抗蛋白表达标签抗体或抗体复合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了抗蛋白表达标签抗体或抗体复合物及其制备方法和应用。通过基因工程或化学交联的方式在待检验抗体对应的抗原后部或中部和前部添加蛋白表达标签，使得抗体或抗体复合物可以与该标签结合，增加了抗体或抗体复合物的应用范围，一次制备即可应用于多种抗原的检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种抗体或抗体复合物，尤其涉及一种抗蛋白表达标签抗体或抗体复合物及其制备方法和应用。
技术介绍
目前自身免疫性肝病(autoimmune hepatic diseases，AIHD)是指引起肝脏损害的直接原因为自身免疫反应，而非病毒感染的一组肝脏疾病，主要包括自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)、原发性胆汁性肝硬化(primarybiliary cirrhosis，PBC)和原发性硬化性胆管炎(primary sclerosingcholangitis，PSC)。临床都表现为瘙痒，黄疸，肝肿大，腹痛等共同症状。我国病毒性肝炎患者众多，但相当一部分原因不明的肝病患者都可能是自身免疫性肝病。我国自身免疫性肝病的发病率有逐年增高的趋势，慢性肝病患者中有相当比例的自身免疫性肝病。同时，一些病毒型肝炎患者，也会合并自身免疫性肝病。这类疾病的治疗方案与病毒性肝炎及其他肝胆疾病完全不同，而且早期诊治的效果尤其好，因此在肝病的诊断中，自身免疫性肝炎的诊断越来越重要。肝肾微粒体抗原-1(LKM-1)抗体、抗可溶性肝抗原(SLA)抗体、抗非唾液酸糖(ASGPR)蛋白抗体是AIH的主要特征，抗体阳性率可达90％。线粒体抗原抗体(M2)是PBC的特征性抗体，抗体特异性高达97％。它们都可以用酶联免疫方法的诊断试剂盒检测。抗原和抗体之间的高度特异性结合的特性，使得它们成为理想的临床诊断试剂。据统计，现有临床诊断中，50％的检测项目是通过抗体或抗原的检测实现的。临床诊断试剂盒一般都包括标准品或阴性和阳性对照品，定量自身抗体诊断试剂盒的标准品往往来自于抗体滴度较高的阳性血清的系列稀释品，或直接使用不同滴度的病人血清。但用病人血清做标准品有很多缺点1)很难获得具有高滴度，高特异性的病人血清；2)个体之间的抗体滴度和特异性差异性较大，难以标准化；3)由于血清是多抗，具有不同的抗体类型、亲和性和特异性，限制了它的应用；4)价格昂贵，由于资源的限制，可能不能保证标准品的产量。因此，开发生产标准品的方法，用以检测特异性抗体的水平具有重要意义。人鼠嵌合特异性抗体可以用于人血清抗体检测的标准品，用于制备标准曲线(美国专利US6,015,662)，但该方法具有很大的局限性，每次构建的抗体只包括一种抗体的恒定区，检测其他抗体类型需要重新构建，这样相对比较费时费力。交联抗体也可以用于人血清抗体检测的标准品，非人的非IgM和人的IgM交联(美国专利US 5,478,753)，用作诊断IgM血清试剂盒标准品，交联抗体非人的非IgM对检测抗原特异，人的IgM可以和标记二抗结合，这些试剂盒很好的解决了传染性疾病在急性感染阶段IgM阳性血清来源的困难，使标准品的大规模生产成为可能。其它的交联还包括抗体的一条重链和轻链通过二硫键和IgG的重链和轻链或Fc交联(美国专利US 5,523,210)，构建的双价抗体可用于酶等化学分析；两个对不同抗原特异的抗体通过交联剂交联，(美国专利US4,433,059)，异源交联抗体可用于凝集分析。但是以上用于标准品的嵌合抗体和交联抗体，只针对某一种特异性抗原，检测其他类型抗体时，需重新构建和交联，无通用性，比较费时费力。自身免疫性抗原的制备以基因工程的方法表达和制备为主，为了纯化方便，往往在自身抗原基因的序列后部(也可以根据需要设计在抗原序列中或序列前部)设计有表达标签序列，如(His)6、GST、Myc等。针对这些特点，我们设计了用抗蛋白表达标签抗体与人抗体交联的复合物或用抗蛋白表达标签的特异性抗体可变区与人抗体恒定区的嵌合抗体代替阳性血清用作诊断试剂的阳性标准品。含有人抗体或含有人抗体恒定区的抗标签抗体，因能够与带表达标签的抗原结合，所以该抗体复合物或嵌合抗体可以与用做检测人体针对某一种抗原产生的特异性抗体的水平时，可以作为阳性标准品替代来源于人体的阳性血清标准品或参照品。