泽泻甾醇提取物及其制备方法、质量控制方法技术

本申请采用超临界Ｃ０＃－［２］流体萃取泽泻制得泽泻总甾醇提取物，其中的泽泻醇Ｂ单乙酸酯（ｂｍ）含量不少于３．５％，按分光光度法测定的总甾醇含量以泽泻Ｂ单乙酸酯计不少于５０％的部位提取物。此提取物有效成分含量高，能够达到中药二类新药的开发要求，我们在此基础上进一步将其制成具有特定剂型的产品，具有抗脂肪肝、高血压、高血脂的功效。同时，本申请中还提供了用高效液相法测定原料及提取物中泽泻醇Ｂ单乙酸酯含量的方法，及用分光光度法测定原料及提取物中总甾醇含量的方法，作为控制原料及产品质量的方法。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及泽泻甾醇提取物及其制备方法、泽泻原料及提取物的质量控制方法。一、超临界CO2流体萃取(SFE-CO2)泽泻总甾醇的工艺研究影响泽泻甾醇SFE-CO2的因素有萃取温度、萃取压力、药材粒度、CO2流量及萃取时间等。CO2的临界温度为31.1℃，临界压力为7.32Mpa。常用的超临界萃取区域为温度为31～92℃，压力为5.8～30.0Mpa。因为在该区域内，只要压力或温度稍加改变，超临界流体的密度就产生较大的变化，对溶质的溶解度也相应地产生较大的变化。这一特征也使得萃取物与超临界流体可以很方便地得以分离。超临界CO2分离纯化植物油脱臭物中植物甾醇(甾醇作为萃余物，留在萃取釜中)的试验结果表明，在一定温度下，压力低时，CO2溶解能力小，甾醇收率高，但纯度低；相反，压力高时，CO2溶解能力大，甾醇损失大，但纯度高。在相同压力下，温度升高，CO2溶解能力减小，甾醇收率提高，但纯度降低。为了确定泽泻甾醇SFE-CO2正交试验的水平，我们进行了泽泻总甾醇超临界CO2萃取预试验。(一)萃取工艺预试验预试验的条件根据以往类似物的萃取条件和初试而定。1、药材的鉴定与前处理萃取所用泽泻为泽泻药材除去杂质，喷淋清水，稍润切制而成的干燥厚片，原药材应符合中国药典2000版一部P184泽泻项下的规定。2、泽泻总甾醇超临界萃取预试验(1)固定萃取温度、压力、时间及流量，考察药材粒度的影响萃取条件温度60℃；压力23MPa；时间1.5h；流量15～18kg/h。药材粒度及萃取结果见表1。表1 药材粒度对泽泻甾醇SFE-CO2的影响粒度(目) 得油率(％)油中Bm含量(％) 油中总甾醇含量(％)80 1.36 4.35 53.0660 1.40 4.31 53.4440 1.25 4.30 53.2020 1.03 4.22 53.465～100.75 3.97 53.37(2)固定萃取压力、时间、流量及药材粒度，考察温度的影响萃取条件压力23MPa；时间1.5h；流量15～18kg/h；粒度60目。萃取温度及萃取结果见表2。表2萃取温度对泽泻甾醇SFE-CO2的影响温度(℃)得油率(％) 油中Bm含量(％) 油中总甾醇含量(％)80 0.84 2.8949.2670 1.36 3.5952.4160 1.40 4.3153.4450 1.21 4.2457.9040 0.87 3.6950.78(3)固定萃取温度、时间、流量及药材粒度，考察压力的影响萃取条件 温度60℃；时间1.5h；流量15～18kg/h；粒度60目。萃取压力及萃取结果见表3。表3 萃取压力对泽泻甾醇SFE-CO2的影响压力(MPa)得油率(％)油中Bm含量(％)油中总甾醇含量(％)35 1.56 2.97 48.5330 1.47 3.86 50.6926 1.45 4.05 56.8223 1.40 4.31 53.4420 1.18 4.21 52.2117 0.86 3.82 48.32(4)固定萃取温度、压力、时间及药材粒度，考察流量的影响萃取条件温度60℃；压力23 MPa；时间1.5h；粒度60目。CO2流量及萃取结果见表4。