本发明专利技术提供了高效液相色谱法在测定米力农中有关物质检测或含量测定中的应用。其中，使用的流动相可以是由硼砂缓冲液、甲醇和水组成。所述的硼砂缓冲液的浓度优选为０．０５Ｍ，ｐＨ优选为７．０。硼砂缓冲液、甲醇和水的比例优选为（１－５）∶（２０－５０）∶（５０－８０），更优选为（１－３）∶（２０－４０）∶（６０－７０）。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及高效液相色谱法的应用，更具体的说，涉及高效液相色谱法在测定米力农中有关物质含量中的应用。
技术介绍
米力农化学名为2-甲基-6-氧-1，6-二氢-(3，4-双吡啶)-5-甲腈。按干燥品计算，其中含C12H9N3O不少于98.5％。为类白色或微黄色结晶性粉末，无臭，在水或乙醇中几乎不溶，在稀盐酸中略溶。米力农适用于充血性心力衰竭短期静脉用药。米为农注射液可用适量生理盐水或葡萄液稀释后，先按37.5μg/kg-50μg/kg缓慢静脉注射10分钟(注射过快，可能出现室性早搏)，继续以0.375μg-0.75μg/kg/min静脉滴注，此后根据临床效应调整用量。由于米力农的不良反应主要是由其产品中的杂质而产生，严格控制其中的有关物质含量具有非常重要的意义。虽然现在已经有用薄层色谱法测定米力农中有关物质含量的方法，但是只能控制单个有关物质峰(溶剂峰、乳酸峰除外)的峰面积不大于对照溶液主峰面积的1/5，总和不大于对照品主峰面积的1.5％。如果能够使用一种新的测定方法，使有关物质峰总和不大于对照品主峰面积的0.5％，提高米力农的质量标准，将具有重要的现实意义。
技术实现思路
本专利技术提供了高效液相色谱法在测定米力农中有关物质含量中的应用。在上述的高效液相色谱法中，使用的流动相可以是由硼砂缓冲液、甲醇和水组成。所述的硼砂缓冲液的浓度优选为0.05M，pH优选为7.0。在上述的高效液相色谱法中，所述的硼砂缓冲液、甲醇和水的比例优选为(1-5)∶(20-50)∶(50-80)，更优选为(1-3)∶(20-40)∶(60-70)。高效液相色谱法与薄层色谱法相比，具有下述优点(1)薄层色谱法中采用“滤过”处理供试品溶液欠妥，样品加甲醇超声处理后溶液澄清，加流动相稀释即出现浑浊，须再超声方能完全溶解；本方法采用米力农制剂标准中有关物质项下的流动相直接处理样品，经超声可使样品完全溶解，再用流动相定容，得到澄清透明的溶液；(2)高效液相色谱法测定样品含量，并进行方法学验证，得到了良好的线性关系，且重现性及回收率良好，溶液的日内稳定性良好。附图说明图1是酸破坏性实验高效液相色谱图；图2是碱破坏性实验高效液相色谱图；图3是热破坏性实验高效液相色谱图；图4是氧化破坏性实验高效液相色谱图。具体实施例方式下面以实施例进一步解释本专利技术，但是本专利技术的保护范围并不限于这些实施例。实施例1色谱条件的建立仪器高效液相色谱仪(美国Waters)，配515泵，2487检测器，化学工作站。试剂米力农和对照品(含量为99.7％)；甲醇；色谱纯；水；纯水；硼砂；硼酸。色谱柱Hypersil BDS C18柱(250mm×4.6mm，5μm)； 流动相0.05mol·L-1硼砂缓冲液(pH＝7.0)∶甲醇∶水＝2∶30∶70；流速1.0ml·min-1；检测波长254nm；进样量20μl(定量管)。理论板数按米力农峰计算不低于3000。线性范围取105℃干燥至恒重的米力农对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释成1ml含0.5mg的溶液作为标准储备液。精密量取标准储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5m1分别置7个10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，分别进样20μl，记录色谱图，以米力农浓度(c，mg·ml-1)为横坐标，对应峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为Y＝51821577.14286X+80825.57143，r＝0.9999(n＝7)。