本发明专利技术涉及在哺乳动物的体外检测由结核分枝杆菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）引起的感染的方法，以及体外区分明确由结核分枝杆菌引起感染的哺乳动物（主动形式）和被感染但无症状的哺乳动物（潜在形式）的方法，以及体外区分表现主动形式的肺结核的哺乳动物和未被结核分枝杆菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）感染或表现潜在形式的肺结核的哺乳动物的方法。本发明专利技术还涉及用于检测和区分表现肺结核症状的被感染哺乳动物和未发病的被感染哺乳动物的试剂盒，以及区分表现主动形式的肺结核的哺乳动物和未被结核分枝杆菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）感染或表现潜在形式的肺结核的哺乳动物的试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】利用HBHA来检测肺结核和由结核分枝杆菌(MYCOBACTERIUMTUBERCULOSIS)引起的感染本专利技术涉及哺乳动物由结核分枝杆菌引起的感染的体外检测方法，以及 体外区分明确由结核分枝杆菌引起感染的哺乳动物(主动形式)和被感染但无 症状的哺乳动物(潜在形式)的方法，以及体外区分表现主动形式的肺结核的哺 乳动物和未被结核分枝杆菌(Mtuberculosis)感染或表现潜在形式的肺结核的 哺乳动物的方法。本专利技术还涉及用于检测和区分表现肺结核症状的被感染哺 乳动物和未发病的被感染哺乳动物的试剂盒，以及区分表现主动形式的肺结 核的哺乳动物和未被结核分枝杆菌(Mtuberculosis)感染或表现潜在形式的肺结核的哺乳动物的试剂盒。肺结核是一种主要感染肺的细菌性疾病(肺结核);身体的其它部分也可能 被感染，例如淋巴结、胸膜肋膜的间隔)、关节、骨、生殖泌尿道、脑脊膜腹 膜、胃肠道、中枢神经系统、肾上腺或心包(肺外器官结核病)。肺结核是在空气中通过暴露于存在于传播疾病或与感染者相接触的哺乳 动物的唾液和肺的咳出物(例如当咳嗽或打喷嚏时)中的细菌来传播的。肺结核 的症状是发烧、盗汗、疲劳、减重、食欲不振和持续的咳嗽。在2004年，肺结核仍然表现为一种主要的公共卫生问题，因为其每年在 世界范围内导致超过二百万人死亡，是影响全世界人的第三大责任因素，结 核分枝杆菌，通常被称为Koch氏菌或KB。因而，肺结核是由传染病引起的第 二大死亡原因，仅排在由艾滋病毒感染之后(l)。因此，世界卫生组织和欧洲 共同体都已经在作为其优先发展的该领域中进行了研究。已经定义了三个基 本的目标a) 通过研制一种提供比现有疫苗BCG (Calmette和Guerin杆菌)更好预防的疫苗来进行预防；b) 改善肺结核快速诊断的方式；以及c) 发现便于实施的快速治疗方法，并因此避免多抗性的菌株的发展。已经将对于肺结核的新病例的缺乏检测确定为在世界范围内肺结核病例 数目增加的一个主要的原因(2)。显微镜检验和对痰的培养被认为是两种诊断 肺结核的好方法。但是，分枝杆菌培养的结果只能是在6到8周之后进行解 释，并且发展中国家不总是具备该方法所需要的基本设施，其大大地限制了 第一个目标诊断试验的培养的应用(3)。因此在痰中的多抗性的细菌鉴定仍然是肺结核的快速诊断的最有效的试验，但不幸的是鉴定仅在50%到60%的肺 结核病例中有效，其部分由于这样的事实需要在每ltd痰中5000到10000 个细菌该试验才是有效的(3)。对于儿童，诊断肺结核更加困难，当他们年轻 时，很少吐痰，通常收集他们胃中的吸出物。但是，在不到20%的被证明有 肺结核的孩子中该样品的全面检查是有效的，其比在成年人中所获得的结果 要低得多(4)。最后，在儿童中比在成年人中更频繁的额外肺结核诊断仍然难 以进行。它常常主要基于活组织的解剖学-病理检查。肺结核的传统的有机状 态是存在于干酪样坏死的肉芽肿中。该肉芽肿瘤由组织细胞、上皮样细胞和/ 或巨大胰岛类细胞所组成。但是，对于淋巴神经节和肺部样品，某些不同的 诊断都可以解释为感染性(非结核性的分枝杆菌、霉菌病等)或非感染性疾病 (伯克氏肉样瘤、Wegener氏病等)(5)。为了证实肺结核的诊断，必须通过进行 专门的染色来完成组织学检查，例如利用分枝杆菌肺结核的酒精-抗酸性的 Ziehl-Nielsen染色。但是，每毫米组织106个生物体的数量是获得正的 Ziehl-Nielsen染色所必需的。最后，诊断仍然常常基于一组临床的或放射性的材料，并且其依赖于对 结核菌素(纯化蛋白衍生物或PPD)的迟发过敏性的皮肤试验的结果。