表4 CO2流量对泽泻甾醇SFE-CO2的影响CO2流量(kg/h) 得油率(％) 油中Bm含量(％) 油中总甾醇含量(％)25～28 0.93 4.32 53.2520～23 1.39 4.35 53.5615～18 1.40 4.31 53.4410～13 1.33 4.46 53.325～8 0.75 4.33 53.27 (5)固定萃取温度、压力、药材粒度及流量，考察时间的影响萃取条件温度60℃；压力23MPa；CO2流量15～18kg/h；粒度60目。萃取时间及萃取结果见表5。表5 萃取时间对泽泻甾醇SFE-CO2的影响萃取时间(h) 得油率(％)油中Bm含量(％) 油中总甾醇含量(％)2.5 1.49 4.2553.2421.47 4.2753.291.5 1.40 4.3153.4411.11 4.3953.57(6)两级分离罐中萃取物的Bm和总甾醇含量比较由于压力或温度稍加改变，超临界流体的密度就产生较大的变化，对溶质的溶解度也随之产生较大的变化。这一特征不仅使萃取物与超临界流体可以很方便地得以分离，而且通过使用多级分离罐及改变分离温度和/或压力，使萃取物进一步纯化成为可能。我们考察了两级分离罐中萃取物的Bm和总甾醇含量，结果见表6。表6 两级分离罐中萃取物的Bm和总甾醇含量比较油中总甾分离压力 分离温度 得油率 油中Bm试验号 分离罐号醇含量(MPa) (℃) (％) 含量(％)(％)I8 50 1.064.2153.651II 6 40 0.394.6654.43I8 50 0.973.9252.852II 6 40 0.354.1653.07I8 50 1.104.6753.063II 6 40 0.393.4054.38上述试验萃取条件萃取温度60℃，萃取压力23MPa，药材粒度60目，CO2流量15～18kg/h，萃取时间1.5h。由预试结果可以看出，泽泻甾醇SFE-CO2的最佳条件应在压力20～26MPa、温度50～70℃、CO2流量10～23kg/h、药材粒度20～60目、时间1～2小时范围之内。考虑到超临界流体萃取操作参数(如温度、压力等)与收率或有效成分的浓度之间关系的多样性(如有S形、抛物线形等)及变化趋势的非单一性，我们把泽泻甾醇SFE-CO2正交试验的水平设置在压力20～26MPa、温度50～70℃、CO2流量10～23kg/h、药材粒度20～60目、时间1～2小时范围之内，以便筛选出真正的最佳萃取条件。由表6可见，两级分离罐中萃取物的Bm和总甾醇含量无明显差异，因此两级分离罐中的萃取物可以合并。(二)萃取工艺正交试验1、考察指标及正交表的确定泽泻的有效成分在脂溶性部位，主要是总甾醇(以Bm计)，故选择得油率、油中Bm和总甾醇含量作为工艺研究的考察指标。影响指标的主要因素是萃取温度(A)、萃取压力(B)、萃取时间(C)、CO2流量(D)和药材粒度(E)。根据预试验结果，按五因素三水平，设计正交表，见表7。根据L18(37)正交表安排试验。表7 泽泻SFE-CO2正交试验因素水平表因素水 AB C D E平 T(℃)P(Mpa) t(h)Ft(kg/h)粒度(目)1 70 26 2 20-23 202 60 23 1.5 15-18 403 50 20 1 10-13 602、实验方法(1)超临界CO2萃取方法称取经粉碎并于65℃干燥8小时的泽泻药材300g，装入1L提取罐中，按正交表试验条件进行萃取，并于分离罐II(50℃，8Mpa)和分离罐III(40℃，6Mpa)中进行分离，得泽泻油，称定重量，计算得油率，并测定油中Bm和总甾醇含量。(2)Bm测定方法取泽泻提取物适量于10ml容量瓶中，精本文档来自技高网...

【技术保护点】
泽泻总甾醇提取物，其特征在于其中的泽泻Ｂ单乙酸酯含量不少于３．５％，按分光光度法测定的总甾醇含量以泽泻Ｂ单乙酸酯计不少于５０％，相对密度不得低于０．９７００，折光率应为１．４７５０～１．４９５０。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张建军，张秋菊，齐治家，沈垚，李小云，
申请(专利权)人：浙江万马药业有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]