特异结合CD3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种特异结合CD3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用。该抗体包括重链和轻链，重链可变区具有重链构架区和三个重链互补区，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQ ID No.24‑29，该重链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列；轻链可变区具有轻链框架区和三个轻链互补区，三个轻链互补区的氨基酸序列如SEQ ID No.21‑23所示，该轻链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列。该抗体具有优异的CD3结合性能，良好的表达稳定性；经过人源化改造，具有较低的免疫副作用。

【技术实现步骤摘要】
特异结合CD3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用
本专利技术属于生物制药
，具体涉及一种特异结合CD3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用。
技术介绍
CD3蛋白是一种在T细胞上广泛存在的白细胞分化抗原，由γ、δ、ε、ζ和η五种肽链组成，其与T细胞受体(TCR)以非共价键的形式结合成TCR-CD3复合物(MatthewE.Call，JasonPyrdol，MartinWiedmann，KaiW.Wucherpfennig，2002，TheOrganizingPrincipleintheFormationoftheTCellReceptor-CD3Complex，Cell)。CD3具有稳定TCR-CD3复合物的作用，并且可以传递TCR特异性识别抗原的信号，促进T细胞的增殖与活化。而抗CD3抗体可引起TCR-CD3复合物的构象改变，在不需要第二信号的参与下即可直接产生T细胞活化信号，即通过CD3途径使用单克隆抗体可以有效地激活T细胞的增殖及活化，并因此释放细胞因子如TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-3和GM-CSF等，释放的这些细胞因子在肿瘤杀伤方面发挥着重要的作用，因此抗CD3单克隆抗体在20世纪90年代就被用于CIK细胞治疗。OKT3(OrthocloneOKT3)，商品名为Muromonab，是世界上第一个上市用于疾病治疗的鼠源单克隆抗体药物。OKT3与T细胞表面的CD3蛋白结合会导致T细胞的活化和细胞因子的释放(LarsKjer-Nielsen,MichelleA.Dunstone,LyudmilaKostenko,LaurenK.Ely,TravisBeddoe,NicoleA.Mifsud,AnthonyW.Purcell,AndrewG.Brooks,JamesMcCluskey,amieRossjohn,2004,CrystalstructureofthehumanTcellreceptorCD3εγheterodimercomplexedtothetherapeuticmAbOKT3,PNAS)。但OKT3是来源于小鼠的单克隆抗体，直接用于人类的疾病治疗会产生比较强的人抗鼠抗体(humananti-mouseantibody，HAMA)，在治疗过程中这种副作用也会变得越来越大，对OKT3抗体进行人源化改造变得十分必要。
技术实现思路
本申请的专利技术目的是提供一种特异结合CD3的抗体、抗原结合片段和单链抗体可变区片段及其应用。为实现上述专利技术目的，本申请的技术方案如下：一种特异结合CD3的抗体，包括重链和轻链，重链可变区具有重链构架区(Framework，FR)和三个重链互补区(complementarity-determiningregion，CDR)，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQIDNo.24-29，该重链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列；轻链可变区具有轻链框架区和三个轻链互补区，三个轻链互补区的氨基酸序列如SEQIDNo.21-23所示，该轻链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列。本申请以人源抗体为模板，将鼠源抗CD3抗体的CDR区移植到人源抗体上，并对移植后抗体氨基酸序列中特定位置的氨基酸位点进行突变，以确保移植后抗CD3抗体能够保持正确的空间构型，最终获得本申请的人CD3特异性抗体。实证研究发现，本申请的人CD3特异性抗体能够与Jurkat细胞有效结合，表明其具有优异的结合CD3蛋白的性能；人源化后抗体的免疫副作用会大大降低，稳定性增强，大大扩大了抗体的应用范围。在上述的特异结合CD3的抗体中，所述的重链构架区有四个，四个重链构架区的氨基酸序列选自SEQIDNo.1-6。在上述的特异结合CD3的抗体中，所述的轻链构架区有四个，四个轻链构架区的氨基酸序列选自SEQIDNo.7-20。在上述的特异结合CD3的抗体中，重链可变区具有如SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3和SEQIDNo.6所示的重链框架区，以及如SEQIDNo.24、SEQIDNo.25和SEQIDNo.26所示的重链互补区。在上述的特异结合CD3的抗体中，轻链可变区具有如SEQIDNo.9、SEQIDNo.13、SEQIDNo.19和SEQIDNo.20所示的轻链框架区，以及如SEQIDNo.21、SEQIDNo.22和SEQIDNo.23所示的轻链互补区。本申请中，该特异结合CD3的抗体的抗体亚型为IgG1、IgG2或IgG4。在上述的特异结合CD3的抗体中，重链中，铰链区、重链恒定区2和重链恒定区3的氨基酸序列如SEQIDNo.32所示。在上述的特异结合CD3的抗体中，重链中，重链恒定区1的氨基酸序列如SEQIDNo.30所示，轻链中，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQIDNo.31所示。基于特异结合CD3的抗体与人CD3蛋白的特异性结合能力，本申请提供了所述的特异结合CD3的抗体在制备肿瘤治疗药物中的应用，所述的肿瘤治疗药物用于治疗胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、膀胱癌，前列腺癌、宫颈癌、卵巢癌、输卵管癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、神经胶质瘤或骨肉瘤。在用于制备肿瘤治疗药物时，本申请的特异结合CD3的抗体可以单独使用，也可以与其他药物联用；并且，优选以注射制剂的形式给药。一种特异结合CD3的抗原结合片段，包括通过链间二硫键相连的重链恒定区1和轻链恒定区，该重链恒定区1与重链可变区相连，该轻链恒定区与轻链可变区相连，所述的重链可变区具有重链构架区和三个重链互补区，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQIDNo.24-29，该重链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列；所述的轻链可变区具有轻链构架区和三个轻链互补区，三个轻链互补区的氨基酸序列如SEQIDNo.21-23所示，该轻链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列。在上述的特异结合CD3的抗原结合片段中，所述的重链构架区有四个，四个重链构架区的氨基酸序列选自SEQIDNo.1-6；所述的轻链构架区有四个，四个轻链构架区的氨基酸序列选自SEQIDNo.7-20。在上述的特异结合CD3的抗原结合片段中，所述的重链可变区具有如SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3和SEQIDNo.6所示的重链框架区，以及如SEQIDNo.24、SEQIDNo.25和SEQIDNo.26所示的重链互补区；所述的轻链可变区具有如SEQIDNo.9、SEQIDNo.13、SEQIDNo.19和SEQIDNo.20所示的轻链框架区，以及如SEQIDNo.21、SEQIDNo.22和SEQIDNo.23所示的轻链互补区。在上述的特异结合CD3的抗原结合片段中，所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异结合CD3的抗体，包括重链和轻链，其特征在于，重链可变区具有重链构架区和三个重链互补区，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQ ID No