但是， 该最后试验不能容易地区分通过接种BCG感染结核分枝杆菌(M.m6wcw/wW 的个体和与周围的分枝杆菌交叉反应来表现其缺乏特异性。该基于细胞免疫 反应的证明的试验也在免疫缺乏个体中具有较低的灵敏度。最后，虽然其能 够确定在未进行预防接种的个体的人群中感染结核分枝杆菌(Mm^Kw/a^)的人，但是不幸的是其不能从正发病的个体中区分出表现潜在性结核(无症状) 的个体。事实上，仅5%到10。/。的感染结核分枝杆菌(AaM&rcw/oW力的个体发 病，而其他个体能预防该疾病即使他们受到感染(7)。该测试的实际用途是极 为有限的。近来，分子生物学技术己经发展到能够利用PCR(聚合酶链反应)技术来表现结核分枝杆菌(M.tuberculosis》的存在。该方法是灵敏的(95%)，但其对于 痰的样品尤其正确，对其的全面检查是正的。相反，其特异性极好(98%)，其 使结核分枝杆菌(M.tuberculosis)与其他的肺结核不同。但是，该方法花费较多， 限制了其应用。因此，它可能是研制快速诊断肺结核的新方法所急需解决的的问题。可 能的途径之一包括利用可能存在于未感染对象和感染的取决于其是否患病的 个体之间的在免疫应答上的差异。因此，基于用肺结核抗原来诱导在淋巴循 环中IFN-y的分泌的研究的不同的测试已在文献中进行了报道(8)。但是，由 结核菌素诱导的IFN-Y的分泌的分析，肺结核抗原的复杂混合物，具有与其 用于皮肤试验的相同的限制。事实上，所有活化个体，不论其是否患病，和 对于存在于某些非典型分支杆菌或仅在BCG中的抗原敏感的人都将产生应 答。该测试相对于皮肤试验的优势在于与正对照(植物凝血素)并列的淋巴应答 的分析可以检测到由于严重免疫缺陷而对PPD不作出应答的病人。然后将对 于结核分枝杆菌(M^^er^/加&)特异的抗原分离出来，并用于体外IFN，分泌 测试，所述测试的特异性明显更加突出。实质上，可能用到抗原ESAT-6和 CFPIO，但是必须指出由在患病的或健康的、被感染的对象之间的那些抗原 所得到的辨别仍然远远不够完美(9)。在人体中涉及"肝素结合血细胞凝集素"的免疫应答的研究显示了在患病 的或健康的、被感染的人之间的极好的辨别力。HBHA是一种粘合素，其在 细菌的表面上表达，形成分枝杆菌复合体的一部分，而不在非病原菌例如 M.tuberculosis的表面上表达(IO)。该蛋白质由结核分枝杆菌(M.tuberculosis)所 分泌，并引起该感染的传播(ll)。 HBHA具有甲基化的C末端区域，并在表 面上表达，而非甲基化的N末端部分锚定在分枝杆菌细胞壁的粘合素上(12)。 甲基化是重要的，不但能诱导人体内的免疫应答，而且能诱导老鼠体内的保 护性免疫反应(13)。已经显示了由体外HBHA刺激的IFN-y诱导分泌的差别 取决于感染结核分枝杆菌(M.tuberculosis)的人是否患病(14)。在大多数的健康 病人体内由周边的淋巴细胞分泌IFN-y来对HBHA应答，而仅有少数的结核 病患者通过分泌IFN-y来对其抗原应答。但是，在基于这些初步结果的这两 组个体之间的辨别力不满足于实施诊断试验。本专利技术的目的在于提供哺乳动物由结核分枝杆菌引起的感染的体外检测 方法。本专利技术的目的也在于提供在体外区分明确由结核分枝杆菌引起感染的哺 乳动物和被感染但未发肺结核病的哺乳动物的方法，并提供体外在健康群体中鉴定潜在TB病人的方法，并提供体外区分表现主动形式的肺结核的哺乳 动物和未被结核分枝杆菌(M/Wwcw/o^本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种体外用于检测和区分表现潜伏性结核的哺乳动物和表现活动性结核的哺乳动物的方法，所述的方法包括： ａ）从所述的哺乳动物中获得生物样品； ｂ）测定针对ＨＢＨＡ蛋白的两个截然不同的形式、并包含在所述生物样品中的抗体（ＩｇＧ）的数量； ｃ）比较获得自两种形式的ＨＢＨＡ蛋白的抗体的滴度，其中获得自表现潜伏性结核的哺乳动物的抗体的滴度的比较不同于获得自表现活动性结核的哺乳动物的抗体的滴度。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：卡米尔洛赫特，弗朗索瓦斯马斯卡尔，斯特凡那特默尔曼，让米歇尔乌加尔迪，萨米普拉斯，克里斯蒂安塞尔埃拉尔特，
申请(专利权)人：法国巴斯德研究所，法国国家健康与医学研究院，法语布鲁塞尔自由大学，里尔第二大学，
类型：发明
国别省市：FR[法国]
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