联合检测特异性IgM、IgG抗体的胶体金层析条及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种联合检测特异性ＩｇＭ、ＩｇＧ抗体的胶体金层析条及其制备技术。该层析条以胶体金作为标记物，在ＰＶＣ背板上一端顺次相互搭接地贴附有样品垫、复合物垫、硝基纤维素膜，另一端贴附有吸收垫；所述复合物垫为涂覆有抗原－胶体金复合物的玻璃纤维素膜，其特征在于：所述硝基纤维素膜上包含三条包被线，分别包被有抗ＩｇＭ抗体、特异性抗原、与抗原相应的抗体。本发明专利技术的层析条采用免疫捕获法原理测定ＩｇＭ抗体，双抗原夹心法原理测定ＩｇＧ抗体，通过一次操作即可联合检测出特异性ＩｇＭ、ＩｇＧ抗体，简化了操作过程，且检测结果的总体符合率较高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用免疫测定法检测特异性IgM、IgG抗体的层析条及其制备技术，具体地说，涉及一种借助胶体金标记显色的免疫层析反应对特异性IgM、IgG抗体进行联合检测的层析条及其制备方法。
技术介绍
免疫球蛋白M(Immunoglobulin M，IgM)和免疫球蛋白G(Immunoglobulin G，IgG)是人或动物体内最重要的两种抗体。一种抗原(细菌或病毒等)进入机体后，最早出现的免疫球蛋白是IgM抗体，之后出现IgG抗体。尽管在某些情况下还可能出现IgA抗体，由于其临床意义同IgG基本相同，并且IgA含量很低，在临床检测中的实际意义不大，因而在临床检测中一般不予以区分。通过检测机体内IgM、IgG抗体的存在，可以诊断人或动物对特定抗原的免疫反应状态。血清内若检测出特异性IgM抗体，表明有近期感染的发生，但IgM抗体半衰期较短，IgM的检测阴性并不能证明机体未受到感染，还需要检测半衰期较长，含量最高的IgG抗体，以明确诊断。目前单独检测特异性IgM或IgG抗体的方法很多，比如ELISA法、双抗原夹心法、胶体金免疫层析法等，但还未有通过一次操作过程即可联合检测特异性IgM、IgG抗体的方法。虽然单独检测IgM和IgG抗体后，再综合分析检测结果对疾病的诊断并无影响，但操作过程繁琐，检测不够方便快捷。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种胶体金层析条，通过一次操作过程即可联合检测特异性IgM、IgG抗体，从而简化操作过程，实现快速检测的目的。本专利技术的技术方案如下一种联合检测特异性IgM、IgG抗体的胶体金层析条，所述层析条在PVC背板上一端顺次相互搭接地贴附有样品垫、复合物垫、硝基纤维素膜，另一端贴附有吸收垫；所述复合物垫为涂覆有抗原-胶体金复合物的玻璃纤维素膜，其特征在于所述硝基纤维素膜上包含三条包被线，分别包被有抗IgM抗体、特异性抗原、与抗原相应的抗体。本专利技术还提供了所述胶体金层析条的制备方法，包括以下步骤(1)制备特异性抗原、与抗原相应的抗体、抗IgM抗体采用常规制法制备特异性抗原、与已知抗原相应的动物抗体、抗IgM抗体，浓度分别为1mg/ml～4mg/ml、3mg/ml～6mg/ml、0.5mg/ml～4mg/ml；(2)制备抗原-胶体金复合物采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，在金溶胶中按照20μg/ml～80μg/ml比例加入纯化的已知抗原，经封闭、离心处理后，取沉淀稀释至A530值为0.5～3，备用；(3)取硝基纤维素膜贴在PVC背板中间，将抗IgM抗体、特异性抗原、与抗原相应的抗体分开包被在硝基纤维素膜上；将抗原胶体金复合物涂覆在玻璃纤维素膜上制备复合物垫；(4)在PVC背板上一端顺次相互搭接地贴附有杆品垫、复合物垫、硝基纤维素膜，另一端贴附吸收垫；(5)将PVC背板及其贴附的材料切成适宜宽度的层析条。所制备的抗IgM抗体可以为单克隆或多克隆抗体。所述抗原-胶体金复合物可以喷涂、敷涂或浸泡的方式涂覆在玻璃纤维素膜上。所述硝基纤维素膜在包被抗IgM抗体、特异性抗原、与抗原相应的抗体后可以进行封闭处理，以减少非特异性反应。所述层析条在制备完成后可以装入塑料板卡内。本专利技术的胶体金层析条，以胶体金作为标记物，采用免疫捕获法原理测定IgM抗体，双抗原夹心法原理测定IgG抗体，通过一次操作即可联合检测出特异性IgM、IgG抗体，简化了操作过程，且检测结果的总体符合率较高。