一种高效毛细管电泳分离3-羟基戊二酸单酯对映异构体的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效毛细管电泳分离3-羟基戊二酸单酯对映异构体的方法，包括如下步骤：1）配置3-羟基戊二酸单酯样品溶液；2）配制pH为5~7的缓冲溶液，在所述的缓冲溶液中加入手性选择剂，超声脱气，用微孔滤膜过滤，过滤完毕继续超声脱气，所得溶液为电泳缓冲液；3）将步骤1）配制的3-羟基戊二酸单酯样品溶液在毛细管电泳条件下，使用步骤2）制得的电泳缓冲液使(R)-3-羟基戊二酸单酯和(S)-3-羟基戊二酸单酯对映体实现基线分离。本发明专利技术通过在高效毛细管电泳缓冲液中加入手性选择剂，构建合适的手性选择环境，利用其与对映异构体之间的作用差异进行分离，具有分离效果好、灵敏度高、准确性好等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于对映体的拆分和检测

技术介绍
建立一种快速且可靠的分离与检测方法是制备高纯度手性物质的前提。目前，常用的手性化合物的分离分析方法有高效液相色谱(或气相色谱)_手性柱分离法、酶(也包括微生物细胞)拆分法、化学衍生与色谱分离相结合等，但这些方法的成本较高、适用性和效率差、步骤繁琐，而且不易实现分析手段的自动化。相比之下，高效毛细管电泳具有效率高、 速度快、所需样品和试剂少、检测模式多且可以和其他技术联用、试剂廉价易得、能够实现自动化的优点，近年来广泛应用于各种手性药物及中间体、以及多肽等样品的分离分析。此夕卜，相比常规的高效液相色谱等分离方法，高效毛细管电泳具有柱效高、有机溶剂用量少、环境污染小、能多次循环使用等特点，与我国当前大力倡导的节能减排和循环经济的发展方式相符合。⑷-和⑶-3-羟基戊二酸单酯(包括甲酯、乙酯等)是制备阿托伐他汀(Atorvastatin )、瑞舒伐他汀(Rosuvastatin )等他汀类药物以及减肥健美类药物左旋肉碱(L-carnitine)的关键中间体。目前，无论采用化学合成还是生物合成法，制备得到的都是0 )-和(5)-3-羟基戊二酸单酯的对映体混合产物。而且，研究人员运用了包括高效液相色谱-手性柱等分离手段在内的诸多分离分析方法，均不能对该对映体混合物进行有效分离。因此，迄今为止，无法对0 )-和(5)-3-羟基戊二酸单酯的光学纯度进行有效的分析。通过在高效毛细管电泳缓冲液中加入手性选择剂，构建合适的手性选择环境，利用其与对映异构体之间的作用差异进行分离。目前，国内外文献还没有应用毛细管电泳分离0 )-和C )-3-羟基戊二酸单酯、以及分离检测其光学纯度的相关报道，本专利技术利用该技术建立了一种分离效果好、灵敏度高、准确性好的分析方法应用于0 )-和C )-3-羟基戊二酸单酯的分离分析。 专利技术的内容 本专利技术的目的在于提供了，通过在高效毛细管电泳缓冲液中加入手性选择剂，构建合适的手性选择环境，利用其与对映异构体之间的作用差异进行分离，具有分离效果好、灵敏度高、准确性好等特点。为达到上述目的，本专利技术的技术方案是 ，包括如下步骤1)用二次重蒸水配置浓度为O. Γ1. O mg/mL的3-羟基戊二酸单酯样品溶液；2)配制pH为5^7的缓冲溶液，在所述的缓冲溶液中加入浓度为(Γ50 mmol/L的手性选择剂，超声脱气2(T40min，用O. 45 μ m微孔滤膜过滤，过滤完毕继续超声脱气l(T20min所得溶液为电泳缓冲液；3)使用高效毛细管电泳仪将步骤I)配制的3-羟基戊二酸单酯样品溶液在毛细管电泳条件下，使用步骤2)制得的电泳缓冲液使0 )-3-羟基戊二酸单酯和C )-3-羟基戊二酸单酯对映体实现基线分离。所述的3-羟基戊二酸单酯采用3-羟基戊二酸甲酯、3-羟基戊二酸乙酯、3-羟基戊二酸丙酯中的一种。所述的步骤2)中的缓冲溶液为磷酸盐缓冲液。所述的手性选择剂采用β -环糊精、羟甲基-β -环糊精、羟乙基-β -环糊精、羟丙基-β -环糊精中的一种。所述的毛细管电泳采用高效毛细管电泳仪，其电泳条件为分离电压为1(T30 kv,柱温2(T30°C，检测波长为190 250 nm，压力进样为50 mbaX4S。本专利技术的有益效果是通过使用本专利技术提供的一种高效毛细管电泳分离3-羟 基戊二酸单酯对映异构体的方法，通过在高效毛细管电泳缓冲液中加入手性选择剂，构建合适的手性选择环境，利用其与对映异构体之间的作用差异进行分离，解决了高效液相色谱-手性柱法等传统分离方法难以有效分离0 )-和C )-3-羟基戊二酸单酯对映体的难题，从而能够对0 )-和C )-3-羟基戊二酸单酯的样品的光学纯度进行正确测定。