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题之一是提供一种可以替代阳性血清作为检测标准品或参照品、并且具有通用性的抗蛋白表达标签抗体或抗体复合物。本专利技术要解决的技术问题之二是提供所述抗蛋白表达标签抗体或抗体复合物的制备方法。本专利技术要解决的技术问题之三是将本专利技术蛋白表达标签抗体或抗体复合物应用于定量诊断检测方法中。为解决上述技术问题，本专利技术提供一种抗蛋白表达标签抗体，由抗蛋白表达标签的特异性抗体可变区和人免疫球蛋白恒定区通过基因工程的方式相嵌合并共表达。为解决上述技术问题，本专利技术还提供一种抗蛋白表达标签抗体复合物，由抗蛋白表达标签抗体与人免疫球蛋白通过化学交联剂进行交联所组成。为解决上述技术问题，本专利技术还提供抗蛋白表达标签抗体的制备方法，从分泌抗表达标签抗体的杂交瘤中克隆表达标签抗体的重链和轻链可变区基因，连接到人IgG CH-Fc段基因上，构建嵌合抗体。为解决上述技术问题，本专利技术还提供抗蛋白表达标签抗体复合物的制备方法，所述抗蛋白表达标签抗体可以通过单克隆抗体技术制备，也可以通过免疫学方法制备多克隆抗体。为解决上述技术问题，本专利技术还提供将抗蛋白表达标签抗体或抗体复合物作为代替阳性血清的诊断试剂标准品应用于定量诊断检测中。本专利技术由于在抗原后部或中部和前部添加了蛋白表达标签，使得抗体或抗体复合物可以与该标签结合，增加了抗体或抗体复合物的应用范围，一次制备即可应用于多种抗原的检测。附图说明图1是本专利技术抗蛋白表达标签抗体或抗体复合物及其制备方法和应用的实施例的标准曲线图。具体实施例方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细的说明。本专利技术的一种较佳实施例是制成用于肝肾微粒体(LKM-1)抗体自身免疫性肝炎诊断试剂盒。该试剂盒是用于定量测定病人血清中抗LKM-1 IgG型抗体的酶联免疫检测试剂盒。抗LKM-1 IgG型抗体的检测能够辅助诊断II型自身免疫性肝炎。LKM-1抗原一般通过基因工程方式获得，为了纯化方便，这些抗原在前期克隆时常设计带有表达标签，如组氨酸(His)和谷胱甘肽转移酶(GST)等。在96孔反应板上包被LKM-1抗原，将稀释后的待检血清和对照品阳性血清加入反应板孔中，如果被检血清中存在抗LKM-1抗原成分的抗体，经温育后，则血清中的特异性抗体与固相LKM-1抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。洗去未结合的抗体成分，加入酶标记抗人IgG抗体(抗人二抗)温育，固相抗原抗体复合物再与酶标记抗IgG抗体结合。洗去未结合的酶标抗体成分，再加入酶的底物。底物被酶催化成为有色产物，可以通过酶标仪检测读取标本和对照品阳性血清的颜色反应的数值。用不同滴度的阳性品对照血清，作出一条酶标仪检测颜色反应数值和对照品阳性血清抗LKM-1抗体滴度之间相互关联的标准曲线，根据待检血清酶标仪检测数值在标准曲线上的位置，就可以判断出待检血清中相应的抗LKM-1抗体水平。该诊断试剂盒中作为绘制标准曲线的标准品阳性血清，是试剂盒最关键的成分。目前标准品阳性血清取自抗LKM-1抗体水平增高的病人，这样会有很多问题。一是阳性血清是取自用已有诊断试剂盒检测抗LKM-1抗体水平增高的病人，现有诊断试剂盒阳性血清取自符合II型自身免疫性肝炎诊断标准的病人，而符合II型自身免疫性肝炎诊断标准的未必都有抗LKM-1抗体增加。二是病人阳性血清抗LKM-1抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗蛋白表达标签抗体，其特征在于：由抗蛋白表达标签的特异性抗体可变区和人免疫球蛋白恒定区通过基因工程的方式相嵌合并共表达，所述抗蛋白表达标签的特异性抗体可变区可以识别待检测抗原蛋白上的蛋白表达标签。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨子义，魏国兰，丁妍，陈文卓，司徒维娜，
申请(专利权)人：上海富纯中南生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]