用于量化糖化的蛋白质的方法和装置制造方法及图纸

本发明专利技术提供了用于量化生物样品中糖化的蛋白质定的方法，所述方法使用固体载体基质，在糖化的和非糖化的蛋白质都结合在该载体上的条件下进行第一结合蛋白质测量，在糖化的蛋白质结合在该载体上而非糖化的蛋白质基本上不结合的条件下进行第二结合蛋白质测量。还提供了包含本发明专利技术方法的诊断装置和试剂盒。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于定量测定生物样品中的糖化的蛋白质的含量的方法，该生物样品适合用于比如糖尿病患者用来自行监测血糖浓度的反射计。
技术介绍
控制糖尿病患者的血糖浓度已表明能降低该疾病的慢性的微血管和神经性的并发症的发病频率和严重程度。血液中糖化的血红蛋白和蛋白质的测量可用来测定血糖浓度在一段较长的时间里被控制得如何。糖化的血红蛋白的生成速度和血液中葡萄糖的浓度直接相关。红血细胞的平均寿命为120天，因此，血红蛋白糖化的百分数的定量测定已经和前2至3个月的平均葡萄糖浓度的量度相关联，该量度是这一时期血糖控制的量度。(见“糖尿病控制和并发症试验研究组，糖尿病的深度治疗对胰岛素依赖性糖尿病的慢性并发症的发病进程的作用(Diabetes Control andComplications Trial ResearchGroup，The effect of intensive treatment of diabetes on the development ofprogression of long-term complications in insulin-dependent diabetesmellitus)”，New England Jourual of Medicine，329，977-986(1993)，和“美国糖尿病协会，糖尿病中高血糖症的试验(American Diabetes Association，Tests ofGlycemia in Diabees”，Diabetes Care，20(增补本1)，S18-S20(1997))。葡萄糖也连接到血液中的非血红蛋白的蛋白质上，如白蛋白。因为白蛋白是含量最丰富的血清蛋白质，它的循环寿命是大约20天，所以，糖化的蛋白质的浓度是在前2至3周中平均葡萄糖浓度的量度。葡萄糖的量度直接给出测量时的葡萄糖浓度。已报道一种固定化的二羟基硼基化合物用来与糖化的蛋白质的碳水化合物的1，2 顺二醇结合，使它们能与非糖化的蛋白质分离。将这一技术用在柱色谱法中用来测定糖化的百分数已有报道(参见Dean的发表于1981年5月26日的美国专利号4,269,605和Rosenthal的发表于1994年2月8日的美国专利号5,284,777)。据说这些方法使用了固定在柱中的琼脂糖珠上的硼酸酯衍生物，以将样品中糖化的蛋白质与非糖化的蛋白质分离。这些方法需要特殊的稀释度并将样品吸移，使得固定在琼脂糖珠上的亲和结合基的容量不被过载。使用固定在琼脂糖珠上的硼酸酯衍生物使该技术不能用于条带。Kricka等的在1992年5月5日发表的美国专利号5,110,745据说叙述了检测样品中的糖化的蛋白质的多种方法，其中使样品与溶液中的确定过量的硼酸酯化合物接触。据说未结合的硼酸酯的测量可通过使其与固定在载体基质上的糖化的分子结合并测量未络合的糖化的分子的量而进行。该方法看来需要许多步骤，包括在进样到固体载体之前先在溶液中进行分开的反应，稀释样品以确保加入生物样品中的结合分子的量是过剩的，进行分开的测试以测定蛋白质糖化的百分数以及多次结合和洗涤步骤。据说在1989年8月29日授予Waguer的美国专利4,861,728中叙述了一种用于测量糖化的血红蛋白的尺量法。据说此方法包括使连接在固体载体上的血红蛋白结合剂与事先已和连接有荧光标记的二羟基硼基化合物混合的经溶解的血液样品接触。据说该载体结合非糖化的血红蛋白和荧光标记的糖化的血红蛋白。据说该荧光标记是通过二羟基硼基化合物结合在糖化的血红蛋白上的。固相与样品分离，总血红蛋白用反射光度学测量，同时糖化的蛋白质用荧光测量。据说这个方法需要将一定量的荧光标记的二羟基硼基试剂加入至样品中，并且在将它从样品中分离之后需要一次洗涤步骤。它还需要两种不同的用来定量的测量方法。在其它测试中(例如参见日本专利号号6,058,936，欧洲专利号455 255和已出版的PCT申请WO96/03657)，据说使用了一种偶联在可检测标记物(如荧光化合物、化学发光化合物、同位素、酶或其它标记物)的硼酸酯衍生物。