通过毛细管电泳分离蛋白质的方法和毛细管电泳用的缓冲组合物技术

本发明专利技术涉及一种碱性ｐＨ、自由溶液毛细管电泳分析含蛋白质组分的生物样品的方法。所述方法其特征在于它包括至少一个步骤，其中将所述样品加入到含有分析缓冲液的毛细管中，所述分析缓冲液还含有至少一种添加剂，所述添加剂能够与一种或多种蛋白质组分疏水相互作用并且能够使所述蛋白质组分具有１个或多个负电荷并且能够改进其电泳迁移率。本发明专利技术还涉及用于进行这种方法的分析缓冲液组合物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种通过毛细管电泳分离蛋白质和肽的方法和用于这种分离的含一种添加剂的缓冲组合物。为了诊断目的而分析生物液如血清中的蛋白质，尤其是经常通过电泳，或者凝胶电泳或者毛细管电泳，分离蛋白质。毛细管电泳的一个优点在于分析时仅需要微量的生物液。而且，由于可以使用高电压，并且在分离期间样品不用加热到太高温度，因此使用该技术可以非常快速地进行分离。为了分离血液蛋白，常用碱性缓冲液进行毛细管电泳。通常，获得的蛋白质图谱含有5或6种成分，即白蛋白成分、α1和α2球蛋白成分、β球蛋白成分或β1和β2球蛋白成分、和γ球蛋白成分。可以借助于例如美国再授权专利US-Re-36011或欧洲专利EP-A-0518475中所述的那些缓冲体系和技术使用毛细管电泳进行这种分离。然而，时至今日，通过毛细管电泳分离白蛋白和α1球蛋白还不太令人满意。本申请人现已证实，提高分离，尤其是白蛋白/α1球蛋白分离，可以通过将一种添加剂用于所述缓冲体系中实现，所述添加剂含有pH大于9的阴离子极和疏水部分。这种添加剂能够与一种或多种蛋白质组分疏水相互作用并且还能够使所述蛋白质组分具有1个或多个负电荷并且能够改进电泳迁移率。因此，本专利技术涉及一种碱性pH、自由溶液毛细管电泳分析含蛋白质组分的样品的方法，其中将所述样品加入到含有缓冲体系的毛细管中，所述缓冲体系还含有至少一种添加剂，所述添加剂能够与一种或多种蛋白质组分疏水相互作用并且能够使所述蛋白质组分具有1个或多个负电荷并且能够改进电泳迁移率。该步骤之后通过迁移分离蛋白质组分并测定这些组分。本专利技术还涉及一种在缓冲体系中电泳分离含有白蛋白和以下成分α1、α2、β(或β1和β2)、和γ球蛋白的样品中的蛋白质组分的方法，其中所述缓冲体系含有另外一种添加剂，所述添加剂至少能够与所述白蛋白疏水相互作用。本专利技术还涉及一种通过碱性pH、自由溶液毛细管电泳进行电泳分离液体样品中的蛋白质组分的方法，在该方法中将含有所述组分的样品通过含缓冲体系的毛细管，所述缓冲体系还含有至少一种添加剂，所述添加剂是一种含有pH大于9的阴离子极和疏水部分的化合物。能够用作本专利技术毛细管电泳缓冲体系中的添加剂的化合物能够与白蛋白疏水相互作用；这些化合物例如可以是阴离子表面活性剂如用于MECC(胶束动电毛细管色谱法)中的那些，但是浓度低于其临界胶束浓度。在本专利技术中，我们以自由溶液CE使用这些化合物通过白蛋白的疏水残基与这些化合物的疏水部分之间的疏水相互作用所述化合物使白蛋白带负电荷，因此与其它蛋白质的迁移率相比白蛋白的迁移率降低。结果提高了从α1成分中分离白蛋白。最后，本专利技术涉及用于毛细管电泳的电解组合物，所述组合物是在适宜载体中含有至少一种缓冲液和一种能够与白蛋白疏水相互作用的添加剂。从这些实施例中将清楚地看到，使用本专利技术的添加剂使得白蛋白和α1球蛋白成分的分离提高。与常规缓冲液相比还提高了这两种成分之间的基线返回。由参照附图和实施例的以下详细描述，本专利技术的其它特征和优点将显而易见。附图说明图1显示了使用甘氨酸缓冲液通过毛细管电泳分析正常人血清的电泳图谱。图2显示了使用含有本专利技术添加剂的相同甘氨酸缓冲液通过毛细管电泳分析正常人血清的电泳图谱。图3显示了使用硼酸盐缓冲液通过毛细管电泳分析正常人血清的电泳图谱。图4显示了使用含有本专利技术添加剂的相同硼酸盐缓冲液通过毛细管电泳分析正常人血清的电泳图谱。图5显示了通过琼脂糖凝胶电泳获得的正常人血清的电泳图谱。图6显示了使用甘氨酸缓冲液通过毛细管电泳获得的来自急性炎性综合症患者的血清的电泳图谱。图7显示了使用含有本专利技术添加剂的甘氨酸缓冲液通过毛细管电泳获得的来自急性炎性综合症患者的血清的电泳图谱。图8显示了使用硼酸盐缓冲液通过毛细管电泳获得的来自急性炎性综合症患者的血清的电泳图谱。