该方法具有分离效果好、灵敏度高、准确性好、无污染、成本低以及易于自动化等优点。附图说明图I是本专利技术实施例I中0 )-和(5)-3-羟基戊二酸乙酯样品的高效毛细管电泳分离具体实施例方式实施例I 下面结合具体详细实例对本专利技术所采用的分离方法及其带来的技术效果作进一步的说明，但本专利技术的保护范围并不仅限于此。I)用二次重蒸水配置浓度为O. 5 mg/mL的3_羟基戊二酸乙酯样品溶液；2)配制pH为5. O的磷酸盐缓冲溶液，在所述的磷酸盐缓冲溶液中加入浓度为30 mmol/L的β -环糊精作为手性选择剂，超声脱气30min，用O. 45 μ m微孔滤膜过滤，过滤完毕继续超声脱气IOmin所得溶液为电泳缓冲液；3)将步骤I)配制的3-羟基戊二酸乙酯样品溶液在毛细管电泳条件下，(所用仪器为G1600AX型高效毛细管电泳仪(美国Agilent公司))，使用步骤2)制得的电泳缓冲液使(K)- 3-羟基戊二酸乙酯和C )-3-羟基戊二酸乙酯对映体实现基线分离，所述的毛细管电泳条件为分离电压为20 kV，柱温25°C，检测波长为214nm，压力进样为50 mbaX4S。实验结果如图I所示，⑵-和⑶_3_羟基戊二酸乙酯的保留时间分别为16. 20和16. 80min，完全达到了基线分离。通过使用本实施例的一种高效毛细管电泳分离3-羟基戊二酸乙酯对映异构体的方法，在高效毛细管电泳缓冲液中加入手性选择剂，构建合适的手性选择环境，利用其与对映异构体之间的作用差异进行分离，解决了高效液相色谱-手性柱法等传统分离方法难以有效分离0 )-和C )-3-羟基戊二酸乙酯对映体的难题，从而能够对0 )-和C )-3-羟基戊二酸乙酯的样品的光学纯度进行正确测定。该方法具有分离效果好、灵敏度高、准确性好、无污染、成本低以及易于自动化等优点。 实施例2 I)用二次重蒸水配置浓度为I. Omg/mL的3-羟基戊二酸乙酯样品溶液；2)配制pH为6. O的磷酸盐缓冲溶液，在所述的缓冲溶液中加入浓度为20 mmol/L的β -环糊精作为手性选择剂，超声脱气40min，用O. 45 μ m微孔滤膜 过滤，过滤完毕继续超声脱气20min所得溶液为电泳缓冲液；3)将步骤I)配制的3-羟基戊二酸乙酯样品溶液在步骤3)所述的毛细管电泳条件下，(所用仪器为G1600AX型高效毛细管电泳仪(美国Agilent公司)，使用步骤2)制得的电泳缓冲液使0 )- 3-羟基戊二酸乙酯和C )-3-羟基戊二酸乙酯对映体实现基线分离，分离度1 > 1.5以上。所述的毛细管电泳条件为分离电压为25 kV，柱温30°C，检测波长为214nm，压力进样为50 mbaX4S。通过使用本实施例的一种高效毛细管电泳分离3-羟基戊二酸乙酯对映异构体的方法，在高效毛细管电泳缓冲液中加入手性选择剂，构建合适的手性选择环境，利用其与对映异构体之间的作用差异进行分离，解决了高效液相色谱-手性柱法等传统分离方法难以有效分离(/ )_和C )-3-羟基戊二酸乙酯对映体的难题，从而能够对0 )-和C )-3-羟基戊二酸乙酯的样品的光学纯度进行正确测定。该方法具有分离效果好、灵敏度高、准确性好、无污染、成本低以及易于自动化等优点。实施例3 I)用二次重蒸水配置浓度为O. 2mg/mL的3-羟基戊二酸甲酯样品溶液；2)配制pH为6.O的磷酸盐缓冲溶液，在所述的缓冲溶液中加入浓度为30mmol/L的羟乙基-β -环糊精作为手性选择剂，超声脱气20min本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效毛细管电泳分离3？羟基戊二酸单酯对映异构体的方法，其特征在于包括如下步骤：1）用二次重蒸水配置浓度为0.1~1.0？mg/mL的3？羟基戊二酸单酯样品溶液；2）配制pH为5~7的缓冲溶液，在所述的缓冲溶液中加入浓度为0~50？mmol/L的手性选择剂，超声脱气20~40min，用0.45μm微孔滤膜过滤，过滤完毕继续超声脱气10~20min，所得溶液为电泳缓冲液；3）将步骤1）配制的3？羟基戊二酸单酯样品溶液在毛细管电泳条件下，使用步骤2）制得的电泳缓冲液使(R)？3？羟基戊二酸单酯和(S)？3？羟基戊二酸单酯对映体实现基线分离。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：董华平，徐新，胡六江，占林军，
申请(专利权)人：绍兴文理学院，
类型：发明
国别省市：