具体实施例方式实施例1检测人巨细胞病毒(HCMV)IgM、IgG抗体的胶体金层析条的制备方法具体制备过程如下(1)采用基因重组法制备浓度为3mg/ml的HCMV抗原，动物免疫法制备浓度为5mg/ml的兔抗HCMV抗体，单克隆抗体制备法制备浓度为2mg/ml的鼠抗人IgM单克隆抗体，备用。(2)制备抗原-胶体金的复合物采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，在金溶胶中按照80μg/ml比例加入纯化的HCMV抗原，经封闭、离心处理后，取沉淀稀释至A530值2.0，备用；(3)包被鼠抗人IgM单克隆抗体、HCMV抗原、兔抗HCMV抗体取硝基纤维素膜贴于PVC背板中间，设定划膜机涂覆参数为1μl/cm。取5mg/ml的兔抗HCMV抗体1.5ml、3mg/ml的HCMV抗原1.5ml、2mg/ml的鼠抗人lgM单克隆抗体1.5ml，分别接到划膜机的A、B、C管道接口。将贴有硝基纤维素膜的PVC背板置于划膜机的往复运动平台上。开启划膜机，在硝基纤维素膜上涂覆兔抗HCMV抗体、HCMV抗原、鼠抗人IgM单克隆抗体，在37℃干燥2小时。将背板置于1％聚乙二醇溶液中浸泡30分钟，晾干，37℃干燥2小时。(4)将抗原-胶体金的复合物涂覆在玻璃纤维素膜上设定划膜机喷涂参数为25.0μl/cm，将抗原-胶体金复合物连接到划膜机的D管道接口。取30cm×12cm的玻璃纤维素膜放置往复运动平台上。开启划膜机，在玻璃纤维素膜上喷涂抗原-胶体金复合物制成复合物垫，37℃干燥2小时。(5)在PVC背板上一端顺次相互搭接地贴上复合物垫和样品垫，另一端贴上吸收垫，将PVC背板及其贴附的材料切成4mm宽层析条。将层析条放入塑料板卡内，用压卡机压实。当加入被检测样品后，通过层析作用，样品和抗原-胶体金复合物向吸收垫一端移动。当样品通过鼠抗人IgM单克隆抗体包被线时，其中的IgM抗体与鼠抗人IgM单克隆抗体结合，如果IgM抗体中含有针对特异性抗原的IgM抗体，则抗原-胶体金复合物与之结合，在该处显示一条紫红色条带。如果被检测样品中含有针对特异性抗原的特异性IgG抗体时，当其移动到特异性抗原包被线时，抗体既与特异性抗原结合，也与抗原-胶体金复合物结合，在此处显示一条紫红色条带。抗原-胶体金复合物移动到与其相应抗体的包被线处，与抗体结合，显示一条紫红色条带。在抗IgM抗体包被处显示紫红色条带，表明被检测样品中含有针对特异性抗原的IgM抗体。在抗原包被处显示紫红色条带，表明被检测样品中含有针对特异性抗原的IgG。在少数情况下可能含有IgA，但其临床意义同IgG基本相同，在临床检测中可以不必区分IgG或IgA。如果在抗原包被处和抗IgM抗体包被处同时显示紫红色条带，仅判定为被检测样品中含有针对特异性抗原的IgM抗体。如果在抗原包被处、抗IgM抗体包被处没有紫红色条带，判定为被检测样品中不含有特异性IgG、IgM。在针对特异性抗原的抗体包被处显示紫红色条带，表明该检测系统的检测结果有效；如果该处没有显示紫红色条带，表明该检测系统失效，检测结果无效。实施例2检测人巨细胞病毒(HCMV)IgM、IgG抗体的检测结果应用制备的胶体金层析条对临床诊断明确的抗HCMV IgG阳性血清383份和阴性血清1979份进行了检测，并与间接法ELISA试剂单独检测抗HCMV IgG的结果进行了对比，结果分别示于表1和表2。表1胶体金层析条对抗HCMV IgG临床血清的检测结果 表2胶体金与ELISA检测抗HCMV IgM的结果比较 由表1数据可计算得到约登指数为362/(362+21)+1977/(2+1977)-1＝0.94，说明检测结果与样品真实情况的总体符合率很高。由表2数据可计算得到本专利技术检测结果与ELISA检测结果的总体符合率为(362+1990)/2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种联合检测特异性ＩｇＭ、ＩｇＧ抗体的胶体金层析条，所述层析条在ＰＶＣ背板上一端顺次相互搭接地贴附有样品垫、复合物垫、硝基纤维素膜，另一端贴附有吸收垫；所述复合物垫为涂覆有抗原－胶体金复合物的玻璃纤维素膜，其特征在于：所述硝基纤维素膜上包含三条包被线，分别包被有抗ＩｇＭ抗体、特异性抗原、与抗原相应的抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王健，陈廷友，王志新，翟立伟，孔祥菊，毕大伟，张秀杰，
申请(专利权)人：北京英诺特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]