【技术特征摘要】
1.一种特异结合CD3的抗体，包括重链和轻链，其特征在于，重链可变区具有重链构架区和三个重链互补区，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQIDNo.24-29，该重链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列；
轻链可变区具有轻链框架区和三个轻链互补区，三个轻链互补区的氨基酸序列如SEQIDNo.21-23所示，该轻链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列。


2.如权利要求1所述的特异结合CD3的抗体，其特征在于，所述的重链构架区有四个，四个重链构架区的氨基酸序列选自SEQIDNo.1-6。


3.如权利要求1所述的特异结合CD3的抗体，其特征在于，所述的轻链构架区有四个，四个轻链构架区的氨基酸序列选自SEQIDNo.7-20。


4.一种特异结合CD3的抗原结合片段，包括通过链间二硫键相连的重链恒定区1和轻链恒定区，该重链恒定区1与重链可变区相连，该轻链恒定区与轻链可变区相连，其特征在于，所述的重链可变区具有重链构架区和三个重链互补区，三个重链互补区的氨基酸序列选自SEQIDNo.24-29，该重链构架区来自于人的抗体胚系基因序列或与人的抗体胚系基因序列具有至少90％同源性的基因序列；
所述的轻链可变区具有轻链构架区和三个轻链互补区，三个轻链互补区的氨基酸序列如SEQIDNo.21-23所示，该轻链构架区来自于人的抗体胚系基...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鹏，李艳，崔文俊，郜鹏，高位相，郭树华，
申请(专利权)人：瑞阳苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32