽。在蛋白分泌出质膜的过程中，相继会发生N端的半胱氨酸的修饰和信号肽的切除这两个过程。这个过程是在一个保守的区域中发生的。而将来不经过脂修饰的蛋白的信号肽则不具有这个保守序列。看来，这个保守序列是成熟蛋白进行脂修饰与否的分选信号。之后末端的半胱氨酸残基N-乙酰化，蛋白转移至外膜，并共价连接到肽聚糖层。信号肽在被信号肽酶II所剪切的同时也被水解。上述膜脂蛋白的合成与修饰的过程在许多的原核生物和原核生物中都有发现，具有较普遍的意义。在信号肽剪切过程中，信号肽酶II识别信号肽上一段保守的序列，并剪切半胱氨酸残基的与甘油脂-脂肪酸脂相连的上游片断。这一段保守序列是DERK(6)-(2)---C其中，C是脂的连接位点，并必须位于15到35个残基之间。在序列的前七个氨基酸中必须有一个赖氨酸或者精氨酸。在脑中，阿朴脂蛋白与阿尔兹海默氏症相关。高密度脂蛋白可以将脑中存在的多余的胆固醇除去，保持淀粉海量维持在正常水平。这类脂蛋白的表达失常会导致阿尔兹海默氏症，胆固醇在脑内沉积，导致脑瘤等。许多类型的血浆脂蛋白是由肝脏形成的，因此如果脂蛋白前体蛋白的信号肽的合成受阻，会导致生成的蛋白不能正确的脂化，而导致脂蛋白的合成代谢紊乱，对血浆脂蛋白来说，其传送脂类的功能就会受到影响，从而导致一系列的肝脏疾病，如外源/内源性脂血症、家族性高胆固醇血症、胆固醇脂储藏病、脂肪肝等。严重的脂肪肝还会导致肝癌。脂蛋白的合成代谢紊乱还会导致冠心病等疾病。通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本专利技术的多肽的表达谱与人脂蛋白前提蛋白信号肽的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13。由于如上所述人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中291-542位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1865位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人脂蛋白前提蛋白信号肽9.13表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人脂蛋白前提蛋白信号肽９．１３，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]