糖化的和非糖化的蛋白质都用一种通用的亲和结合剂(如抗体)结合在固体载体上。加入硼酸酯一标记物络合物，测量仍旧与固体载体结合的标记物的量。这些种类的方法每种都需要标记糖化的蛋白质的额外步骤。此外，为了定量总的和糖化的蛋白质，这些测试使用了不同的测量方法。已出版的PCT申请WO9840750(于1998年9月17日出版)据说叙述了测定糖化的血红蛋白的百分数的一种方法，其中用固定化的硼酸酯结合样品中糖化的血红蛋白。据说结合的糖苷化的血红蛋白的量与样品中糖苷化的血红蛋白的分数成正比。据说此方法免除了为了测定糖化的百分数而测量非糖化的血红蛋白的需要。然而，看来此方法的结果可能随因糖苷化的蛋白质与硼酸化的载体共温育的时间而发生变化。因此，需要一种简单、快速并有效的方法来定量测定生物样品中的糖苷化的蛋白质的量，该方法不需要稀释样品，只需最少的测定步骤，可以和简单的检测仪器(例如手提反射计)联合使用，并可用于标准的条带测试。专利技术概述本专利技术涉及用于定量测定生物样品中的糖化的蛋白质的方法，使用这些方法的装置，以及包含这些装置的试剂盒。葡萄糖、糖化的蛋白质和糖化的血红蛋白的测量结果可以提供血糖控制的更完整的图像。即时葡萄糖浓度的测量可用来调节用药、膳食或锻炼。对于中期血糖控制的测量，糖化的白蛋白浓度的测量可使人们能够跟踪最近的生活方式改变的影响。对于长期的血糖控制的测量，糖化的血红蛋白浓度的测量使人们能够监测变化的总效果。如果有一种方案一次试验可以得到所有三个结果，这将是很方便的。它可被用于医生的诊室实验室中，这样就可以在病人看病的时候和病人讨论这些结果，或者，可由病人在家里使用。目前，血糖可用手提血糖计进行日常监测且易于使用条带。但是，类似的用于糖化的蛋白质和血红蛋白的试验尚不可得。本专利技术方法提供定量测定生物样品中的糖化的蛋白质的方法。使生物样品在一定条件下与固体载体基质接触，在该条件下糖化的和非糖化的蛋白质都结合到固体载体基质上。加入一定量足以洗去未结合的蛋白质的第一缓冲液。进行第一次结合蛋白质的测量以测定总的(糖化的非糖化的)结合蛋白质。将第二缓冲液加入固体载体基质，将条件改变为糖化的蛋白质被结合而非糖化的蛋白质基本上不被结合，并且加入的量要足以洗去未结合的(非糖化的)蛋白质。进行第二次结合蛋白质的测量。用第一次和第二次结合蛋白质的测量定量测定糖化的蛋白质。本专利技术一方面涉及定量测定样品中的糖化的蛋白质的方法，该方法包括(a)使含有带负电荷的基团和羟基硼基化合物并具有一定的测量区域的固体载体基质与足以覆盖所述测量区域的生物样品接触；(b)使所述固体载体基质与一份足以洗去未结合的蛋白质的第一缓冲液接触，其中所述第一缓冲液具有经过选择以使糖化的和非糖化的蛋白质都结合在所述的固体载体基质上的pH值；(c)利用对所述蛋白质被选性质的测量来量化结合到所述测量区域的蛋白质以得到第一结合蛋白质读数；(d)使所述固体载体基质与一份足以洗去未结合的蛋白质的第二缓冲液接触，其中所述的第二缓冲液具有经过选择以使糖化的蛋白质结合在所述固体载体基质上，而非糖化的蛋白质基本上不结合在所述固体载体基质上的pH值本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种量化样品中糖化的蛋白质的方法，其特征在于，所述方法包括：（ａ）使含有带负电荷的基团和羟基硼基化合物并具有一定的测量区域的固体载体基质与足以覆盖所述测量区域的生物样品接触；（ｂ）使所述固体载体基质与一份足以洗去未结合的蛋白质的第一缓冲液接触，其中所述第一缓冲液具有经过选择以使糖化的和非糖化的蛋白质都结合在所述的固体载体基质上的ｐＨ值；（ｃ）利用对所述蛋白质被选性质的测量来量化结合到所述测量区域的蛋白质以得到第一结合蛋白质读数；（ｄ）使所述固体载体基质与一份足以洗去未结合的蛋白质的第二缓冲液接触，其中所述的第二缓冲液具有经过选择以使糖化的蛋白质结合在所述固体载体基质上，而非糖化的蛋白质基本上不结合在所述固体载体基质上的ｐＨ值；（ｅ）利用对步骤（ｃ）所测性质的测量来量化结合到所述的测量区域的蛋白质以得到第二结合蛋白质读数；（ｆ）用所述第一和第二结合蛋白质读数计算糖化的蛋白质的百分数。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：CE梅尔顿，RP迈克克罗斯基，
申请(专利权)人：斯克利普斯实验室，
类型：发明
国别省市：US[美国]