结果表明，米力农在0.025～0.175mg·ml-1范围内，峰面积与浓度线性关系良好。回收率试验精密量取己知含量的米力农样品30mg(3份)，分别置3个100ml量瓶中，再分别加入对照品10、20、30mg，加适量流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；分别取5ml置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，分别测定，计算回收率，得平均回收率为100.5％，RSD＝0.71％，说明准确度良好，见表1。表1 精密度试验照前述色谱条件，取浓度为0.1mg·ml-1的标准溶液重复进样6次，计算RSD为0.11％，结果表明其精密度良好。样品含量测定精密量取样品50mg，置100ml量瓶中，加流动相适量，超声使溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；另取经105℃干燥至恒重的米力农对照品适量，加流动相制成每1ml中含0.1mg的溶液，同法测定，以外标法按峰面积计算，即得。3批样品测定结果见表2。表2 样品液稳定性考察取供试品溶液1份，分别在0，2，4，6，8，10h进行测定，记录峰面积，计算得RSD＝0.75％，表明米力农的流动相溶液稳定性较好，日内误差较小。检测限测定取2.5μg·ml-1的米力农对照品溶液，用稀释法测其检测限(S/N＝2)，按2倍信噪比计算，在本色谱系统条件下，检测限为2.5×10-5mg·ml-1。样品有关物质测定精密量取米力农适量，用流动相分别制成0.5mg·ml-1的供试品溶液和2.5μg·ml-1的对照溶液。在前述色谱条件下，取对照溶液20μl注入高效液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰约为满量程的20％。精密量取供试品溶液20μl进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液如显有关物质峰，量取各有关物质峰面积总和，不得大于对照溶液主峰面积(0.5％)。3批样品(031201，031202，031203)中均检出多种有关物质，有关物质的总量均小于0.5％。实施例2高效液相色谱法的稳定性实验高效液相色谱法与薄层色谱法相比，具有灵敏度高、准确性好的优点，对于有关物质不但可以定性，而且可以定量，可以更好的控制米力农的质量。有关该品具体的有关物质在文献中未见具体报道，故设计了酸、碱、热、氧化破坏等试验，以考察本方法系统的可靠性、稳定性。空白溶剂的干扰取流动相适量，滤过，取过滤液依法测定，溶剂对米力农有关物质测定无干扰。酸破坏性实验取米力农约20mg，加0.1mol/L盐酸溶液10ml，水浴加热回流20min，冷却，加流动相至50ml，摇匀，滤过，取过滤液依法检查，高效液相色谱图见图1。结果表明酸对本方法无影响。碱破坏性试验取米力农约20mg，加0.1mol/L氢氧化钠溶液10ml，水浴加热回流20min，冷却，加流动相至50ml，摇匀，滤过，取过滤液依法检查，高效液相色谱图见图2。结果表明碱对本方法无影响。热破坏性试验取米力农约20mg，加水10ml，加热回流30min，冷却，加流动相至50ml，摇匀，滤过，取过滤液依法检查，高效液相色谱图见图3。结果表明高温对本方法无影响。氧化破坏件试验取米力农约20mg，加10％H2O2溶液10ml，水浴加热回流20min，冷却，加流动相至50ml，摇匀，滤过，取过滤液依法检查，高效液相色谱图见图4。结果表明氧化剂对本方法无影响。结论由附图1～4可见，本法最低至少可检查0.01μg/ml的米力农；米力农峰可与破坏后的产物峰分开，分离度符合要求。对比例取米力农三批，分别用高效液相色谱法与薄层色谱法测定，结果见表3。表3 可见高效液相色谱法与薄层色谱法相比，具本文档来自技高网...
【技术保护点】
高效液相色谱法在测定米力农中有关物质检测或含量测定中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵志全，
申请(专利权)人：鲁南制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。