图9显示了使用含有本专利技术添加剂的硼酸盐缓冲液通过毛细管电泳获得的来自急性炎性综合症患者的血清的电泳图谱。图10显示了通过琼脂糖凝胶电泳获得的来自急性炎性综合症患者的血清的电泳图谱。图11显示了相对于加入到硼酸盐缓冲液的不同碳链长度的烷基磺酸盐的α1球蛋白成分和白蛋白成分的迁移率。可以引用的能够与白蛋白的疏水部分相互作用的本专利技术缓冲液的添加剂是含有pH大于9的阴离子极和疏水部分的化合物。所述疏水部分可以由至少一个烷基链组成，它可以经过支化或者可以不经支化，含有4-22个碳原子，尤其是4-20个碳原子，和/或至少1-10个环的组合，所述环可以是芳香环或者可以不是芳香环。优选使用1-4个环的组合。本领域技术人员将容易地理解，该疏水部分例如可以含有基本上不改变其疏水性能的残基或官能团，例如一个或多个羟基或胺官能团。所述阴离子极可以由来自以下的一个或多个化学基团或官能团构成磺酸盐、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、碳酸盐。尤其可以引用以下的胆酸盐型阴离子表面活性剂、C6-C22烷基单、二或三磺酸盐、十四碳烯磺酸盐、萘磺酸盐、C6-C22烷基单、二或三羧酸盐、萘羧酸盐、C6-C22烷基羧基硫酸盐、C4-C14烷基硫酸盐、苯磺酸盐、C4-C14烷基碳酸盐、苯甲酸盐和两性离子生物缓冲液。上述二和三羧酸盐、二和三磺酸盐与在羧基磺酸盐因此是一或多个羧酸根或磺酸根官能团与C6-C22烷基链的组合形式。作为非限制性实例，可以列举含有3个羧酸根官能团和一个C19链的1，2，3-十九烷三羧酸、含有一个羧酸根官能团一个磺酸根官能团和一个C18链的2-甲基-2-磺基十八烷酸以及含有2个羧酸根官能团和一个C12链的1，12-十二烷二羧酸。更确切地，可以列举选自C6-C22烷基单、二或三烷基磺酸盐的C6-C10烷基磺酸盐与选自C6-C22烷基单、二或三羧酸盐的C6-C14烷基羧酸盐。在上面的名称中，烷基残基优选为直链。可以引用作为添加剂的具体的两性离子生物缓冲液是CAPS(3-环己基氨基-1-丙磺酸)和CHES(2-(N-环己基氨基)乙磺酸)，但是也可以将其它两性离子生物缓冲液用于本专利技术上下文中。按照本专利技术，其它两性离子生物缓冲液也适用于本专利技术。氨基酸缓冲液却不构成本专利技术的一部分。上面引用的添加剂中优选是C6-C10烷基磺酸盐，并且C6-C10烷基磺酸盐中优选辛磺酸盐。这些化合物本身为已知并且可以商购获得。它们可以是酸或盐形式。术语“本专利技术的样品”意思是待分析的生物样品，例如用适宜的稀释溶液或缓冲体系稀释过，或者是纯的。分析用的样品可以是来自健康人或患者的任何生物液体。人生物液可以是正常或异常血清，并且还可以是溶血的血清、血浆、尿、或者脑脊液。除了人生物样品之外，还可以分析动物源的样品。样品也可以是合成蛋白质，并且例如本专利技术的方法计划用于生产对照。本专利技术的添加剂具体用于分析血清，并用于分离来自人的样品中的血液蛋白。在血样中，待分离的血液蛋白主要是白蛋白和α1、α2、β(或β1和β2)、和γ球蛋白成分。所述缓冲体系可以是适用于所需分离的任何已知缓冲体系，用于一般电泳并且具体地说是毛细管电泳。可以引用的实例是硼酸盐、磷酸盐和碳酸盐缓冲液、以氨基酸为基础的缓冲液和已知为生物缓冲液的缓冲液。可以引用的生物缓冲液的实例是如下已知的那些双-TRIS(2-二氨基-2-羟基甲基-1，3-丙二醇)、ADA(N--2-亚氨二醋酸)、ACES(2--2-氨基乙磺酸)、PI本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种碱性ｐＨ、自由溶液毛细管电泳分析含蛋白质组分的样品的方法，其特征在于它包括至少一个步骤，其中将所述样品加入到含有分析缓冲体系的毛细管中，所述分析缓冲体系还含有至少一种添加剂，所述添加剂能够与一种或多种蛋白质组分疏水相互作用并且能够使所述蛋白质组分具有１个或多个负电荷并且能够改进电泳迁移率。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：G诺瓦德耶，F罗伯特，
申请(专利权)人：莎碧亚公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]